L型α淀粉酶变体及其生产方法技术

本发明专利技术公开了L型α淀粉酶变体及其生产方法。所述的α淀粉酶变体由亲代α淀粉酶氨基酸序列中至少有一个氨基酸残基突变、增加或删除得到，同时仍然保持了亲代水解α‑1,4糖苷键的能力的α淀粉酶；二者氨基酸序列同源性达到95％以上；优选如SEQ ID NO.4所示的α淀粉酶变体。本发明专利技术提供的一系列α淀粉酶变体，在pH 5.0‑5.8酸性条件下和100℃以上高温条件下有较高的催化活度。这些α淀粉酶变体的耐酸和热稳定性，适用于淀粉液化。

L type alpha amylase variants and production methods thereof

The invention discloses a L type alpha amylase variants and its production method. Variations of the alpha amylase by parental alpha amylase amino acid sequence of at least one of the mutated amino acid residues, add or delete, while still maintaining the alpha amylase hydrolysis ability of parental 1,4 alpha glycosidic bond; two amino acid sequence homology reached more than 95%; selection of alpha amylase variants such as SEQ ID as shown in NO.4. A series of alpha amylase variants provided by the invention has high catalytic activity in pH 5 5.8 under acidic conditions and 100 DEG C under high temperature conditions. The alpha amylase variants of the acid resistance and thermal stability, suitable for starch liquefaction.

【技术实现步骤摘要】
L型α淀粉酶变体及其生产方法
本专利技术属于酶工程领域，涉及L型α淀粉酶变体及其生产方法。
技术介绍
在工业界，淀粉的水解主要是从α淀粉酶来开始的，这些来源于微生物的α淀粉酶和其他酶种的协同应用，比如说普鲁兰酶，糖化酶及葡萄糖异构酶，可有效分解淀粉大分子，这些产生的小分子多糖或单糖在食品制造、谷物处理、啤酒加工、酒精生产等行业有很多应用，至关重要。α淀粉酶隶属于糖化水解酶的一种，它的主要结构特征是(α/β)8折叠，其中含有特殊的淀粉底物结合位点，长度一般为不超过10个糖单体，但是很多淀粉酶的结合位点在一起作用，就可以实行多点位结合，从而成功剪切淀粉大分子。α淀粉酶可以有效剪切淀粉底物中的α-1，4糖苷键，从而快速降低淀粉底物的分子量和粘度，产物主要是不同长度的糊精。α淀粉酶有不同的种类，这些种类在工业上的应用条件根据所需产品的性征有很大的不同。α淀粉酶(α-1,4-glucan-4-glucanohydrolases,E.C.3.2.1.1)能有效水解淀粉和其他的多糖中的α-1，4糖苷键。鉴于在淀粉在水解过程中对酶效率的提高和降低生产成本的需求，寻求在不同应用领域能支持有效淀粉液化的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种α淀粉酶变体，其特征在于由亲代α淀粉酶氨基酸序列中至少有一个氨基酸残基突变、增加或删除得到，同时仍然保持了亲代水解α‑1,4糖苷键的能力的α淀粉酶；二者氨基酸序列同源性达到95％以上。

【技术特征摘要】
1.一种α淀粉酶变体，其特征在于由亲代α淀粉酶氨基酸序列中至少有一个氨基酸残基突变、增加或删除得到，同时仍然保持了亲代水解α-1,4糖苷键的能力的α淀粉酶；二者氨基酸序列同源性达到95％以上。2.根据权利要求1所述的α淀粉酶变体，其特征在于所述的亲代α淀粉酶为细菌α淀粉酶，选自Bacillussubtilis,B.licheniformis，B.amyloliquefaciens，G.stearothermophilus或Bacilluscereus中的任意一种的α淀粉酶；优选B.licheniformis或G.stearothermophilus的α淀粉酶，进一步优选B.licheniformis的α淀粉酶。3.根据权利要求3所述的α淀粉酶变体，其特征在于所述的B.licheniformis的α淀粉酶的全长编码基因序列见SEQIDNO.1；对应的氨基酸序列见SEQIDNO.2。4.根据权利要求3所述的α淀粉酶变体，其特征在于所述的α淀粉酶变体选自以下任意一种或以下三种情况的任意结合：(1)由B.licheniformis的亲代α淀粉酶缺失其N-末端第1个至第2个氨基酸残基得到；(2)在B.licheniformis的亲代α淀粉酶N-末端增加1个至5个氨基酸残基得到；(3)由B.licheniformis的亲代α淀粉酶缺失其N-末端氨基酸残基并替换成2个至4个其他的氨基酸残基；所述的2个至4个其他的氨基酸残基优选AN或DGL或AAPF；(4)在B.licheniformis的亲代α淀粉酶C-末端增加3个至5个氨基酸残基得到；所述的增加3个至5个氨基酸残基优选增加氨基酸残基KTT或KTTVS。5.根据权利要求3所述的α淀粉酶变体，其特征在于所述的α淀粉酶变体选自以下任意一种：(1)在B.licheniformis的亲代α淀粉酶N-末端增加两个氨基酸残基A和N得到；(2)在B.licheniformis的α淀粉酶N端增加两个氨基酸A和N，并且在C端增加五个氨基酸KTTVS得到；(3)在B.licheniformis的α淀粉酶N端增加两个氨基酸A和N，并且在C端增加三个氨基酸KTT得到；(4)在B.licheniformis的α淀粉酶N-末端缺失氨基酸残基V并替换成4个氨基酸残基AAPF得到；(5)所述的α淀粉酶变体通过在B.licheniformis的α淀粉酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：范岩，杜秀贞，郝名慧，卢嫣红，孙燕，徐红，
申请(专利权)人：南京百斯杰生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32