一类抗氧化超短肽及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一类抗氧化超短肽及其应用，属于生物医学技术领域。所述的超短肽是直链超短肽，Purin‑WH1分子量为544.71Da，等电点是8.19，含有5个氨基酸残基，全序列的一级结构为缬氨酸‑缬氨酸‑半胱氨酸‑脯氨酸‑赖氨酸；Purin‑WH2分子量为641.83Da，等电点是8.19，含有6个氨基酸残基，全序列的一级结构为缬氨酸‑缬氨酸‑脯氨酸‑脯氨酸‑半胱氨酸‑赖氨酸。化学合成后，二者均显示极强的抗氧化活性，相比临床抗氧化剂谷胱甘肽，清楚自由基效果更优，且没有溶血性及细胞毒性。可以用作制备抗氧化药物、食品添加剂、抗氧化化妆品。

A class of antioxidant ultra short peptides and their applications

The present invention provides one kind of antioxidant ultra short peptide and its application, belonging to the field of biomedical technology. Short peptide which is a straight chain of short peptide Purin, WH1 molecular weight of 544.71Da and isoelectric point is 8.19, containing 5 amino acid residues, a secondary structure sequence for proline valine valine cysteine lysine; Purin WH2 molecular weight of 641.83Da and isoelectric point is 8.19, containing 6 amino acid residues, a secondary structure sequence for valine valine proline proline cysteine lysine. After chemical synthesis, the two showed strong antioxidant activity. Compared with the clinical antioxidant glutathione, the effect of free radical was better, and there was no hemolysis and cytotoxicity. It can be used as an antioxidant, a food additive and an antioxidant cosmetic.

【技术实现步骤摘要】
一类抗氧化超短肽及其应用
本专利技术涉及一类抗氧化超短肽及其应用，属于生物医学

技术介绍
自由基是具有强氧化活性的一组物质，极易发生反应。活性氧自由基不仅会使人体内的脂质与蛋白质发生链式氧化反应导致细胞膜、组织、酶和基因受损,对肌体造成了损害和衰老，而且会促使有关的基因突变，诱发相关的疾病，如动脉硬化症、高血压、类风湿性关节炎、白内障、老年痴呆症、帕金森氏病以及神经退行性病变等。越来越多的医学研究及临床试验证据显示，体内自由基含量越高寿命越短，自由基可谓“万病之源”。近年来抗氧化在化妆品领域的应用中很广泛。由于皮肤的光老化作用是由于紫外线诱导皮肤细胞产生大量的氧自由基堆积而造成的。现在许多护肤品中加入抗氧化剂,有减少雀斑、防辐射、延缓衰老、调节免疫和提高皮肤自我保护的作用。此外食品中营养成分的氧化反应会产生过氧化物。过氧化物影响食品的营养价值，甚至严重还可导致疾病发生，寻找安全的抗氧化剂以抑制过氧化物产生一直是生化营养学的研究热点。目前，化工领域常用抗氧化剂多为化学合成物，如BHA、BHT等，虽抗氧化效果良好，但对人体肝、脾、肺有蓄积性致癌作用。临床上常见的抗氧化剂如维生素C、维生素E与谷胱甘肽等。维生素C主要以清除·OH为主，但需大剂量使用才能达到目的，但同时，大剂量维生素C使用容易导致酸中毒；维生素E主要通过抑制细胞膜上的脂质过氧化来达到抗氧化的目的，但长期是用则有潜在的致突变风险。而临床还原型谷胱甘肽的产业化壁垒较高，已被日本协和发酵工业株式会社几乎垄断全球谷胱甘肽的供应,每公斤高达8000美金。同时，现在国内制药企业所用的谷胱甘肽制药原料还不能摆脱进口，谷胱甘肽价格一直居高不下。可见，活性佳、易合成、产量高的新型抗氧化肽已在医疗、食品、化妆品等领域中亟待开发。小分子超短肽Purin-WH1、Purin-WH2，具有极强的抗氧化活性，invitro对多种自由基的清除率优于临床抗氧化制剂——谷胱甘肽，且无细胞毒、无溶血，稳定性高。Purin-WH1、Purin-WH2一级序列全长只有5-6个氨基酸残基、分子量小、结构简单、无蛋白修饰，通过化学合成方法制备，工艺简便、产量高且纯度高，对比临床还原型谷胱甘肽，生产成本大大降低。因此，本专利中的两种超短肽Purin-WH1、Purin-WH2具有十分突出有益的效果。
技术实现思路
本专利技术涉及一类抗氧化超短肽，包括两种抗氧化超短肽Purin-WH1、Purin-WH2及其在制备抗氧化药物、食品、化妆品添加剂的应用。本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供的两种抗氧化超短肽Purin-WH1、Purin-WH2化学合成的方法得到。其中Purin-WH1分子量为544.71Da，等电点是8.19，含有5个氨基酸残基；Purin-WH2分子量为641.83Da，等电点是8.19，含有6个氨基酸残基；两种超短肽均具有极强的抗氧化活性，浓度为3mM时对DPPH自由基清除率I％可以达到58.54％、59.89％；对ABTS·+正离子自由基清除率I％为96.02％、72.16％。并且两种抗氧化超短肽Purin-WH1、Purin-WH2分子量小、结构简单、溶血活性低、细胞毒性极低、制备方法简单等，因此将其应用在抗氧化药物、食品或者化妆品添加剂中，可以提高药物、食品或化妆品添加剂的抗氧化效果，具有很好的应用前景。附图说明图1是超短肽Purin-WH1、Purin-WH2对HFF-1细胞的毒性图。图中：具体实施方式以下结合附图和技术方案，进一步说明本专利技术的具体实施方式。实施例1两种抗氧化超短肽Purin-WH1、Purin-WH2的化学合成：(1)两种抗氧化超短肽Purin-WH1、Purin-WH2的化学合成方法：根据超短肽氨基酸序列，用自动多肽合成仪(433A,AppliedBiosystems)合成二者的全序列，通过HPLC反相柱层析脱盐。(2)分子量测定采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)。(3)纯化的两种抗氧化超短肽Purin-WH1、Purin-WH2用高效液相色谱HPLC方法鉴定其纯度，分子量测定采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)，等电聚焦电泳测定等电点，用自动氨基酸测序仪测定氨基酸序列结构。两种抗氧化超短肽Purin-WH1、Purin-WH2是直链小肽，其中Purin-WH1分子量为544.71Da，等电点是8.19，含有5个氨基酸残基，全序列的一级结构为缬氨酸-缬氨酸-半胱氨酸-脯氨酸-赖氨酸；Purin-WH2分子量为641.83Da，等电点是8.19，含有6个氨基酸残基，全序列的一级结构为缬氨酸-缬氨酸-脯氨酸-脯氨酸-半胱氨酸-赖氨酸；实施例2两种抗氧化超短肽Purin-WH1、Purin-WH2的抗氧化实验：(1)两种超短肽Purin-WH1、Purin-WH2抗氧化活性测定(1.1)DPPH自由基清除活性(DPPHradicalscavengingassay)称取一定量的DPPH(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazylhydrate，Sigma，美国)，用甲醇溶解，配成6×10-5M的溶液，现配现用。将48μlDPPH溶液和2μl样品混合(最终样品与DPPH的质量比为3:1)，室温下避光静置30min，于517nm处测定吸光值。空白对照组以样品溶解介质代替待测样品。实验做三个平行，紫外分光光度计调零时使用甲醇。DPPH·清除率(％)＝(AB－AA)/AB×100(AB:空白对照组吸光值；AA:样品组吸光值)。(1.2)ABTS·+自由基正离子清除活性ABTS(3-ethylbezothiazoline-6-sulfonicacid)(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)用PBS缓冲液(pH7.4)配成2mM的ABTS储存液。将ABTS储存液和70mM过硫酸钾(K2S2O8)水溶液按体积比250:1混合，于室温避光放置15-16h。试验开始前，将ABTS·+释至734nm波长处的吸光值为0.80±0.03。将4μl样品和96μl上述校正过的ABTS·+溶液混合，室温放置10min后，于734nm波长处检测反应液的吸光值。空白对照组为溶解样品所用灭菌去离子水。实验做三个平行。ABTS·+清除率I(％)＝(AB－AA)/AB×100(AB:空白对照组吸光值；AA:样品组吸光值)。表1.超短肽Purin-WH1、Purin-WH2抗氧化活性结果如表1所示，超短肽Purin-WH1、Purin-WH2具有极强的抗氧化活性。在样品浓度为3mM时，超短肽Purin-WH1、Purin-WH2对DPPH自由基清除率I％可以达到58.54％、59.89％；对ABTS·+正离子自由基清除率I％为96.02％、72.16％。与临床药物谷胱甘肽具备相当抗氧化活性。故超短肽Purin-WH1、Purin-WH2将在抗氧化药品、食品等领域具有优秀的开发潜力。(2)超短肽Purin-WH1、Purin-WH2溶血与细胞毒测定(2.1)溶血性检测将采集的健康人血与阿氏液混合抗凝，生理盐水洗涤2次并重悬成107-108cell/ml的悬浮液。上述稀释好的红细胞悬液与溶解于生理盐水的超短肽Mapin-WH2样品混本文档来自技高网...

【技术保护点】
一类抗氧化超短肽，包括两种抗氧化超短肽：Purin‑WH1和Purin‑WH2；其特征在于：所述的抗氧化超短肽Purin‑WH1：一种直链小肽，分子量为544.71Da，等电点是8.19，含有5个氨基酸残基，全序列的一级结构为缬氨酸‑缬氨酸‑半胱氨酸‑脯氨酸‑赖氨酸；所述的抗氧化超短肽Purin‑WH2：一种直链小肽，分子量为641.83Da，等电点是8.19，含有6个氨基酸残基，全序列的一级结构为缬氨酸‑缬氨酸‑脯氨酸‑脯氨酸‑半胱氨酸‑赖氨酸。

【技术特征摘要】
1.一类抗氧化超短肽，包括两种抗氧化超短肽：Purin-WH1和Purin-WH2；其特征在于：所述的抗氧化超短肽Purin-WH1：一种直链小肽，分子量为544.71Da，等电点是8.19，含有5个氨基酸残基，全序列的一级结构为缬氨酸-缬氨酸-半胱氨酸-脯氨酸-赖氨酸；所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：于海宁，王慧，王义鹏，
申请(专利权)人：择天生物科技大连有限公司，
类型：发明
国别省市：辽宁,21