一种松针黄酮组装抗癌药物、制备方法及应用技术

本发明专利技术属于抗癌药物制备技术领域，具体公开了一种松针黄酮组装抗癌药物、制备方法及应用。本发明专利技术的方法利用松针黄酮、氧化石墨烯和叶酸制备出抗癌药物，包括组装Fe3O4‑氧化石墨烯、组装叶酸‑Fe3O4‑氧化石墨烯、组装松针黄酮‑叶酸‑氧化石墨烯纳米药物等步骤，制备出的药物可以抑制多种癌细胞的活性，为松针黄酮、氧化石墨烯和叶酸几种物质在抗癌药物制备中的应用奠定基础。

An anticancer drug containing flavonoids from pine needles, preparation method and Application

The present invention belongs to the field of preparation technology of anticancer drugs, and discloses a kind of anticancer drug of pine needle flavone assembled, and its preparation method and application. The method of the invention, the use of pine needle flavonoids graphene oxide and folic acid prepared by anticancer drugs, comprising the steps of assembling Fe3O4 graphene oxide, folic acid Fe3O4 assembly of graphene oxide, assembled folic acid pine needle flavonoids graphene oxide nano drug, drug prepared can inhibit a variety of cancer cell activity, which the foundation for the application of pine needle flavonoids, graphene oxide and folic acid in several substances in the preparation of anticancer drugs.

【技术实现步骤摘要】
一种松针黄酮组装抗癌药物、制备方法及应用
本专利技术属于抗癌药物制备
，具体涉及一种松针黄酮组装抗癌药物、制备方法及应用。
技术介绍
胃癌在我国各种恶性肿瘤中居首位，近年来由于食品安全、饮食习惯、生活压力增大等原因造成该病发病率、死亡率居高不下，给患者生活带来极大痛苦。目前胃癌治疗主要是手术治疗切除病灶部位和化疗放疗，对人体伤害极大。研究表明植物活性成分黄酮类化合物可通过抗氧化、激素调节、抑制肿瘤细胞增殖和转移、促进肿瘤细胞分化和凋亡等途径发挥抗肿瘤作用，疗效确切。松针黄酮可诱导胃癌细胞凋亡，阻断细胞周期，清除胃癌自由基、活性氧簇，抑制胃癌转移；石墨烯作为一种纳米材料，氧化石墨烯作为石墨烯氧化物，本身具芳香结构，可通过共价键结合或氢键结合吸附、负载和自身结构类似的芳香药物。纳米氧化石墨烯可被细胞吸收，没有明显的细胞毒性。游离叶酸和叶酸偶联物都可以通过叶酸受体介导的胞吞作用进入细胞内，可以作为某些载体材料后装载抗癌药物。因此，叶酸修饰的氧化石墨烯的制备是一种很有前途的靶向抗癌药物载体。然而现有技术更多的是分开松针黄酮、氧化石墨烯和叶酸的作用机理，并未发现松针黄酮-叶酸-氧化石墨烯组装的松针黄酮组装抗癌药物和相关研究，影响了松针黄酮、氧化石墨烯和叶酸在胃癌疾病药物制备中的应用。
技术实现思路
本专利技术提供的一种松针黄酮组装抗癌药物、制备方法及应用，为松针黄酮、氧化石墨烯和叶酸在胃癌疾病药物制备中的应用提供了新方法。本专利技术目的是提供一种松针黄酮组装抗癌药物的制备方法，包括以下步骤：S1，制备松针黄酮；S2，制备氧化石墨烯；S3，组装松针黄酮-叶酸-氧化石墨烯纳米药物S31，组装Fe3O4-氧化石墨烯将氧化石墨烯、三甘醇和0.50mol/L乙酰丙酮铁溶液按照25mg:6ml:3mL的比例混合，超声，N2保护下回流反应；然后向反应物中加入无水乙醇，无水乙醇与乙酰丙酮铁溶液的体积比例为20:3，磁性分离出沉淀物；然后以乙醇洗涤沉淀物，烘干，得Fe3O4-氧化石墨烯；S32，组装叶酸-Fe3O4-氧化石墨烯将Fe3O4-氧化石墨烯、蒸馏水、NaOH和NaClO按照25mg:25mL:1g:1g的比例混合，超声1-2h；以1mol/L的稀盐酸中和，离心，收集上层液；以蒸馏水和截留分子量2000Da的透析袋透析上层液20-24h，收集透析袋内的透析液；按照0.1g:20mL的比例将叶酸加入透析液中，超声，加入氮-羟基琥珀酰亚胺和1-乙基-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺，超声0.5-1h，得到叶酸-Fe3O4-氧化石墨烯粗品溶液，其中氮-羟基琥珀酰亚胺、1-乙基-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺与叶酸的质量比例为100:50:30；将叶酸-Fe3O4-氧化石墨烯粗品溶液用1mol/L的NaHCO3溶液和截留分子量2000Da的透析袋透析24h，收集透析袋内透析液，离心，收集沉淀，以丙酮洗涤沉淀，干燥，得到叶酸-Fe3O4-氧化石墨烯；S33，组装松针黄酮-叶酸-氧化石墨烯纳米药物将叶酸-Fe3O4-氧化石墨烯分散在磷酸盐缓冲液中，加入2mg/ml的松针黄酮溶液，避光搅拌20-24h，离心，收集下层溶液，干燥，得到松针黄酮-叶酸-氧化石墨烯纳米药物，该松针黄酮-叶酸-氧化石墨烯纳米药物即为松针黄酮组装抗癌药物。优选的，上述松针黄酮组装抗癌药物的制备方法，S1中，制备松针黄酮的具体步骤如下：将新鲜松针晾干或干燥，粉碎得到松针粉；向松针粉中加入相当于松针粉20-30倍质量的75％乙醇，85℃回流提取3次，其中每次回流提取1h，合并3次提取液，过滤得总提取液；将总提取液在0.08MPa旋转蒸发，浓缩得到相对密度1.10的浸膏；向浸膏中加入相当于浸膏5倍质量的水，40KHz、50℃超声溶解，4000r/min离心分离，收集得到黄酮提取液；用大孔树脂HPD450提纯黄酮提取液，收集的洗脱液经减压旋蒸浓缩、干燥得松针黄酮。优选的，上述松针黄酮组装抗癌药物的制备方法，S31中，超声的条件为600W、40-50℃超声3-5min；烘干温度为70℃。优选的，上述松针黄酮组装抗癌药物的制备方法，S32中，离心的条件6000r/min离心4min；干燥条件为40℃下真空干燥48h。优选的，上述松针黄酮组装抗癌药物的制备方法，S33中，磷酸盐缓冲液为0.1mol/LpH6.86的磷酸盐缓冲液。优选的，上述松针黄酮组装抗癌药物的制备方法，S33中，叶酸-Fe3O4-氧化石墨烯、磷酸盐缓冲液、2mg/ml的松针黄酮溶液的比例为0.05g:20mL:1mL。本专利技术的第二个目的是提供一种松针黄酮组装抗癌药物的制备方法制备而成的松针黄酮组装抗癌药物。本专利技术的第三个目的是提供一种松针黄酮组装抗癌药物的制备方法在制备抗胃癌药物、抗肝癌细胞药物、抗乳腺癌细胞药物或者抗肺癌细胞药物中的应用。本专利技术的第四个目的是提供一种松针黄酮组装抗癌药物制备抗胃癌药物、抗肝癌细胞药物、抗乳腺癌细胞药物或者抗肺癌细胞药物中的应用。与现有技术相比，本专利技术提供的一种松针黄酮组装抗癌药物及制备方法，具有以下有益效果：(1)大量现有研究表明，由于黄酮成分为多羟基酚酸类成分，进入人体促氧化产生毒性或体内酶灭活作用而大大降低抗癌活性，直接服用植物提取的总黄酮粉会使造成不良反映多、活性低的弱点。松针黄酮中总黄酮的含量达10-15％左右，并且我们以MTT法检测实施例制备的松针黄酮对荷瘤小鼠细胞的抑制活性，最高抑制率达75-80％。(2)氧化石墨烯作为石墨烯氧化物，本身具芳香结构，可通过共价键结合或氢键结合吸附、负载和自身结构类似的芳香药物。另外，氧化石墨烯具有良好的生物相容性。使用放射性示踪剂并结合生物分析方法，证明在小鼠各种器官中，胃部滞留的最多，且时间较长，停留15天小鼠脏器没有显著性病理异常。纳米氧化石墨烯可被细胞吸收，没有明显的细胞毒性，对一些芳香类的小分子药物具有超强的吸附能力。本专利技术以氧化石墨烯作装载松针黄酮，保护黄酮成分在体内不易氧化；利用氧化石墨烯胃部聚集特点，同时嵌入Fe3O4与微波产生瞬间药物遥控释放，达到定位、快速释放，对胃癌治疗产生靶向、多重效应。(3)游离叶酸和叶酸偶联物都可以通过叶酸受体介导的胞吞作用进入细胞内。大部分恶性肿瘤细胞表面均有叶酸受体的过度表达，正常细胞表面很少表达。叶酸修饰某些载体材料后装载抗癌药物，可以和肿瘤细胞表面高度表达的叶酸受体靶向性结合，增大肿瘤药物浓度，减少正常细胞毒性。因此，叶酸修饰的氧化石墨烯的制备是一种很有前途的靶向抗癌药物载体。本专利技术制备的抗癌药物可以抑制多种癌细胞的活性，有利于基于氧化石墨烯组装药物和药物突释技术，研究其影响抑制胃癌细胞作用通路的机制，进而探寻黄酮复合纳米药物的抗癌机制。为松针黄酮、氧化石墨烯和叶酸几种物质在抗癌药物制备中的应用奠定基础。附图说明图1是本专利技术实施例1中松针黄酮和松针黄酮组装抗癌药物抑制肿瘤细胞IC50值比较图；其中，每种细胞左边条形柱代表松针黄酮，右边的条形柱代表松针黄酮组装抗癌药物。具体实施方式下面结合具体附图和实施例对本专利技术进行详细说明，但不应理解为本专利技术的限制。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1一种本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种松针黄酮组装抗癌药物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，制备松针黄酮；S2，制备氧化石墨烯；S3，组装松针黄酮‑叶酸‑氧化石墨烯纳米药物S31，组装Fe3O4‑氧化石墨烯将氧化石墨烯、三甘醇和0.50mol/L乙酰丙酮铁溶液按照25mg:6ml:3mL的比例混合，超声，N2保护下回流反应；然后向反应物中加入无水乙醇，无水乙醇与乙酰丙酮铁溶液的体积比例为20:3，磁性分离出沉淀物；然后以乙醇洗涤沉淀物，烘干，得Fe3O4‑氧化石墨烯；S32，组装叶酸‑Fe3O4‑氧化石墨烯将Fe3O4‑氧化石墨烯、蒸馏水、NaOH和NaClO按照25mg:25mL:1g:1g的比例混合，超声1‑2h；以1mol/L的稀盐酸中和，离心，收集上层液；以蒸馏水和截留分子量2000Da的透析袋透析上层液20‑24h，收集透析袋内的透析液；按照0.1g:20mL的比例将叶酸加入透析液中，超声，加入氮‑羟基琥珀酰亚胺和1‑乙基‑(3‑二甲氨基丙基)碳化二亚胺，超声0.5‑1h，得到叶酸‑Fe3O4‑氧化石墨烯粗品溶液，其中氮‑羟基琥珀酰亚胺、1‑乙基‑(3‑二甲氨基丙基)碳化二亚胺与叶酸的质量比例为100:50:30；将叶酸‑Fe3O4‑氧化石墨烯粗品溶液用1mol/L的NaHCO3溶液和截留分子量2000Da的透析袋透析24h，收集透析袋内透析液，离心，收集沉淀，以丙酮洗涤沉淀，干燥，得到叶酸‑Fe3O4‑氧化石墨烯；S33，组装松针黄酮‑叶酸‑氧化石墨烯纳米药物将叶酸‑Fe3O4‑氧化石墨烯分散在磷酸盐缓冲液中，加入2mg/ml的松针黄酮溶液，避光搅拌20‑24h，离心，收集下层溶液，干燥，得到松针黄酮‑叶酸‑氧化石墨烯纳米药物，该松针黄酮‑叶酸‑氧化石墨烯纳米药物即为松针黄酮组装抗癌药物。...

【技术特征摘要】
1.一种松针黄酮组装抗癌药物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，制备松针黄酮；S2，制备氧化石墨烯；S3，组装松针黄酮-叶酸-氧化石墨烯纳米药物S31，组装Fe3O4-氧化石墨烯将氧化石墨烯、三甘醇和0.50mol/L乙酰丙酮铁溶液按照25mg:6ml:3mL的比例混合，超声，N2保护下回流反应；然后向反应物中加入无水乙醇，无水乙醇与乙酰丙酮铁溶液的体积比例为20:3，磁性分离出沉淀物；然后以乙醇洗涤沉淀物，烘干，得Fe3O4-氧化石墨烯；S32，组装叶酸-Fe3O4-氧化石墨烯将Fe3O4-氧化石墨烯、蒸馏水、NaOH和NaClO按照25mg:25mL:1g:1g的比例混合，超声1-2h；以1mol/L的稀盐酸中和，离心，收集上层液；以蒸馏水和截留分子量2000Da的透析袋透析上层液20-24h，收集透析袋内的透析液；按照0.1g:20mL的比例将叶酸加入透析液中，超声，加入氮-羟基琥珀酰亚胺和1-乙基-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺，超声0.5-1h，得到叶酸-Fe3O4-氧化石墨烯粗品溶液，其中氮-羟基琥珀酰亚胺、1-乙基-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺与叶酸的质量比例为100:50:30；将叶酸-Fe3O4-氧化石墨烯粗品溶液用1mol/L的NaHCO3溶液和截留分子量2000Da的透析袋透析24h，收集透析袋内透析液，离心，收集沉淀，以丙酮洗涤沉淀，干燥，得到叶酸-Fe3O4-氧化石墨烯；S33，组装松针黄酮-叶酸-氧化石墨烯纳米药物将叶酸-Fe3O4-氧化石墨烯分散在磷酸盐缓冲液中，加入2mg/ml的松针黄酮溶液，避光搅拌20-24h，离心，收集下层溶液，干燥，得到松针黄酮-叶酸-氧化石墨烯纳米药物，该松针黄酮-叶酸-氧化石墨烯纳米药物即为松针黄...

【专利技术属性】
技术研发人员：李启照，卫强，尹伟，陶阿丽，冯学花，杨春燕，姚凯，宋祖荣，曹殿洁，刘自平，
申请(专利权)人：安徽新华学院，
类型：发明
国别省市：安徽,34