The invention discloses a preparation method of Flammulina velutipes lectin, is characterized by extraction, precipitation, dialysis, ion exchange chromatography, gel filtration process of Flammulina velutipes agglutinin, the preparation method of first fruiting body of Flammulina velutipes crushed, adding phosphate buffer low temperature extraction, then adding ammonium sulfate after centrifugal precipitation, dialysis, ion-exchange chromatography, SephadexG by ion DEAE 100 gel filtration and purification steps for Flammulina velutipes lectin. The Flammulina velutipes agglutinin obtained by the method provided by the invention has antibacterial activity and has many active components.
【技术实现步骤摘要】
一种金针菇凝集素的制备方法
本专利技术涉及生物技术中功能蛋白制备方法，具体地说，涉及一种金针菇凝集素的制备方法。
技术介绍
金针菇隶属于担子菌亚门、层菌纲、金针菇目、金针菇科、金针菇属（Russula）真菌，是一种美味的野生菌根性食药兼用真菌。该金针菇多年来一直是桂平畅销名产，成为人们馈赠亲朋好友的佳品。由于此菇生境特殊，目前尚未能人工栽培，野生金针菇的价格年年攀升，野生金针菇的开发与利用已成为国内外学者们的研究热点。凝集素一类具有特异糖结合活性的蛋白，具有一个或多个可以与单糖或寡糖特异可逆结合的非催化结构域，广泛存在于各种植物、动物、人体的组织器官、真菌和某些病毒中。凝集素最显著的特点是具有细胞凝集能力，不仅能凝集红细胞、肿瘤细胞、淋巴细胞、细菌、病毒等，还能特异性识别并结合细菌、病毒、肿瘤细胞表面的糖结构从而抵制其生长，因此凝集素被广泛用于病原菌的防治、肿瘤的治疗、含糖基生物大分子的检测等方面。金针菇含有丰富的营养物质和生物活性物质，目前国内外尚未发现有关金针菇凝集素的所道。而本专利技术通过浸提、沉淀、透析脱盐、离子交换层析、凝胶层析等过程获得了金针菇凝集素并...
【技术保护点】
一种金针菇凝集素的制备方法，其特征在于以下工艺步骤：凝集素粗品的提取：金针菇子实体称重、粉碎、加入少量的磷酸盐缓冲液，于高速组织捣碎机中捣碎，然后加入适量的磷酸盐缓冲液，于8℃中浸提49h，四层纱布过滤，滤液经12500r/min于4℃下离心41min，弃沉淀，收集上清液，加入固体硫酸铵至75%～80%饱和度，4℃下静默25h，于4℃下以12500r/min速度离心61min，收集沉淀物，加入少量的磷酸盐缓冲液溶解沉淀，透析除盐，检测凝血活性，冷冻干燥，得到金针菇凝集素粗制品；DEAE离子交换层析：取步骤（1）所得的金针菇凝集素粗制品，用磷酸盐缓冲液重新溶解，上样于DEAE...
【技术特征摘要】
1.一种金针菇凝集素的制备方法，其特征在于以下工艺步骤：凝集素粗品的提取：金针菇子实体称重、粉碎、加入少量的磷酸盐缓冲液，于高速组织捣碎机中捣碎，然后加入适量的磷酸盐缓冲液，于8℃中浸提49h，四层纱布过滤，滤液经12500r/min于4℃下离心41min，弃沉淀，收集上清液，加入固体硫酸铵至75%～80%饱和度，4℃下静默25h，于4℃下以12500r/min速度离心61min，收集沉淀物，加入少量的磷酸盐缓冲液溶解沉淀，透析除盐，检测凝血活性，冷冻干燥，得到金针菇凝集素粗制品；DEAE离子交换层析：取步骤（1）所得的金针菇凝集素粗制品，用磷酸盐缓冲液重新溶解，上样于DEAE-纤维柱，上样前柱材料先用磷酸盐缓冲液平衡三个柱体积，然后以含有0.5mol/LNaCl的pH值为7.1的磷酸缓冲液以流速为31ml/h速度洗脱，将活力峰部分收集，透析除盐，冷冻干燥；SephadexG-100凝胶层析：用蒸馏水平衡柱子，洗脱液为pH值为7.1的0...
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