一种用于富集副溶血性弧菌的免疫磁珠制备方法及应用技术

一种用于富集副溶血性弧菌的免疫磁珠制备方法及应用，磁流体经过适量活化剂(EDC)处理后与副溶血性弧菌抗体在合适的条件下进行偶联，形成副溶血性弧菌免疫磁珠(IMBV.P.)。将IMBV.P.加入待测样品中，在合适的条件下与副溶血性弧菌孵育，从而富集目标菌株。上述的副溶血性弧菌免疫磁珠可广泛应用于食品、农业用品、化妆品、养殖环境和临床等领域的副溶血性弧菌分离与检测。本发明专利技术将活化后的羧基磁珠结合副溶血性弧菌抗体应用于副溶血性弧菌免疫磁珠的制备，根据免疫磁珠分离原理可以达到有效富集检测副溶血性弧菌的目的。本方法高效快速，具有特异性好、灵敏度高、准确度高的特点。

Preparation and application of an immunomagnetic bead for enriching Vibrio parahaemolyticus

A preparation method and application of immunomagnetic beads for enrichment of Vibrio parahaemolyticus were carried out. After magnetic fluid was treated with a suitable activator (EDC), it was conjugated with the antibody of Vibrio parahaemolyticus under suitable conditions to form Vibrio parahaemolyticus immunomagnetic beads (IMBV.P.). IMBV.P. was added to the samples to be tested and incubated with Vibrio parahaemolyticus under suitable conditions to enrich the target strains. The above immunomagnetic beads of Vibrio parahaemolyticus can be widely applied to the isolation and detection of Vibrio parahaemolyticus in food, agricultural products, cosmetics, breeding environment and clinical fields. The invention applies the activated carboxyl magnetic beads combined with antibodies against Vibrio parahaemolyticus to the preparation of immunomagnetic beads of Vibrio parahaemolyticus, and can effectively enrich and detect the Vibrio parahaemolyticus according to the principle of immunomagnetic bead separation. This method has the characteristics of high specificity, high sensitivity and high accuracy.

【技术实现步骤摘要】
一种用于富集副溶血性弧菌的免疫磁珠制备方法及应用
本专利技术涉及一种免疫磁珠的制备方法，该制备方法用于分离致病性微生物副溶血性弧菌，包括副溶血性弧菌免疫磁珠的制备方法和应用方法。
技术介绍
免疫磁珠分离技术(Immunomagneticbead-basedseparation,IMS)是近年来发展起来的一项新的免疫学技术。免疫磁珠(Immunomagneticbead,IMB)既可结合活性蛋白质抗体，又可被磁铁吸引，经过处理后，可将抗体结合在磁珠上，使之成为抗体的载体，磁珠上抗体与特异性抗原物质结合后，则形成抗原一抗体一磁珠免疫复合物，这种复合物在磁力作用下，发生力学移动，使复合物与其它物质分离，而达到分离特异性抗原的目的。IMS是一个平台，凡是利用抗原抗体结合原理进行工作的领域都可以应用，并且已在医学和生物学的骨髓移植、分离干细胞、细胞器、癌细胞、激素、病原菌等方面取得了显著成绩。近年来IMS以其高度的敏感性和特异性被广泛应用于食品、水、生物样品、环境等标本中病原微生物的分离和检测工作中，显示出良好的开发应用前景。目前，副溶血性弧菌免疫磁珠的制备有初步的研究，一方面利用国外进口磁珠本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于富集副溶血性弧菌的免疫磁珠制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：步骤一：活化磁珠，采用活化剂EDC与磁珠在活化缓冲溶液中进行活化反应，室温条件下活化90min；步骤二：磁珠与抗体偶联，采用活化后的磁珠与副溶血性弧菌抗体在偶联缓冲液中偶联，室温条件下振荡26h，制备副溶血性弧菌免疫磁珠；步骤三：封闭免疫磁珠，免疫磁珠经洗涤缓冲液洗涤，采用封阻缓冲液封闭免疫磁珠，37℃作用1～2h或4℃过夜；步骤四：保存，制备好的副溶血性弧菌免疫磁珠存放于保存缓冲液中，4℃保存待用。

【技术特征摘要】
1.一种用于富集副溶血性弧菌的免疫磁珠制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：步骤一：活化磁珠，采用活化剂EDC与磁珠在活化缓冲溶液中进行活化反应，室温条件下活化90min；步骤二：磁珠与抗体偶联，采用活化后的磁珠与副溶血性弧菌抗体在偶联缓冲液中偶联，室温条件下振荡26h，制备副溶血性弧菌免疫磁珠；步骤三：封闭免疫磁珠，免疫磁珠经洗涤缓冲液洗涤，采用封阻缓冲液封闭免疫磁珠，37℃作用1～2h或4℃过夜；步骤四：保存，制备好的副溶血性弧菌免疫磁珠存放于保存缓冲液中，4℃保存待用。2.根据权利要求1所述的用于富集副溶血性弧菌的免疫磁珠的制备方法，其特征在于，所述活化剂EDC为1mg/mL；所述活化缓冲溶液为0.1MMES含0.05％吐温-20，pH6.0-6.5；所述偶联缓冲液为0.1MPBS含0.05％吐温-20，pH7.0-7.4；所述洗涤缓冲液为...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘阳，孙力军，刘文侠，施琦，杨嘉丽，邓旗，
申请(专利权)人：广东省湛江市质量计量监督检测所，
类型：发明
国别省市：广东,44