本发明专利技术公开了番石榴叶提取物在制备抗轮状病毒药物中的应用，所述的番石榴叶提取物中含有7‑15wt％的2α‑羟基齐墩果酸、20‑40wt％的2α‑羟基乌苏酸和6‑14wt％的积雪草酸，其由以下步骤制得：番石榴叶经乙醇或甲醇加热回流提取或渗滤提取，减压浓缩得到浸膏，浸膏加水搅拌，离心，取沉淀，得到番石榴叶提取物。本发明专利技术首次发现番石榴叶提取物中的2α‑羟基齐墩果酸、2α‑羟基乌苏酸和积雪草酸具有显著的抗轮状病毒效果，从而拓宽了番石榴叶提取物的药用用途。
Application of guava leaf extract in the preparation of anti rotavirus drugs
The present invention discloses the application of guava leaf extract in preparing anti rotavirus drugs, 2 alpha hydroxy asiatic acid and ursolic acid 6 14wt% guava leaf extract in the containing 7 15wt% 2 alpha hydroxy oleanolic acid, 20 40wt%, which prepared by the following steps guava leaves by ethanol or methanol refluxing extraction or leaching extraction, decompressing and concentrating to obtain extractum, extract water mixing, centrifugal, take the precipitation, guava leaf extract. The first discovery of guava leaf extract in 2 alpha hydroxy oleanolic acid, ursolic acid and 2 alpha hydroxy asiatic acid has significant anti rotavirus effect, so as to broaden the medicinal use of guava leaf extract.
【技术实现步骤摘要】
番石榴叶提取物在制备抗轮状病毒药物中的应用
本专利技术属于药物领域，具体涉及番石榴叶提取物在制备抗轮状病毒药物中的应用。
技术介绍
轮状病毒(Rotavirus，简称RV)是一种双链核糖核酸病毒，属于呼肠孤病毒科。它是婴儿与幼儿腹泻的单一主因，几乎世界上每个大约五岁的小孩都曾感染过轮状病毒至少一次。其主要感染小肠上皮细胞，从而造成细胞损伤，引起腹泻。轮状病毒每年在夏秋冬季流行，感染途径为粪-口途径，临床表现为急性胃肠炎，呈渗透性腹泻病。番石榴叶，为桃金娘科植物番石榴PsidiumguajavaL.的叶，具有燥湿健脾，清热解毒，涩肠止泻之功效。本申请专利技术人前期的工作发现番石榴叶具有降血糖作用，目前未见其具有抗轮状病毒功效的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供番石榴叶提取物在制备抗轮状病毒药物中的应用。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：番石榴叶提取物在制备抗轮状病毒药物中的应用；所述的番石榴叶提取物中含有7-15wt％的2α-羟基齐墩果酸、20-40wt％的2α-羟基乌苏酸和6-14wt％的积雪草酸；所述的番石榴叶提取物由以下步骤制得：番石榴(PsidiumguajavaL.)叶经乙醇或甲醇加热回流提取或渗滤提取，减压浓缩得到浸膏，浸膏加水搅拌，离心，取沉淀，得到番石榴叶提取物；所述的抗轮状病毒药物还包含可接受的辅料和其他起配伍协同作用的有效成分；所述的抗轮状病毒药物可以为各种剂型，如胶囊剂、片剂、粉剂、酒剂、混悬剂、乳剂、糖浆、气雾剂，或注射剂等。本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：1、本专利技术首次发现番石榴叶提取物中的2α-羟基齐墩果酸、2α-羟基乌苏酸和积雪草酸具有显著的抗轮状病毒效果，拓宽了番石榴叶提取物的药用用途。2、本专利技术的制备工艺简单、易于大规模生产，所得提取物中总三萜酸含量高达50％以上的优点。并且有效部位成分明确，毒性小，抗轮状病毒药理作用强，具有良好的药用前景。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。实施例1番石榴叶提取物的分离提取方法，包含如下步骤：取干燥的番石榴叶(产于广东从化)粉碎，用95％(体积浓度)乙醇渗滤提取，滤出提取液，减压浓缩、干燥得浸膏；番石榴叶与乙醇的用量比为1g:(8～15)mL；浸膏加水搅拌，离心，取沉淀，得到番石榴叶提取物。将得到的番石榴叶提取物上大孔吸附树脂柱，先用体积浓度为0～10％的乙醇洗脱除杂；再用体积浓度为60～80％的乙醇洗脱，收集洗脱液；洗脱液中2α-羟基齐墩果酸、2α-羟基乌苏酸以及积雪草酸的含量采用液相色谱进行测定；以2α-羟基齐墩果酸、2α-羟基乌苏酸以及积雪草酸为标准物质，采用外标法测定；其中液相色谱进行测定条件为：色谱柱为AgilentCosmosil-C18柱(4.6×250mm,5μm)，流动相为甲醇-0.1％甲酸水溶液(86:214)，流速1.0ml/min，柱温30℃，采用Agilent1200SeriesHPLC泵，Agilent1200Series自动进样器，紫外光检测器。其中2α-羟基齐墩果酸、2α-羟基乌苏酸以及积雪草酸的保留时间分别为12.9、14.1、6.0min。经过计算和换算，番石榴叶提取物中含有9.1wt％的2α-羟基齐墩果酸，29.6wt％的2α-羟基乌苏酸，7.0wt％的积雪草酸。实施例2以不同批次的番石榴叶(产于广东从化)分离提取番石榴叶提取物，方法同实施例1，并以实施例1相同的方法检测其中2α-羟基齐墩果酸、2α-羟基乌苏酸以及积雪草酸的含量。经过测定、计算和换算，所得番石榴叶提取物中含有8.7wt％的2α-羟基齐墩果酸，28.9wt％的2α-羟基乌苏酸，6.9wt％的积雪草酸。实施例3以不同批次的番石榴叶(产于广东从化)分离提取番石榴叶提取物，方法同实施例1，并以实施例1相同的方法检测其中2α-羟基齐墩果酸、2α-羟基乌苏酸以及积雪草酸的含量。经过测定、计算和换算，所得番石榴叶提取物中含有9.3wt％的2α-羟基齐墩果酸，31.2wt％的2α-羟基乌苏酸，7.3wt％的积雪草酸。实施例4以不同批次的番石榴叶(产于广东从化)分离提取番石榴叶提取物，方法同实施例1，并以实施例1相同的方法检测其中2α-羟基齐墩果酸、2α-羟基乌苏酸以及积雪草酸的含量。经过测定、计算和换算，所得番石榴叶提取物中含有8.5wt％的2α-羟基齐墩果酸，28.1wt％的2α-羟基乌苏酸，6.8wt％的积雪草酸。实施例5以不同批次的番石榴叶(产于广东从化)分离提取番石榴叶提取物，方法同实施例1，并以实施例1相同的方法检测其中2α-羟基齐墩果酸、2α-羟基乌苏酸以及积雪草酸的含量。经过测定、计算和换算，所得番石榴叶提取物中含有9.6wt％的2α-羟基齐墩果酸，33.2wt％的2α-羟基乌苏酸，7.4wt％的积雪草酸。实施例6实施例1-5所得番石榴叶提取物的抗轮状病毒效果测试，采用空斑减数实验法，具体方法为：(1)HEp-2细胞接种于24孔细胞培养板中，细胞密度为2×105cell/mL，1mL/孔，置于37℃，5％CO2培养箱中培养，约20h长成细胞单层。(2)每孔加入约60～80PFU/mL轮状病毒悬液100μL，不同浓度药物100μL，同时设置细胞对照组和病毒对照组；置于37℃，5％CO2培养箱中培养2h。每15min十字交叉轻轻摇晃，使病毒均匀充分的吸附并穿入细胞。(3)待病毒吸附2h后，吸弃病毒液，PBS洗涤2次，各孔加入0.5mL琼脂糖凝胶覆盖液，待覆盖液凝固后，加入0.5mL对应浓度的药物，细胞对照组和病毒对照组加入等体积的维持液。(4)将24孔板置于细胞培养箱中培养4～5d后，加入10％甲醛固定过夜，弃去琼脂糖凝胶后，1％结晶紫染色30min，自来水轻轻冲洗24孔培养板，晾干并统计空斑数。计算样品的空斑抑制率，进而计算出半数抑制浓度IC50。空斑抑制率＝[(病毒组的空斑数－药物组的空斑数)/病毒组的空数]×100％按照上述方法测试以下药物组的抗轮状病毒活性：药物组1：单独使用2α-羟基齐墩果酸；药物组2：单独使用2α-羟基乌苏酸；药物组3：单独使用积雪草酸；实验组4：使用2α-羟基齐墩果酸、2α-羟基乌苏酸和积雪草酸按重量比3:5:1组成的组合物；实验组5：使用2α-羟基齐墩果酸、2α-羟基乌苏酸和积雪草酸按重量比1:3:3组成的组合物；实验组6：使用2α-羟基齐墩果酸、2α-羟基乌苏酸和积雪草酸按重量比1:3:1组成的组合物；实验组7：使用实施例1制备得到的番石榴叶有效部位；实验组8：使用实施例2制备得到的番石榴叶有效部位；实验组9：使用实施例3制备得到的番石榴叶有效部位；实验组10：使用实施例4制备得到的番石榴叶有效部位；实验组11：使用实施例5制备得到的番石榴叶有效部位；实验组12：病毒唑。各实验组的抗轮状病毒测试结果见表1。表1.抗轮状病毒活性IC50测试结果从表1实验组1～3实验数据中可以看出，2α-羟基齐墩果酸、2α-羟基乌苏酸和积雪草酸显示出一定的抗轮状病毒活性，其抗轮状病毒活性与病毒唑的活性相当；这说明组合物中只要含有2α-羟基齐墩果酸、2α-羟基乌苏酸和积雪草酸均具有抗轮状病毒活性。从表1实验组4～6实验数据中可以看出，当2α-羟基齐墩果酸、2α本文档来自技高网...
【技术保护点】
番石榴叶提取物在制备抗轮状病毒药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.番石榴叶提取物在制备抗轮状病毒药物中的应用。2.根据权利要求1所述的番石榴叶提取物在制备抗轮状病毒药物中的应用，其特征在于：所述的番石榴叶提取物中含有7-15wt％的2α-羟基齐墩果酸、20-40wt％的2α-羟基乌苏酸和6-14wt％的积雪草酸。3.根据权利要求1所述的番石榴叶提取物在制备抗轮状病毒药物中的应用，其特征在于：所述的番石榴叶提取物由以下步骤制得：番石榴叶经乙醇或甲醇加热回流...
【专利技术属性】
技术研发人员：张晓琦，叶文才，李药兰，张庆文，张建，高美华，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：广东,44
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。