CXCL4单抗治疗肿瘤及化疗后肿瘤加速再增殖基因筛选法制造技术

本发明专利技术公开了一种CXCL4单抗治疗肿瘤及化疗后肿瘤加速再增殖基因筛选法；所述用途为在制备抑制肿瘤增殖药物中的用途；所述肿瘤为CXCL4高表达的肿瘤或化疗引起的CXCL4高表达的肿瘤；所述抗CXCL4单克隆抗体与化疗时采用的化疗药物联合用药，用于抑制化疗引起的CXCL4高表达的肿瘤增殖。本发明专利技术通过应用结肠癌荷瘤小鼠5‑Fu化疗模型，揭示CXCL4表达变化与结肠癌5‑Fu化疗后“加速再增殖”之间的关系，阐明CXCL4参与化疗后肿瘤“加速再增殖”过程中的分子机制，完成拮抗CXCL4协同5‑Fu抑制结肠癌细胞再增殖的药效药理研究，为成功开发CXCL4抗体药物提供依据。

CXCL4 monoclonal antibody therapy for tumor and chemotherapy accelerated re proliferation gene screening

The invention discloses a CXCL4 monoclonal antibody for the treatment of tumors and tumor after chemotherapy accelerated proliferation gene screening method; the use in the preparation of medicaments inhibiting tumor proliferation; the tumor with high expression of CXCL4 high expression tumor or chemotherapy induced CXCL4 tumor; using the anti CXCL4 monoclonal antibodies and chemotherapy when the chemotherapy drug, for suppressing the high expression of CXCL4 tumor proliferation induced by chemotherapy. Through the application of nude mice colon 5 Fu chemotherapy model revealed that the CXCL4 expression of colon carcinoma and 5 after Fu chemotherapy \to accelerate the relationship between proliferation\, to elucidate the molecular mechanism of CXCL4 involved in chemotherapy \accelerated proliferation\ in the process of completing 5 collaborative antagonism of CXCL4 Fu inhibition in pharmacological research colon cancer cell proliferation, provide the basis for the successful development of anti CXCL4 drugs.

【技术实现步骤摘要】
CXCL4单抗治疗肿瘤及化疗后肿瘤加速再增殖基因筛选法本申请是申请日为2014年6月24日、申请号为201410289048.9和专利技术名称为“CXCL4单抗治疗肿瘤及化疗后肿瘤加速再增殖基因筛选法”的专利技术专利申请的分案申请。
本专利技术属于生物
，具体涉及一种CXCL4单抗治疗肿瘤及化疗后肿瘤加速再增殖基因筛选法。
技术介绍
肿瘤放化疗诱发的肿瘤“加速再增殖”现象：放化疗仍然是肿瘤的最常用治疗手段，其主要抗肿瘤机理是产生细胞毒作用，导致大量肿瘤细胞死亡。通常认为这一过程中濒死的或已经死亡的细胞会被周围存活的细胞或巨噬细胞等清除细胞消化吸收，而如果有少量的肿瘤细胞存活下来，估计会慢慢的增殖、逐渐的导致肿瘤复发。40年前就开始有文献报道肿瘤在放疗后开启了被称为“加速再增殖(acceleratedrepopulation)”的过程，这一过程中，在放疗打击下逃逸的少量肿瘤细胞存活下来，并能以更加快的增殖速度重建严重受损的肿瘤组织(Hermens,A.F.&Barendsen,G.W.Changesofcellproliferationcharacteristicsinaratrhabdomyosarcomabeforeandafterx-irradiation.Eur.J.Cancer,5:173–189,1969.)，(Stephens,T.C.,Currie,G.A.&Peacock,J.H.Repopulationofgamma-irradiatedLewislungcarcinomabymalignantcellsandhostmacrophageprogenitors.Br.J.Cancer,38:573–582,1978.)。最近，专利技术人课题组在荷瘤小鼠模型上也观察到了化疗后，残余肿瘤细胞“加速再增殖”的现象。这种本领域技术人员在分子水平知之甚少的“加速再增殖”现象在目前化疗和放疗过程中发挥着主要作用。治疗后肿瘤“加速再增殖”分子机理是亟需解决的肿瘤学重大科学问题：研究人员为了阐明肿瘤放化疗后加速再增殖的分子机理已经做了大量的研究。最近，我国科学家首次报道在放疗条件下死亡肿瘤细胞在凋亡过程中产生生长刺激信号从而刺激残余肿瘤细胞加速再增殖(HuangQ,LiF,LiuX,etal.Caspase3-mediatedstimulationoftumorcellrepopulationduringduringcancerradiotherapy.NatMed,17:860-6,2011.)。他们进一步研究显示caspase3这一凋亡过程关键蛋白参与了肿瘤细胞的生长刺激。caspase3调节的下游信号蛋白前列腺素E2(PGE2)能够刺激存活肿瘤细胞的增殖。在肿瘤细胞或肿瘤间质细胞中拮抗caspase3可以提高异种移植肿瘤或小鼠肿瘤对放疗的敏感性。临床上癌症患者肿瘤组织中高水平活化状态的caspase3与病人肿瘤高复发率和高死亡率存在显著相关性。他们的研究揭示了caspase3在放疗后肿瘤加速再增殖通路中扮演了关键角色(HuangQ,LiF,LiuX,etal.Caspase3-mediatedstimulationoftumorcellrepopulationduringduringcancerradiotherapy.NatMed,17:860-6,2011.)。揭示了放疗对肿瘤生长具有细胞毒和加速再生长的双重作用和作用机理。特别是“加速再增殖”作用，并不是放疗的直接作用，而是通过上调了caspase3实现的。因此，靶向“加速再增殖”通路的关键分子caspase3提供了抑制放疗后“加速再增殖”的作用，从而也提高了肿瘤对放疗的敏感性。靶向caspase3有可能成为新的抗肿瘤药物靶点，而具有社会和经济价值。化疗药物除了直接的细胞毒作用外，还可作用于机体的免疫系统影响其发挥抗肿瘤活性。最新研究报道(BruchardM,MignotG,GhiringhelliF,etal.Chemotherapy-triggeredcathepsinBreleaseinmyeloid-derivedsuppressorcellsactivatestheNlrp3inflammasomeandpromotestumorgrowth.NatMed,19:57-64,2013.)，临床常用的两个化疗药物吉西他滨和5-FU，能够激活NOD样受体家族，即髓源性抑制细胞(myeloid-derivedsuppressorcell，MDSC)中的pyrin结构域蛋白3(Nlrp3)依赖的caspase-1激活复合物(也称为炎症体-inflammasome)，导致MDSC高表达白细胞介素-1(IL-1)。IL-1会进一步诱导CD4+T细胞释放白细胞介素-17(IL-17)，IL-17通过促进肿瘤组织血管生成导致化疗后肿瘤“加速再增殖”。相应地，当肿瘤建立在Nlrp3-/-、Caspase1-/-小鼠或用白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra，拮抗IL-1)处理的野生型小鼠上时，化疗后肿瘤“加速再增殖”作用受到抑制，使得化疗能够发挥更强的抗肿瘤作用(BruchardM,MignotG,GhiringhelliF,etal.Chemotherapy-triggeredcathepsinBreleaseinmyeloid-derivedsuppressorcellsactivatestheNlrp3inflammasomeandpromotestumorgrowth.NatMed,19:57-64,2013.)。研究结果揭示了化疗对抗肿瘤细胞毒和“加速再增殖”的双重作用，对后者的分子机理研究证实其并不是化疗药物直接对肿瘤的作用，而是通过作用于肿瘤组织中的MDSC间接提高肿瘤血管再生、增加肿瘤组织血液供应实现的。因此，化疗后肿瘤“加速再增殖”通路中的关键分子为开发新的抗肿瘤药物提供了新靶点和新思路，如文章中提到的IL-1Ra的应用即可抑制化疗后肿瘤“加速再增殖”从而提供化疗抗肿瘤效果。这些研究揭示了放化疗后肿瘤“加速再增殖”的一些重要机制。然而，最近研究还表明一些化疗药物反而能够通过清除免疫抑制细胞增强抗肿瘤免疫应答(Mattarollo,S.R.etal.Pivotalroleofinnateandadaptiveimmunityinanthracyclinechemotherapyofestablishedtumors.CancerRes,71:4809–4820,2011.)。化疗药物5-Fu能够选择性地清除MDSC(Vincent,J.etal.5-Fluorouracilselectivelykillstumor-associatedmyeloid-derivedsuppressorcellsresultinginenhancedTcell–dependentantitumorimmunity.CancerRes,70:3052–3061,2010.)，而MDSCs是一类不成熟的骨髓细胞，能够抑制人类和小鼠T细胞的活化(Gabrilovich,D.I.&Nagaraj,S.Myeloid-deri本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种CXCL4作为抗肿瘤药物的筛选标记的用途，其特征在于，所述肿瘤是因5‑Fu化疗引起的CXCL4高表达的肿瘤；较佳地，所述的肿瘤为结肠癌或胃癌。

【技术特征摘要】
2014.04.09 CN 20141014110251.一种CXCL4作为抗肿瘤药物的筛选标记的用途，其特征在于，所述肿瘤是因5-Fu化疗引起的CXCL4高表达的肿瘤；较佳地，所述的肿瘤为结肠癌或胃癌。2.一种CXCL4作为肿瘤增殖的靶点在制备抑制肿瘤增殖药物中的用途，其特征在于，所述肿瘤是因5-Fu化疗引起的CXCL4高表达的肿瘤；所述抑制肿瘤增殖包括如下步骤：A、获取能够与CXCL4、CXCL4受体或CXCL4下游信号中和的结合物；B、使用所述结合物中和CXCL4靶点、CXCL4受体或下游信号，实现抑制肿瘤增殖；较佳地，所述的肿瘤为结肠癌或胃癌。3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述结合物为CXCL4突变体，所述CXCL4突变体能够竞争结合CXCL4受体，同时不引起受体激活。4.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述结合物为以CXCL4或CXCL4受体为抗原制备的抗体，或所述抗体的片段，或所述抗体的融合蛋白；优选地，所述抗体为保藏号为CCTCCNO：C2012186的杂交瘤细胞株产生的抗体；所述CXCL4受体为CXCR3，或CXCR3A，或CXCR3B。5.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述结合物为CXCL4受体，或CXCL4受体的可溶性受体，或CXCL4受体的受体融合蛋白；优选地，所述CXCL4受体为CXCR3，或CXCR3A，或CXCR3B。6.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述结合物为靶向CXCL4、或靶向CXCL4受体、或靶向下游信...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩伟，俞雁，张扬，
申请(专利权)人：上海欣生源药业有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31