一种细胞凋亡双色检测和成像探针及其应用制造技术

本发明专利技术涉及细胞凋亡双色检测和成像探针及其应用。本发明专利技术以荧光标记的细胞色素c核酸适配体和caspase‑3底物多肽序列为识别元件,以金纳米颗粒为荧光能量受体，在其表面共价修饰响应分子，通过能量转移过程同时淬灭两种荧光染料的荧光。在无目标时，染料荧光被淬灭。目标分子存在时，细胞色素c与其适配体结合，caspase‑3水解其底物多肽，使荧光染料远离金纳米颗粒表面，产生荧光信号，实现细胞色素c和caspase‑3的检测和成像。本发明专利技术探针合成简便、灵敏度高、选择性好，可同时检测两种细胞凋亡相关生物标志物，本发明专利技术可有效应用于细胞凋亡成像检测及细胞凋亡药物评价。

A double color detection and imaging probe for apoptosis and its application

The present invention relates to apoptosis dual color detection and imaging probes and their applications. The present invention with fluorescence labeled cytochrome c aptamer and caspase 3 substrate peptide sequences as recognition element, with gold nanoparticles as fluorescence energy receptor on the surface of covalent molecular response, transfer fluorescence quenching process and two kinds of fluorescent dyes by energy. When the target is not, the dye fluorescence is quenched. The target molecule exists, cytochrome c and its binding aptamers, caspase hydrolysis of 3 substrate peptides, the fluorescent dye from the surface of gold nanoparticle, fluorescence signal, implementation of cytochrome c and caspase 3 detection and imaging. The probe has the advantages of simple synthesis, high sensitivity and good selectivity, and can simultaneously detect two kinds of cell apoptosis related biomarkers. The invention can be effectively applied to the detection of apoptosis imaging and the evaluation of apoptosis drugs.

【技术实现步骤摘要】
一种细胞凋亡双色检测和成像探针及其应用(一)
本专利技术涉及一种细胞凋亡双色检测和成像探针及其应用，属于生物分析技术和纳米医学领域。(二)
技术介绍
细胞凋亡是一种程序化细胞死亡，在多细胞生物体的发育、体内平衡及免疫等方面中具有重要作用。通常，细胞凋亡的调节失衡会引起多种病理过程发生，如自体免疫失调、退行性病变、癌症等。所以，实时检测和监视生物体凋亡过程在研究凋亡信号、评估某些疾病过程、开发凋亡相关药物具有重要意义。细胞凋亡的生物学变化特征主要有磷脂酰丝氨酸(PS)的膜联蛋白外露、线粒体释放细胞色素c(Cytc)、DNA片段化、半胱天冬酶(caspase)激酶家族的活化等。目前，对于检测细胞凋亡的方法有电化学法、高效液相色谱法、比色法、荧光法等。其中，荧光法具有高灵敏度、非破坏性、操作简单等优点。近来，有多种有机探针被开发用于细胞凋亡检测，尽管取得良好效果，但是大部分有机探针合成及纯化步骤较多，成本较高，限制了其应用。也有一些荧光纳米材料如量子点、金纳米簇、石墨烯等被开发用于细胞凋亡检测。但是这些方法都是针对单一目标进行检测，如对细胞色素c或者caspase-3蛋白酶的检测。同时针对本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种细胞凋亡双色检测和成像探针，其检测目标为细胞色素c和半胱天冬酶‑3，其特征在于所述探针由金纳米颗粒表面共价修饰细胞色素c和半胱天冬酶‑3响应分子获得；所述细胞色素c响应分子为荧光染料标记的细胞色素c核酸适配体，所述半胱天冬酶‑3响应分子为荧光染料标记的响应caspase‑3多肽序列，所述细胞色素c核酸适配体序列为5’‑CCGTGTCTGGGGCCGACCGGCGCATTGGGTACGTTGTTGC‑3’，所述caspase‑3多肽序列为CALNNDEVD，所述荧光染料为FITC、Cy3、Cy5或罗丹明衍生物。

【技术特征摘要】
1.一种细胞凋亡双色检测和成像探针，其检测目标为细胞色素c和半胱天冬酶-3，其特征在于所述探针由金纳米颗粒表面共价修饰细胞色素c和半胱天冬酶-3响应分子获得；所述细胞色素c响应分子为荧光染料标记的细胞色素c核酸适配体，所述半胱天冬酶-3响应分子为荧光染料标记的响应caspase-3多肽序列，所述细胞色素c核酸适配体序列为5’-CCGTGTCTGGGGCCGACCGGCGCATTGGGTACGTTGTTGC-3’，所述caspase-3多肽序列为CALNNDEVD，所述荧光染料为FITC、Cy3、Cy5或罗丹明衍生物。2.如权利要求1所述的探针，其特征在于所述金纳米颗粒为球形金纳米颗粒、星形金纳米颗粒、棒状金纳米颗粒或壳状金纳米颗粒，其尺寸为5～500纳米。3.如权利要求1所述的探针，其特征在于所述共价修饰方法为金-巯键结合的盐老化法。...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘景丰，刘小龙，张晓龙，廖乃顺，郑爱仙，曾永毅，
申请(专利权)人：福建医科大学孟超肝胆医院，
类型：发明
国别省市：福建,35