用于研究药物吸收的心肌纤维化细胞模型的建立方法技术

本案涉及一种用于研究药物吸收的心肌纤维化细胞模型的建立方法，包括以下步骤：(1)将大鼠心肌成纤维细胞采用高糖DMEM培养传代；(2)构建心肌成纤维细胞模型；(3)洗涤心肌成纤维细胞模型；(4)测定心肌成纤维细胞模型的跨膜电阻值；(5)获得心肌纤维化细胞模型；(6)获得心肌纤维化细胞模型的空白对照样；(7)测定该心肌纤维化细胞模型和空白对照样的吸光度值，以判断心肌纤维化细胞模型是否建立成功。本发明专利技术以大鼠心肌成纤维细胞为基础，通过PDGF培养，建立了药物吸收的心肌纤维化细胞模型，操作简单，经济科学，可实现高通量测定，对心肌纤维化人群个体化用药，合理用药具有较大的促进作用。

A method for establishing a cell model of myocardial fibrosis of the drug absorption

The invention relates to a method for establishing a cell model of myocardial fibrosis of drug absorption, which comprises the following steps: (1) the rat cardiac fibroblasts cultured by high glucose DMEM; (2) to construct cardiac fibroblast model; (3) myocardial fibroblast model washing; (4) determination a cell model of fiber membrane resistance value; (5) cell model of myocardial fibrosis; (6) to obtain myocardial fibrosis cell model of blank still; (7) determination model and the blank cells on myocardial fibrosis as the absorbance values to determine the myocardial fibrosis cell model is established successfully. The invention is based on rat myocardial fibroblasts by PDGF culture, establishing a cell model of myocardial fibrosis, drug absorption, simple operation, economy and science, can achieve high throughput determination of individual medication groups myocardial fibrosis, rational drug use has great role in promoting.

【技术实现步骤摘要】
用于研究药物吸收的心肌纤维化细胞模型的建立方法
本专利技术涉及药物代谢动力学研究领域，尤其涉及用于研究药物吸收的心肌纤维化细胞模型的建立方法。
技术介绍
心肌纤维化(myocardialfibrosis，MF)主要表现为心肌成纤维细胞(cardiacfibroblasts，CFs)数目增多和心肌细胞外间质胶原过度沉积，发生于许多心血管疾病。CFs具有潜在较强分裂能力，且可合成和分泌基质蛋白、I型和Ⅲ型胶原纤维，因此有效抑制心肌成纤维细胞增殖，诱导其凋亡是防治心肌纤维化的策略之一。成纤维细胞(cardiacfibroblasts，cFB)位于心脏间质与动静脉血管壁，占心脏非心肌细胞的90％-95％，是合成心肌胶原的主要细胞。cFB首先在体内合成胶原前体即前胶原(procollagen)，由3条前α链组成，每一个前胶原分子的N端和c端分别含有1个前肽，成熟时前胶原分子经胞吐作用被分泌至细胞外，受前胶原肽酶的作用，去除N端和C端的前肽，形成胶原。cFB具有潜在较强分裂能力，可合成和分泌多种基质蛋白，有学者认为，cFB活化是纤维化形成过程中的关键步骤。对cFB活化规律的研究表明，在正常的心肌本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于研究药物吸收的心肌纤维化细胞模型的建立方法，包括以下步骤：(1)将大鼠心肌成纤维细胞采用高糖DMEM培养液于体积浓度为5％的CO2培养箱中培养传代；(2)取步骤(1)中第四代后生长良好的大鼠心肌成纤维细胞于24孔板的Transwell小室的滤膜上构建心肌成纤维细胞模型；(3)采用HBSS培养液洗涤步骤(2)得到的心肌成纤维细胞模型3‑5次；(4)测定步骤(3)所得的心肌成纤维细胞模型的跨膜电阻值；(5)取步骤(4)中跨膜电阻值大于500Ω的心肌成纤维细胞模型，加入到含有PDGF的HBSS培养液中培养24‑48h，获得心肌纤维化细胞模型；(6)另取步骤(4)中跨膜电阻值大于500Ω的心肌成纤...

【技术特征摘要】
1.用于研究药物吸收的心肌纤维化细胞模型的建立方法，包括以下步骤：(1)将大鼠心肌成纤维细胞采用高糖DMEM培养液于体积浓度为5％的CO2培养箱中培养传代；(2)取步骤(1)中第四代后生长良好的大鼠心肌成纤维细胞于24孔板的Transwell小室的滤膜上构建心肌成纤维细胞模型；(3)采用HBSS培养液洗涤步骤(2)得到的心肌成纤维细胞模型3-5次；(4)测定步骤(3)所得的心肌成纤维细胞模型的跨膜电阻值；(5)取步骤(4)中跨膜电阻值大于500Ω的心肌成纤维细胞模型，加入到含有PDGF的HBSS培养液中培养24-48h，获得心肌纤维化细胞模型；(6)另取步骤(4)中跨膜电阻值大于500Ω的心肌成纤维细胞模型加入到不含有PDGF的HBSS培养液中培养24-48h，获得心肌纤维化细胞模型的空白对照样；(7)测定该心肌纤维化细胞模型和空白对照样的吸光度值，以判断心肌纤维化细胞模型是否建立成功。2.如权利要求1所述的用于研究药物吸收的心肌纤维化细胞模型的建立方法，其特征在于，所述高糖DMEM培养液是将FBS120ml、100×天门冬氨酸15ml、青霉素160000单位和链霉素200mg溶于900mlDMEM高糖培养基中所得的培养液。3.如权利要求1所述的用于研究药物吸收的心肌纤维化细胞模型的建立方法，其特征在于，所述步骤(1)中培养条件是指温度为...

【专利技术属性】
技术研发人员：高永林，李春梅，乔俊花，
申请(专利权)人：烟台大学，
类型：发明
国别省市：山东,37