抗氧剂组合物及其制备方法技术

一种抗氧剂组合物，它可以通过（ａ）向牡蛎肉的热水分离物中以不低于４０（ｗ／ｗ）％的最终浓度加入乙醇得到上清液（步骤１），（ｂ）将所得上清液浓缩至含３０－４５（ｗ／ｗ）％固体成分（步骤２），及（ｃ）向其中加入乙醇至最终浓度为５５－７０（ｗ／ｗ）％以回收沉淀物（步骤３）来有效高产地制备。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种得自牡蛎肉热水提取物的。氧暴露于紫外线或辐射时会产生具有强毒性的被称为活性氧的超氧阴离子自由基。它转化为过氧化氢或羟基自由基并在人体中引起多种氧化紊乱。据信所述机理可引起包括老化和肿瘤形成等多种疾病。人体中的抗氧剂酶如超氧化物歧化酶(SOD)和抗氧剂物质愈来愈被认为能对这种氧化紊乱起关键的保护生物的作用。此外，由食物中摄入的抗氧剂物质因其在预防氧化紊乱中的潜在的重要作用而成为人们注意的焦点。另外，由于含有大量的牛磺酸、糖元、蛋白质和其它可利用物质，牡蛎肉也被称为“海里的牛奶”(milk in the sea)。对牡蛎肉成分的研究和调查结果表明，按照本专利技术通过调整乙醇分离期间乙醇浓度和固体含量可以得到含有高纯度的得自牡蛎肉的优越的抗氧剂组合物。因此，本专利技术提供了如下内容。(1)一种制备抗氧剂组合物的方法，其中包括如下步骤(a)向牡蛎肉的热水分离物中以不低于40(w/w)％的最终浓度加入乙醇得到上清液(步骤1)；(b)将所得上清液浓缩至含30-45(w/w)％固体成分(步骤2)；及(c)向其中加入乙醇至最终浓度为55-70(w/w)％以回收沉淀物(步骤3)。(2)上述(1)的方法，其中包括在进行步骤(c)前将上清液pH调至3或3以下。(3)上述(1)或(2)的方法，其满足至少一个以下要求(i)在步骤1中乙醇的最终浓度为40-50(w/w)％，(ii)在步骤2中固体成分含量为35-40(w/w)％，且(iii)步骤3中乙醇的最终浓度约为60(w/w)％。(4)一种抗氧剂组合物，其特征在于具有以下特点(i)含有分子量为1000-5000的物质(ii)UV吸收光谱(见附图说明图1)λmax(水溶液)267.5nm和198nm(iii)茚三酮反应阳性(iv)主要成分低分子量肽(v)溶解性水溶性(vi)颜色暗棕色(5)上述(4)的抗氧剂组合物，其中按照包括如下步骤的方法来制备(a)向牡蛎肉的热水分离物中以不低于40(w/w)％的最终浓度加入乙醇得到上清液(步骤1)；(b)将所得上清液浓缩至含30-45(w/w)％固体成分(步骤2)；及(c)向其中加入乙醇至最终浓度为55-70(w/w)％以回收沉淀物(步骤3)。(6)上述(5)的抗氧剂组合物，其中通过进一步包括将上清液的pH在进行步骤(c)前调至3或3以下的方法来制备。(7)上述(5)或(6)的抗氧剂组合物，其满足至少一个以下要求(i)在步骤1中乙醇的最终浓度为40-50(w/w)％，(ii)在步骤2中固体成分含量为35-40(w/w)％，且(iii)步骤3中乙醇的最终浓度约为60(w/w)％。图1为本专利技术的抗氧剂组合物的UV吸收光谱。在本专利技术中，例如，通过向牡蛎肉中加入热水并除去沉淀物得到上清液来制备牡蛎肉的热水分离液。在本专利技术中，作为起始物的牡蛎肉，只要能保持上述抗氧剂活性，在其形式上并不受特别的限定，并可以是生的、冷冻的或通过干燥和磨碎的牡蛎肉制备的粉末。热水分离使用的热水的温度一般为50-90℃，优选约70-80℃，提取时间一般为2至3小时。由于所述上清液一般含有约4-5(w/w)％的固体成分，优选通过浓缩将固体成分含量调至20-40(w/w)％。背离此范围则不能有效地沉淀蛋白质、糖类等。已知乙醇能通过改变溶剂极性，即通过改变疏水和亲水程度引起沉淀。在本专利技术步骤1中，用乙醇提取通过热水分离得到的上清液，乙醇的最终浓度不低于40(w/w)％，优选约40-50(w/w)％。当乙醇的最终浓度低于40(w/w)％时，不能充分分离抗氧剂活性所不需的高分子量蛋白质和糖类。此外，所得上清液和沉淀物的抗氧剂活性几乎是相同的。当最终浓度超过50(w/w)％时，乙醇分离的效果达到饱和。分离时间一般为1-24小时，优选5-12小时。在本专利技术步骤2中，不同的固体含量导致了不同的分子间作用力。较强的或较弱的分子间的结合带来不同的沉淀。当固体含量降低时，离子作用力降低便产生较低分子间作用力和较少量的沉淀。在本专利技术步骤2中，将通过上述乙醇分离的上清液浓缩至固体含量为30-45(w/w)％，优选35-40(w/w)％。当固体含量低于30(w/w)％时，沉淀量降低，于是沉淀物的抗氧剂活性也降低。当固体含量高于45(w/w)％时，沉淀中含有抗氧剂活性不需要的杂质，沉淀的特异性抗氧剂活性降低。通过，例如，加热浓缩、膜渗浓缩、冷冻浓缩等方法将上清液浓缩，特别优选减压下加热浓缩。通过使用白利糖度仪如Atago Corp制造的手动屈光仪以白利糖度(糖浓度)表示来测定固体含量。将上述浓缩液体的pH调至3或3以下，优选约3。一般通过加入酸如盐酸和枸橼酸来调节pH。蛋白质和肽在等电pH条件下容易沉淀，当pH高于3时，导致沉淀量降低。pH调节后，向上述溶液中加入乙醇，使乙醇的最终浓度为55-70(w/w)％，优选约60(w/w)％，并将混合物离心分离而回收沉淀物。所述沉淀物含有高浓度并具有抗氧剂活性的抗氧剂组合物。当乙醇的最终浓度低于55(w/w)％时，抗氧剂组合物的产率降低，使所得沉淀和上清液之间的抗氧剂活性几乎没有差别。当它高于70(w/w)％时，沉淀量增加，同时不需要的污染物也增加，特异性抗氧剂活性变得不好。这样得到的抗氧剂组合物除其抗氧剂活性外还具有如下性质(i)含有分子量为1000-5000的物质(ii)UV吸收光谱(见图1)λmax(水溶液)267.5nm，198nm(iii)茚三酮反应阳性(iv)主要成分低分子量肽(v)溶解性水溶性(vi)颜色暗棕色通过已知方法确定上述性质。具体地讲，根据加入乙醇分离时沉淀的出现或不出现推断分子量。用常用的吸光测定仪测定UV光谱。按照日本药典(Japanese Pharmacopoeia)规定的方法观察水中的溶解度和颜色。通过各组份特异的颜色反应、常规使用的定性和定量反应可以确定主要组份。茚三酮反应可确定蛋白质、多肽、氨基酸等，并可通过高效液相色谱确定肽的存在。通过实施例更详细地描述本专利技术，而不应看作对本专利技术的限制。实施例1将水(50g)加入冷冻的生牡蛎(50g)中，并将混合物在80-90℃加热2-3小时来进行热水提取，以1500rpm(Hitachi，Ltd.)离心10分钟。通过加热将所得上清液浓缩至固体含量为20至40(w/w)％。向所得浓缩液体中以最终浓度40(w/w)％加入乙醇，放置12小时后，将混合物以3000rpm离心(Hitachi，Ltd.)10分钟得到一种上清液(步骤1)。使用旋转蒸发器在50℃下加热减压浓缩上清液至固体含量为37(w/w)％(步骤2)。向所得上清液中加入0.1M盐酸调节pH至3。向所述溶液中加入乙醇，其间调节固体浓度和pH至最终浓度60(w/w)％。放置12小时后，以3000rpm(Hitachi，Ltd.)将混合物离心10分钟以抗氧剂组合物的形式收集所得的沉淀物(步骤3)。按照以下步骤检测所得沉淀物的性质(i)根据以下事实用60(w/w)％乙醇分离经40(w/w)％乙醇分离牡蛎肉的热水提取物得到的上清液制得沉淀物，推断此馏份含有大量分子量为1000-5000的物质。(ii)将小量所得沉淀物的一小部分溶解于水中并用UV-2400PC(SHIMADZUCORPORATION)测定其UV吸收光本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备抗氧剂组合物的方法，其中包括以下步骤：（ａ）向牡蛎肉的热水分离物中以不低于４０（ｗ／ｗ）％的最终浓度加入乙醇得到上清液（步骤１）；（ｂ）将所得上清液浓缩至含３０－４５（ｗ／ｗ）％固体成分（步骤２）；及（ｃ）向其中加入乙醇 至最终浓度为５５－７０（ｗ／ｗ）％以回收沉淀物（步骤３）。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：野村光义，太田隆男，小山宪一，松田芳和，
申请(专利权)人：日本门诊株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]