全血88‑microRNA标记物作为肝脏慢性疾病诊断靶标的应用制造技术

本发明专利技术公开了全血88‑microRNA标记物作为肝脏慢性疾病诊断靶标的应用。发明专利技术人通过大量研究，鉴定出一组88个microRNA组成的分子标签，结果显示这个标签可以100％的判别正常、慢性乙型肝炎、肝硬化和肝癌。为了验证此88‑microRNA标签的诊断作用，发明专利技术人同时收集另外63例全血样本组成验证组进行了验证，结果表明，88‑microRNA分子标签的诊断的准确率与训练组原始诊断正常率类似。进一步证明本发明专利技术88‑microRNA分子标签可以很好的区分正常、慢性乙型肝炎、肝硬化和肝癌四种人群。

88 blood microRNA markers as application of chronic liver disease diagnosis target

The present invention discloses 88 blood microRNA markers as application of chronic liver disease diagnosis target. A large number of studies have identified a group of 88 microRNA molecular tags, and the results show that the label can be used to discriminate normal, chronic hepatitis B, cirrhosis and liver cancer by 100%. In order to verify the diagnostic effect of 88 microRNA label, the inventor also collected another 63 cases of blood samples. The validation group is verified, the results show that the 88 microRNA molecular tag diagnosis accuracy rate and initial diagnosis rate similar to normal training group. Further proof of the invention 88 microRNA molecular tags can be well differentiated from normal, chronic hepatitis B, liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma in four groups.

【技术实现步骤摘要】
全血88-microRNA标记物作为肝脏慢性疾病诊断靶标的应用
本专利技术涉及一种肝脏慢性疾病的诊断靶标，特别是涉及全血microRNA标志物作为原发性肝细胞癌、肝硬化、慢性乙型肝炎诊断靶标的应用。
技术介绍
原发性肝癌主要包括肝细胞癌(HCC)、胆管癌和肝血管瘤。作为癌症死亡率第三的恶性肿瘤，肝细胞癌占原发性肝癌的83％。世界范围内，肝细胞癌发病率为恶性肿瘤中的第五位，而在中国为第一位。在临床实践中，肝细胞癌总生存率较低的主要原因是诊断滞后和误诊、鉴别诊断尤其是直径小于3cm的小肝癌的鉴别诊断标志物的缺乏以及准确性较高的非侵入性诊断标志物的缺乏，由此常导致最佳治疗窗的错失和不良预后。肝硬化是肝细胞癌的重要风险因子，而慢性乙型肝炎是肝硬化发生的重要诱因。目前临床上肝癌主要的非侵入性诊断指标即为血清AFP水平及超声检查。然而越来越多的研究表明AFP诊断的准确性和敏感性不尽人意且不能作为独立的诊断标志物，而超声检查难以鉴别诊断肝硬化的良性结节与肝细胞癌的恶性病灶。因此，在肝癌高危人群(肝硬化及慢性乙型肝炎病例)和肝癌病例中鉴别出新的有效敏感的非侵入性诊断指标对肝癌的防治具有重要的意义。肝细胞癌的致癌过程伴随着多种癌症相关基因的表达失常，这些基因往往影响着诸如细胞周期调控、细胞增殖、凋亡、移行与扩散等多种细胞生物学过程。在过去的几十年中，众多研究集中在对这些肝细胞癌相关异常表达关键基因及其靶蛋白的研究上。近来，越来越多的学者开始关注小干扰RNA：microRNA对肝细胞癌进程的影响。自1993年被发现以来，microRNA对多种多细胞生物的各种生理及病理过程的广泛影响被不断报道，包括细胞增殖、分化、免疫反应、组织重塑和包括肿瘤在内的多种人类疾病。一项最近的研究探讨了肿瘤中各种microRNA的表达情况及其靶mRNA，发现了各种microRNA的癌基因或抑癌基因样作用。至此，microRNA在肿瘤发生中的功能与作用研究引起了广泛的关注。一些特殊microRNA的表达异常被发现与转移、复发与预后等肝癌临床病理学特征有关。microRNA是一类高度保守的非编码小RNA，在脊椎动物中多通过与其靶mRNA3’-UTR的特异性结合并引起miRNA介导的快速脱腺苷化反应导致翻译抑制、mRNA断裂或mRNA降解而负性调节基因表达。microRNA的异常表达广泛出现在包括肝癌在内的多种肿瘤中。而循环系统中的microRNA，包括血清、血浆、全血中的microRNA被认为在多种肿瘤的非侵入性诊断中发挥重要的作用。其中研究最多的是血清microRNA。据报道，很多肿瘤相关的microRNA在血清样本中被发现且作为这些肿瘤的诊断指标物具有较高的敏感性。在肝癌中，自LiL等提出一组microRNA标志物在HBV阳性的肝癌血清样本中表达升高之后，许多研究都试图通过表达谱分析找出具有诊断价值的血清microRNA标志物。而血浆microRNA在肝癌中已发表的研究目前只有三篇：JiaFan等通过137例血浆样本的芯片实验筛选出对肝癌有诊断价值的一组由7个microRNA组成的分子标签。LiJiang等评估了肝癌中一个单一microRNA：miR-106b作为诊断标志物的临床应用价值。YangWen等在9例血浆样本中应用TLDA芯片筛选出一组由8个microRNA组成的诊断标签。然而，由于病例样本以及芯片检测microRNA探针较少等局限性，上述microRNA分子标签的可靠性和准确性需要进一步的验证。全血样本中microRNA的诊断应用研究刚刚兴起，一些研究者在胰腺癌、卵巢癌、肺和胆囊癌中陆续筛选出具有诊断价值的microRNA分子标签。相较于血清和血浆样本而言，全血样本具有如下优点：1.更高的microRNA得率；2.避免血液样本分离血清血浆时可能的操作误差和损耗；3.全血样本中包括肿瘤组织释放的microRNA、以及在癌症或炎症进展中伴随出现的多种其他可能发生变化的microRNA，因此，全血RNA可能比血浆、血清RNA更加全面。除了肿瘤病灶之外，全血microRNA可能来源于其他远处组织的损伤部位比如炎症小体、单核细胞、巨噬细胞、白细胞、血小板和成熟红细胞。因此，全血RNA在炎症相关的肿瘤比如胰腺炎相关的胰腺癌、乙肝相关的肝癌中具有更好的敏感性。目前，全血样本microRNA在肝癌中的诊断价值尚鲜有研究。因此，目前临床上急需开发出一种检测结果更为准确的全血microRNA分子标签。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供88-microRNA标签组作为肝脏慢性疾病辅助诊断指标的应用。本专利技术的另一目的在于提供定量全血88-microRNA表达量的试剂组在制备肝脏慢性疾病辅助诊断试剂中的应用。本专利技术的再一目的在于提供定量全血88-microRNA表达量的试剂组在制备区分正常、慢性乙型肝炎、肝硬化和肝癌4种情况的试剂中的应用。本专利技术所采取的技术方案是：microRNA标签组作为肝脏慢性疾病辅助诊断指标的应用，该标签组由hsa-miR-769-5p、hsa-miR-767-5p、hsa-miR-4329、hsa-miR-30d-3p、hsa-miR-1247-5p、hsa-miR-3908、hsa-miR-4478、hsa-miR-541-5p、hsa-miR-450b-5p、hsa-miR-4515、hsa-miR-150-5p、hsa-miR-3162-5p、hsa-miR-4640-3p、hsa-miR-30b-3p、hsa-miR-431-3p、hsa-miR-4502、hsa-miR-4476、hsa-miR-4516、hsa-miR-4444、hsa-miR-4507、hsa-miR-485-5p、hsa-miR-3164、hsa-miR-4418、hsa-miR-4484、hsa-miR-450a-5p、hsa-miR-4446-3p、hsa-miR-4739、hsa-miR-4474-3p、hsa-miR-4732-5p、hsa-miR-4322、hsa-miR-876-3p、hsa-miR-4284、hsa-miR-23a-5p、hsa-miR-4482-5p、hsa-miR-4461、hsa-miR-3153、hsa-miR-493-5p、hsa-miR-4750、hsa-miR-767-3p、hsa-miR-221-3p、hsa-miR-4522、hsa-miR-30c-1-3p、hsa-miR-4472、hsa-miR-449a、hsa-miR-644b-3p、hsa-miR-4793-5p、hsa-miR-1248、hsa-miR-2681-5p、hsa-miR-4508、hsa-miR-4677-5p、hsa-miR-154-3p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-3196、hsa-let-7d-5p、hsa-miR-4715-5p、hsa-miR-891b、hsa-let-7a-2-3p、hsa-miR-3675-3p、hsa-miR-3184-5p、hsa-miR-132-5p、hsa-miR-1537、hsa-miR-3145-5p、hsa-miR-5092、hsa-miR-194-3p、hs本文档来自技高网...

【技术保护点】
microRNA标签组作为肝脏慢性疾病辅助诊断指标的应用，该标签组由hsa‑miR‑769‑5p、hsa‑miR‑767‑5p、hsa‑miR‑4329、hsa‑miR‑30d‑3p、hsa‑miR‑1247‑5p、hsa‑miR‑3908、hsa‑miR‑4478、hsa‑miR‑541‑5p、hsa‑miR‑450b‑5p、hsa‑miR‑4515、hsa‑miR‑150‑5p、hsa‑miR‑3162‑5p、hsa‑miR‑4640‑3p、hsa‑miR‑30b‑3p、hsa‑miR‑431‑3p、hsa‑miR‑4502、hsa‑miR‑4476、hsa‑miR‑4516、hsa‑miR‑4444、hsa‑miR‑4507、hsa‑miR‑485‑5p、hsa‑miR‑3164、hsa‑miR‑4418、hsa‑miR‑4484、hsa‑miR‑450a‑5p、hsa‑miR‑4446‑3p、hsa‑miR‑4739、hsa‑miR‑4474‑3p、hsa‑miR‑4732‑5p、hsa‑miR‑4322、hsa‑miR‑876‑3p、hsa‑miR‑4284、hsa‑miR‑23a‑5p、hsa‑miR‑4482‑5p、hsa‑miR‑4461、hsa‑miR‑3153、hsa‑miR‑493‑5p、hsa‑miR‑4750、hsa‑miR‑767‑3p、hsa‑miR‑221‑3p、hsa‑miR‑4522、hsa‑miR‑30c‑1‑3p、hsa‑miR‑4472、hsa‑miR‑449a、hsa‑miR‑644b‑3p、hsa‑miR‑4793‑5p、hsa‑miR‑1248、hsa‑miR‑2681‑5p、hsa‑miR‑4508、hsa‑miR‑4677‑5p、hsa‑miR‑154‑3p、hsa‑miR‑126‑3p、hsa‑miR‑3196、hsa‑let‑7d‑5p、hsa‑miR‑4715‑5p、hsa‑miR‑891b、hsa‑let‑7a‑2‑3p、hsa‑miR‑3675‑3p、hsa‑miR‑3184‑5p、hsa‑miR‑132‑5p、hsa‑miR‑1537、hsa‑miR‑3145‑5p、hsa‑miR‑5092、hsa‑miR‑194‑3p、hsa‑miR‑5096、hsa‑miR‑18b‑5p、hsa‑miR‑888‑3p、hsa‑let‑7g‑3p、hsa‑miR‑4646‑3p、hsa‑miR‑199a‑5p、hsa‑miR‑3935、hsa‑miR‑25‑5p、hsa‑miR‑662、hsa‑miR‑3672、hsa‑miR‑526b‑5p、hsa‑miR‑876‑5p、hsa‑miR‑103a‑3p、hsa‑miR‑19b‑1‑5p、hsa‑miR‑34a‑3p、hsa‑miR‑371b‑5p、hsa‑miR‑374c‑3p、hsa‑miR‑130a‑3p、hsa‑miR‑378a‑5p、hsa‑miR‑3146、hsa‑miR‑4652‑3p、hsa‑miR‑4495、hsa‑miR‑618、hsa‑miR‑4706共计88个全血microRNA组成。...

【技术特征摘要】
1.microRNA标签组作为肝脏慢性疾病辅助诊断指标的应用，该标签组由hsa-miR-769-5p、hsa-miR-767-5p、hsa-miR-4329、hsa-miR-30d-3p、hsa-miR-1247-5p、hsa-miR-3908、hsa-miR-4478、hsa-miR-541-5p、hsa-miR-450b-5p、hsa-miR-4515、hsa-miR-150-5p、hsa-miR-3162-5p、hsa-miR-4640-3p、hsa-miR-30b-3p、hsa-miR-431-3p、hsa-miR-4502、hsa-miR-4476、hsa-miR-4516、hsa-miR-4444、hsa-miR-4507、hsa-miR-485-5p、hsa-miR-3164、hsa-miR-4418、hsa-miR-4484、hsa-miR-450a-5p、hsa-miR-4446-3p、hsa-miR-4739、hsa-miR-4474-3p、hsa-miR-4732-5p、hsa-miR-4322、hsa-miR-876-3p、hsa-miR-4284、hsa-miR-23a-5p、hsa-miR-4482-5p、hsa-miR-4461、hsa-miR-3153、hsa-miR-493-5p、hsa-miR-4750、hsa-miR-767-3p、hsa-miR-221-3p、hsa-miR-4522、hsa-miR-30c-1-3p、hsa-miR-4472、hsa-miR-449a、hsa-miR-644b-3p、hsa-miR-4793-5p、hsa-miR-1248、hsa-miR-2681-5p、hsa-miR-4508、hsa-miR-4677-5p、hsa-miR-154-3p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-3196、hsa-let-7d-5p、hsa-miR-4715-5p、hsa-miR-891b、hsa-let-7a-2-3p、hsa-miR-3675-3p、hsa-miR-3184-5p、hsa-miR-132-5p、hsa-miR-1537、hsa-miR-3145-5p、hsa-miR-5092、hsa-miR-194-3p、hsa-miR-5096、hsa-miR-18b-5p、hsa-miR-888-3p、hsa-let-7g-3p、hsa-miR-4646-3p、hsa-miR-199a-5p、hsa-miR-3935、hsa-miR-25-5p、hsa-miR-662、hsa-miR-3672、hsa-miR-526b-5p、hsa-miR-876-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-19b-1-5p、hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-371b-5p、hsa-miR-374c-3p、hsa-miR-130a-3p、hsa-miR-378a-5p、hsa-miR-3146、hsa-miR-4652-3p、hsa-miR-4495、hsa-miR-618、hsa-miR-4706共计88个全血microRNA组成。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述肝脏慢性疾病为肝癌、肝硬化、慢性乙型肝炎。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述肝癌为原发性肝细胞癌。4.定量全血microRNA表达量的试剂组在制备肝脏慢性疾病辅助诊断试剂中的应用，其中，定量全血microRNA表达量的试剂组由定量hsa-miR-769-5p、hsa-miR-767-5p、hsa-miR-30d-3p、hsa-miR-4329、hsa-miR-1247-5p、hsa-miR-3908、hsa-miR-4478、hsa-miR-541-5p、hsa-miR-450b-5p、hsa-miR-4515、hsa-miR-150-5p、hsa-miR-3162-5p、hsa-miR-4640-3p、hsa-miR-30b-3p、hsa-miR-431-3p、hsa-miR-4502、hsa-miR-4476、hsa-miR-4516、hsa-miR-4444、hsa-miR-4507、hsa-miR-485-5p、hsa-miR-3164、hsa-miR-4418、hsa-miR-4484、hsa-miR-450a-5p、hsa-miR-4446-3p、hsa-miR-4739、hsa-miR-4474-3p、hsa-miR-4732-5p、hsa-miR-4322、hsa-miR-876-3p、hsa-miR-4284、hsa-miR-23a-5p、hsa-miR-4482-5p、hsa-miR-4461、hsa-miR-3153、hsa-miR-493-5p、hsa-miR-4750、hsa-miR-767-3p、hsa-miR-221-3p、hsa-miR-4522、hsa-miR-30c-1-3p、hsa-miR-4472、hsa-miR-449a、hsa-miR-644b-3p、hsa-miR-4793-5p、hsa-miR-1248、hsa-miR-2681-5p、hsa-miR-4508、hsa-miR-4677-5p、hsa-miR-154-3p、hsa-mi...

【专利技术属性】
技术研发人员：王辉云，龙潇冉，张美殷，郑晓峰，
申请(专利权)人：王辉云，
类型：发明
国别省市：广东,44