一种益生菌冻干制剂及其生产方法和应用技术

一种益生菌冻干制剂及其生产方法和应用，利用发酵罐分别培养枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌和粪肠球菌三种益生菌的发酵液，按1:1:2比例混合，混合益生菌液在低温冷冻干燥机中按照设定冻干曲线制作冻干制剂。本发明专利技术是改善水质、保持水产动物健康冻干制剂的制作，冻干制剂益生菌含量高，具有保持动物健康，减少抗生素的使用量的作用，从而达到健康养殖提高水产品品质的目的。

【技术实现步骤摘要】
一种益生菌冻干制剂及其生产方法和应用
本专利技术属于水产制剂
，特别涉及一种改善水质保持水产动物健康的益生菌冻干制剂以及其生产方法和应用。
技术介绍
随着现代集约化、高效率水产养殖业的快速发展，水产养殖业的生产速度越来越快，抗生素使用量也越来越多，致使水质污染，水产品的品质下降，而随着生活水平的提高，人们却越来越追求消费高品质更安全的水产品。减少水产养殖业抗生素使用量以及水污染等当前存在的问题，益生菌制剂是促进水产养殖业健康绿色发展的大势所趋，但是传统的益生菌水剂以及喷雾干燥的粉剂都存在保存效期短，益生菌含量少等的缺点，所以开发一种能长效保存，益生菌含量高的益生菌制剂尤为重要。
技术实现思路
解决的技术问题：本专利技术克服现有技术中保质期以及益生菌含量低等存在的不足，而提供一种益生菌冻干制剂及其生产方法和应用。技术方案：一种益生菌冻干制剂的生产方法，步骤为：分别利用发酵罐对枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)和粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)分别进行液体发酵培养至稳定期，所获得的发酵培养液混合均匀后，冷冻干燥制得益生菌冻干制剂。优选的，上述枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌和粪肠球菌经液体发酵后的OD600值分别为2.48、2.06和2.35。优选的，上述枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌和粪肠球菌的发酵培养液按体积比1:1:2混合。优选的，上述液体发酵培养方法为：按液体培养基基质重量1％-2％接种种子液；枯草芽孢杆菌用液体发酵用培养基组成为：按每升含牛肉膏3g、葡萄糖10g、蛋白胨10g、氯化钠5g配制；凝结芽孢杆菌用液体发酵用培养基组成为：按每升含牛肉膏6g、蛋白胨20g、氯化钠4g、葡糖糖16g、酵母粉6g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1g、硫酸锰0.25g、碳酸钙1g配制；粪肠球菌用液体发酵用培养基组成为：按每升含牛肉膏10g、蛋白胨10g、葡糖糖20g、酵母膏5g、磷酸氢二钾2g、硫酸镁0.5g、乙酸钠5g、柠檬酸氢二铵2g配制。优选的，上述冷冻干燥的冻干曲线流程为预冻待物料温度达到-45℃开始计时3h预冻结束，开始主冻干过程:每5h提升5℃，共4次，然后，每3h提升5℃，共2次，最后，每1.5h提升5℃，共1次。优选的，上述方法制备得到的益生菌冻干制剂，其特征在于枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)大于1010cfu/g、凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)大于108cfu/g、粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)大于1010cfu/g。上述益生菌冻干制剂在水产健康养殖生产中的应用。上述益生菌冻干制剂在南美白对虾养殖生产中的应用。应用的具体方法为，用纯净水或池塘水将冻干品稀释后泼洒使用，使用量为：前期疾病预防每瓶用6亩/米*水，以后每15天泼洒一次；早期发病时使用每瓶用4-5亩/米*水。有益效果：①本专利技术的改善水产品品质的益生菌冻干制剂，益生菌及其代谢产物活性高，改善水质，促进水产动物健康，提高了生产效率。②本专利技术益生菌冻干制剂将混合益生菌发酵液低温冻干，避免了益生菌保存效期短及菌含量不足的问题。③本专利技术益生菌冻干制剂有效地改善水质，包括分解水中蛋白质，稳定水体的pH值，清除水体中的有害毒素。④本专利技术益生菌冻干制剂保持水产动物健康提高水产品品质，有助于钙、铁、维生素的吸收，抑制肠道不耐酸的厌氧病原菌生长和繁殖，并加强对动物的免疫力和抗病能力减少抗生素的使用量。附图说明图1为水产养殖场河蟹育苗阶段使用冻干制剂对养殖水体pH值影响试验图；图2为水产养殖场河蟹育苗阶段使用冻干制剂对养殖水体溶氧量影响试验图；图3为水产养殖场河蟹育苗阶段使用冻干制剂对养殖水体氨氮浓度的影响试验图。具体实施方式以下实施例只为说明本专利技术的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人是能够了解本专利技术的内容并据以实施，并不能以此限制本专利技术的保护范围。凡根据本专利技术精神实质所做的等效变换或修饰，都应涵盖在本专利技术的保护范围之内。实施例1一种改善水质保持水产动物健康的益生菌冻干制剂的生产方法，制备步骤为：分别利用发酵罐对枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)和粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)分别进行液体发酵培养，按液体培养基基质重量1％-2％接种种子液；枯草芽孢杆菌用液体发酵用培养基组成为：按每升含牛肉膏3g、葡萄糖10g、蛋白胨10g、氯化钠5g配制；凝结芽孢杆菌用液体发酵用培养基组成为：按每升含牛肉膏6g、蛋白胨20g、氯化钠4g、葡糖糖16g、酵母粉6g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1g、硫酸锰0.25g、碳酸钙1g配制；粪肠球菌用液体发酵用培养基组成为：按每升含牛肉膏10g、蛋白胨10g、葡糖糖20g、酵母膏5g、磷酸氢二钾2g、硫酸镁0.5g、乙酸钠5g、柠檬酸氢二铵2g配制。培养条件和时间：枯草芽孢杆菌37℃，140转/min培养24h，凝结芽孢杆菌35℃，145转/min培养24h，粪肠球菌37℃，115转/min培养36h。所得各益生菌的发酵培养液按1:1:2的体积比例混匀得混合菌液；在低温冷冻干燥机中按照设定冻干曲线，预冻待物料温度达到-45℃开始计时3h预冻结束，开始主冻干过程:每5h提升5℃(4次)，然后，每3h提升5℃(2次)，最后，每1.5h提升5℃(1次)进行冻干制剂制作，真空冷冻干燥法预先将复配菌液里面的水分冻结，然后在真空无菌的环境下将复配菌液里面被冻结的水分升华，从而得到冷冻干燥的冻干制剂。本实施例的特点在低温环境下真空干燥配菌液里面的水份，保留其原有的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)和粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)的微生物活性和其代谢产物如蛋白酶、淀粉酶活性。而目前益生菌添加剂行业中广泛采用的方法是喷雾干燥制成的粉剂以及水剂，使其活性成分大大下降。该方法有效地防止了益生菌理化及生物特性的改变，对菌体细胞结构和特征的损伤较小，使其快速进入休眠状态，有效保护了益生菌以及其发酵代谢产物有效成份的稳定性。如蛋白质、微生物类不会发生变性和丢失其生物活性；冻干制品在干燥后形态疏松、颜色基本不发生改变，加水后能够快速溶解并恢复原有水溶液的理化特性和生物活性。由于干燥在真空条件下进行，对于一些易氧化的物质具有很好的保护作用。制品经过冻干后水份含量非常低，使制品的稳定性提高，受污染的机会减小，这不仅方便了运输还延长了制品保存期限。不同益生菌制剂的水分、活菌数以及蛋白酶活性-----表示未检测到从上表中可以看出，与普通的益生菌水剂产品相比，益生菌冻干制剂含有较低的水分含量，高数量级菌落的枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、粪肠球菌和蛋白酶活性。国内目前益生菌制剂一般是多种菌的液体水剂或者是单一菌种的菌粉，本专利技术配方无论是益生菌含量还是蛋白酶产量都较前两种产品高，并且该复合菌制剂的冻干制剂对于改善水质，提高水产品成活率以及产品质量都有积极重要的作用，而且由于冻干制剂较其他两种水分含量更低，制品的稳定性提高，不仅方便了运输还延长了制品保存期限。虽然现在市本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种益生菌冻干制剂的生产方法，其特征在于步骤为：分别利用发酵罐对枯草芽孢杆菌（

【技术特征摘要】
1.一种益生菌冻干制剂的生产方法，其特征在于步骤为：分别利用发酵罐对枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）、凝结芽孢杆菌（Bacilluscoagulans）和粪肠球菌（Enterococcusfaecalis）分别进行液体发酵培养至稳定期，所获得的发酵培养液混合均匀后，冷冻干燥制得益生菌冻干制剂。2.根据权利要求1所述益生菌冻干制剂的生产方法，其特征在于所述枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌和粪肠球菌经液体发酵后的OD600值分别为2.48、2.06和2.35。3.根据权利要求2所述益生菌冻干制剂的生产方法，其特征在于所述枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌和粪肠球菌的发酵培养液按体积比1:1:2混合。4.根据权利要求1所述益生菌冻干制剂的生产方法，其特征在于所述液体发酵培养方法为：按液体培养基基质重量1%-2%接种种子液；枯草芽孢杆菌用液体发酵用培养基组成为：按每升含牛肉膏3g、葡萄糖10g、蛋白胨10g、氯化钠5g配制；凝结芽孢杆菌用液体发酵用培养基组成为：按每升含牛肉膏6g、蛋白胨20g、氯化钠4g、葡糖糖16g、酵母粉6g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1g、硫酸锰0.25g、碳酸钙1g...

【专利技术属性】
技术研发人员：高擎燏，胡爱华，耿韬，庄宁建，朱崇淼，
申请(专利权)人：南京致润生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32