一种海洋生物体内半胱亚磺酸脱羧酶的酶活力的测定方法技术

本发明专利技术属于生物检测技术领域，具体涉及一种海洋生物体内半胱亚磺酸脱羧酶的酶活力的测定方法，从海洋生物体的组织样品中分离出含半胱亚磺酸脱羧酶的溶液，在合适的反应条件下将加入的磺基丙氨酸转化成牛磺酸，加入合适的衍生化试剂测定生成的牛磺酸的含量，进而计算半胱亚磺酸脱羧酶的酶活力，所述衍生化试剂经向甲醇中溶解邻苯二甲醛，再加入乙硫醇混合，然后用硼酸钠缓冲液定容得到，可以准确、简洁、安全的测定海洋生物体内半胱亚磺酸脱羧酶的酶活力，而且检测成本低，同时也可以用于其他动物体内的半胱亚磺酸脱羧酶的酶活力的测定，具有普遍适用性。

A method for determining the activity of cysteine decarboxylase decarboxylase in marine organisms

The invention belongs to the technical field of biological detection method for determination of enzyme activity, in particular to a marine organism CSAD the isolated solution containing cysteine sulfinate decarboxylase from marine organism tissue samples, cysteic acid under appropriate reaction conditions will be added into taurine was added to generate the derivatization reagent suitable for determination of taurine, enzyme activity and calculation of cysteine sulfinate decarboxylase, the derivatization reagent was dissolved in methanol to the adjacent benzene two formaldehyde, adding ethyl mercaptan mixture, then using sodium borate buffer sizing, can be accurate and concise and safe determination of marine organisms in half cysteine sulfinate decarboxylase enzyme activity, and low detection cost, but also can be used for determination of enzyme activity in vivo animal CSAD of, It has universal applicability.

【技术实现步骤摘要】
一种海洋生物体内半胱亚磺酸脱羧酶的酶活力的测定方法
本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种海洋生物体内半胱亚磺酸脱羧酶的酶活力的测定方法。
技术介绍
半胱亚磺酸脱羧酶是一种氨基酸脱羧酶，用于催化半胱亚磺酸脱羧产生氨乙基亚磺酸和二氧化碳的酶，胺乙基亚磺酸经过脱氢而生成牛磺酸。该酶可在动物的肝脏、脾脏、肾脏、小肠壁等中见到，以磷酸吡哆醛为辅酶。而牛磺酸是一种含硫的非蛋白氨基酸，在动物体内以游离状态存在，是调节机体正常生理活动的活性物质，具有广泛的生理功能，可以增强细胞抗氧化能力、保护心肌细胞、提高神经传导和视觉机能、防止心血管病、改善内分泌状态，在临床上被广泛应用于心血管疾病、糖尿病、消化道疾病、神经系统疾病、眼部疾病等一系列疾病的治疗，在哺乳动物的主要脏器，以及海洋生物，特别是海鱼、贝类中广泛分布。但是动物体内牛磺酸的生物合成途径较为复杂，尤其是相比于哺乳动物，海洋生物体内牛磺酸含量虽然非常丰富，但其合成途径的机理还不清楚。因此以生产牛磺酸主要途径中的半胱亚磺酸脱羧酶为对象，通过建立快速灵敏的分析方法来评价不同种类海洋生物体内半胱亚磺酸脱羧酶的活力，对于后续进一步研究海洋生物体内本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种海洋生物体内半胱亚磺酸脱羧酶的酶活力的测定方法，其特征在于，从海洋生物体的组织样品中分离出含半胱亚磺酸脱羧酶的溶液，在合适的反应条件下将加入的磺基丙氨酸转化成牛磺酸，测定生成的牛磺酸的含量，进而计算半胱亚磺酸脱羧酶的酶活力。

【技术特征摘要】
1.一种海洋生物体内半胱亚磺酸脱羧酶的酶活力的测定方法，其特征在于，从海洋生物体的组织样品中分离出含半胱亚磺酸脱羧酶的溶液，在合适的反应条件下将加入的磺基丙氨酸转化成牛磺酸，测定生成的牛磺酸的含量，进而计算半胱亚磺酸脱羧酶的酶活力。2.根据权利要求1所述的海洋生物体内半胱亚磺酸脱羧酶的酶活力的测定方法，其特征在于，测定生成的牛磺酸的含量包括以下步骤，首先向含牛磺酸的溶液中加入合适的衍生化试剂，然后经高效液相色谱法测定衍生物的浓度。3.根据权利要求2所述的海洋生物体内半胱亚磺酸脱羧酶的酶活力的测定方法，其特征在于，所述衍生化试剂经以下过程制备而成：向1mL的甲醇中溶解0.01g的邻苯二甲醛，再加入0.01mL的乙硫醇混合，然后用0.4mol/L的硼酸钠缓冲液定容至10mL得到衍生化试剂。4.根据权利要求1或2或3所述的海洋生物体内半胱亚磺酸脱羧酶的酶活力的测定方法，包括以下步骤：（1）将海洋生物体的组织样品洗净、匀浆、离心并保留上清液；（2）向定量体积的上清液中加入1～1.2倍体积的磺基丙氨酸溶液、0.2～0.24倍体积的磷酸吡哆醛溶液，然后35～39℃下震荡反应1～3h得到反应液，将反应液煮沸灭酶活性5～10min；（3）向定量体积的反应液中加入等体积的衍生化试剂并加热震荡反应，过滤得到测试液；（4）经高效液相色谱法建立牛磺酸的浓度与峰面积的标准曲线；（5）将测试液经高效液相色谱法分析并由步骤（4）中的标准曲线得到牛磺酸的浓度；（6）由步骤（5）中牛磺酸的浓度计算出半胱亚磺酸脱羧酶的酶活力。5.根据权利要求4所述的海洋生物体内半胱亚磺酸脱羧酶的酶活力的测...

【专利技术属性】
技术研发人员：柳小英，毛丽沙，鲍敏洁，金火喜，
申请(专利权)人：浙江海洋大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33