通过HPLC法分离测定维生素E及其制剂中杂质的方法技术

本发明专利技术公开了一种通过高效液相色谱法分离测定维生素E及其制剂中杂质的方法，采用以下方式：色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈、乙醇和水的混合溶液为流动相A，以乙腈、乙醇和甲醇的混合溶液为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长：260～310nm；柱温：25～45℃；流动相流速：0.5～2.0mL/min；进样量：20～150μL；样品溶液配制：采用极性溶剂配制dl‑α‑生育酚醋酸酯峰鉴别对照品溶液，其浓度可以为0.5～3mg/mL；测定：将上述溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图并进行分析。利用本发明专利技术的方法可以准确的进行原料药维生素E及其制剂的有关物质的定量分析，从而保证了维生素E及其制剂的质量可控性。

Separation and determination of impurities in vitamin E and its preparations by HPLC

The invention discloses a method by high performance liquid chromatography method for the determination of impurities in vitamin E and its preparation, use the following method: chromatographic conditions: Eighteen alkyl silane bonded silica as filler, with the mixture of acetonitrile, ethanol and water as mobile phase A, with the mixture of acetonitrile, ethanol and methanol as the B of mobile phase, gradient elution; detection wavelength: 260 ~ 310nm; column temperature: 25 to 45 DEG C; flow rate: 0.5 ~ 2.0mL/min; sample size: 20 ~ 150 L; samples are prepared by polar solvent to prepare DL alpha tocopherol acetate peak identification control solution, the the concentration can be 0.5 ~ 3mg/mL; determination: the solution was injected into the HPLC chromatogram, recording and analysis. By using the method of the invention, the quantitative analysis of the related substances of the raw material medicine vitamin E and the preparation thereof can be carried out accurately, thereby ensuring the quality controllability of vitamin E and the preparation thereof.

【技术实现步骤摘要】
通过HPLC法分离测定维生素E及其制剂中杂质的方法
本专利技术属于医药
，特别是涉及药物分析检测领域。本专利技术旨在建立高效液相色谱法（HPLC法）分离测定维生素E及其相关制剂中杂质的方法。
技术介绍
维生素E是一种脂溶性维生素，又称生育酚、抗不孕维生素等，具有抗氧化、繁殖、免疫、抗衰老等一系列重要的生理生化功能，是动物和人类必不可少的一种微量营养素。本品分为合成型或天然型维生素E，合成型为（±）-2,5,7,8-四甲基-2-（4,8,12-三甲基十三烷基）-6-苯并二氢吡喃醇醋酸酯或dl-α-生育酚醋酸酯，天然型为（+）-2,5,7,8-四甲基-2-（4,8,12-三甲基十三烷基）-6-苯并二氢吡喃醇醋酸酯或d-α-生育酚醋酸酯。结构式为：分子式为C31H52O3，分子量为472.75。由于维生素E在合成过程中有可能引入残留原料及其它杂质，在储藏过程或含维生素E制剂的工艺过程中有可能会产生降解产物：已知杂质dl-α-生育酚醋酸酯杂质A和dl-α-生育酚醋酸酯杂质B。因此，对该两种相关物质的定量控制具有重要意义。其结构式如下：对维生素E杂质的检测方法目前仅有气相色谱法和滴定法，尚未检索到维生素E杂质检测的高效液相色谱法，且气相色谱法实验条件苛刻、操作繁琐、重现性较差，滴定法检出杂质单一，不能有效全面控制维生素E及其制剂的质量。我们经过一系列试验研究及方法学验证实验，成功制定了一种采用高效液相色谱法测定维生素E或含有维生素E的制剂中杂质的方法，根据实验结果并结合维生素E（dl-α-生育酚醋酸酯）EP8.0标准中所述杂质的RRT，来确定上述两种杂质的相对保留时间。本法有效地对维生素E进行纯度分析，本试验采用普通的色谱柱（C18色谱柱）快速准确地实现了维生素E或含有维生素E的制剂中杂质的测定，操作简捷、专属性好、灵敏度高、重现性好，能够较好地控制维生素E及其制剂的质量，对合成和制剂工艺过程的质量控制、保证人民用药安全具有重要的现实意义。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于研究设计一种操作简便、快速有效、专属性好、灵敏度高、重现性好的维生素E或含有维生素E的制剂中杂质检测方法。为此，本专利技术提供了一种使用高效液相色谱法测定维生素E或含有维生素E的制剂中杂质的方法，采用以下方式进行：色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈、无水乙醇和水的混合溶液为流动相A，以乙腈、无水乙醇和甲醇的混合溶液为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长：260～310nm；柱温：25～45℃；流动相流速：0.5～2.0mL/min；进样量：20～150μL；样品溶液的配制：采用极性溶剂配制dl-α-生育酚醋酸酯峰鉴别对照品溶液，其浓度可以为0.5～3mg/mL，所述极性溶剂选自乙醇或甲醇；测定：将上述溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图并进行分析；所述杂质dl-α-生育酚醋酸酯杂质A和dl-α-生育酚醋酸酯杂质B；维生素E与各杂质的分离度、各杂质间的分离度均大于1.5。所述的通过高效液相色谱法分离测定维生素E及其制剂中杂质的方法，色谱柱为以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，其粒度为3μm、5μm、7μm或10μm；其内径为2～5mm，例如是4mm、4.6mm或5mm；其长度为10～30cm，例如是15cm、25cm或30cm。以上所述的通过高效液相色谱法分离测定维生素E有关物质的方法，色谱柱优选为C18柱（250×4.6mm，5μm）。以上所述的通过高效液相色谱法分离测定维生素E及其制剂中杂质的方法，流动相A为乙腈、乙醇和水以体积比30～70:0～20:20～60的混合液；流动相B为乙腈、乙醇和甲醇以体积比20～60:5～30:10～50的混合液。以上所述的通过高效液相色谱法分离测定维生素E及其制剂中杂质的方法，流动相A优选为乙腈、乙醇和水以体积比40:10:50的混合液；流动相B优选为乙腈、乙醇和甲醇以体积比30:25:45的混合液。以上所述的通过高效液相色谱法分离测定维生素E及其制剂中杂质的方法，所述梯度洗脱为：在＜110min内，流动相A与流动相B的体积比为（10～45）:（90～55）；在≥110min且＜112min内，流动相A与流动相B的体积比为（0～45）:（100～55）；在≥112min且＜140min内，流动相A与流动相B的体积比为（0～20）:（100～80）；在≥140min且＜142min内，流动相A与流动相B的体积比为（0～45）:（100～55）；在≥142min且＜150min内，流动相A与流动相B的体积比为（20～50）:（80～50）。以上所述的通过高效液相色谱法分离测定维生素E及其制剂中杂质的方法，所述梯度洗脱优选为：在＜110min内，流动相A与流动相B的体积比为20:80；在≥110min且＜112min内，流动相A与流动相B的体积比为（20～10）:（80～90）；在≥112min且＜140min内，流动相A与流动相B的体积比为10:90；在≥140min且＜142min内，流动相A与流动相B的体积比为（10～20）:（90～80）；在≥142min且＜150min内，流动相A与流动相B的体积比为20:80。以上所述的通过高效液相色谱法分离测定维生素E及其制剂中杂质的方法，检测波长优选为272nm。以上所述的通过高效液相色谱法分离测定维生素E及其制剂中杂质的方法，柱温优选为30℃。以上所述的通过高效液相色谱法分离测定维生素E及其制剂中杂质的方法，流动相流速优选为1.2mL/min。以上所述的通过高效液相色谱法分离测定维生素E及其制剂中杂质的方法，进样量优选为80μL。以上所述的通过高效液相色谱法分离测定维生素E及其制剂中杂质的方法，样品溶液配制优选为dl-α-生育酚醋酸酯峰鉴别对照品溶液浓度为1.0mg/mL。本专利技术的有益效果：采用本专利技术的方法来控制维生素E及其制剂中的杂质含量，可以实现维生素E与各杂质的完全分离，其与各杂质的分离度、各杂质间的分离度均大于1.5，理论塔板数按维生素E计算达到6778，且杂质的检测灵敏度非常高。利用本专利技术的方法可以准确的进行原料药维生素E及其制剂的杂质的定量分析，从而保证了维生素E及其制剂的质量可控性。附图说明图1：实施例1维生素E及其杂质分离的图谱图2：实施例1维生素E杂质测定的图谱图3：实施例1含维生素E制剂杂质测定的图谱图4：实施例1含维生素E制剂杂质测定的空白辅料图谱图5：实施例2含维生素E制剂杂质测定的图谱图6：实施例3含维生素E制剂杂质测定的图谱图7：实施例4含维生素E制剂杂质测定的图谱。具体实施方式以下实施例仅对本
技术实现思路
做进一步说明，并不限定本专利技术。以下实施例所用的dl-α-生育酚醋酸酯峰鉴别对照品来源EP，维生素E购自巴斯夫公司，含维生素E的制剂为自制。实施例1仪器：Waters高效液相色谱仪；色谱柱：WondasilC18色谱柱（250×4.6mm，5μm）；流动相：流动相A：乙腈-乙醇-水（35:10:55）流动相B：乙腈-乙醇-甲醇（45:15:40）；梯度洗脱程序：时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）0208011020801121090140109014220801502080检测波长：272nm；柱温：30℃流本文档来自技高网...

【技术保护点】
通过高效液相色谱法分离测定维生素E及其制剂中杂质的方法，其特征在于，采用以下方式进行：色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈、乙醇和水的混合溶液为流动相A，以乙腈、乙醇和甲醇的混合溶液为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长：260～310nm；柱温：25～45℃；流动相流速：0.5～2.0mL/min；进样量：20～150μL；样品溶液的配制：采用极性溶剂配制dl‑α‑生育酚醋酸酯峰鉴别对照品溶液，其浓度可以为0.5～3mg/mL，所述极性溶剂选自乙醇或甲醇；测定：将上述溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图并进行分析；所述杂质dl‑α‑生育酚醋酸酯杂质A和dl‑α‑生育酚醋酸酯杂质B；维生素E与各杂质的分离度、各杂质间的分离度均大于1.5。

【技术特征摘要】
1.通过高效液相色谱法分离测定维生素E及其制剂中杂质的方法，其特征在于，采用以下方式进行：色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈、乙醇和水的混合溶液为流动相A，以乙腈、乙醇和甲醇的混合溶液为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长：260～310nm；柱温：25～45℃；流动相流速：0.5～2.0mL/min；进样量：20～150μL；样品溶液的配制：采用极性溶剂配制dl-α-生育酚醋酸酯峰鉴别对照品溶液，其浓度可以为0.5～3mg/mL，所述极性溶剂选自乙醇或甲醇；测定：将上述溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图并进行分析；所述杂质dl-α-生育酚醋酸酯杂质A和dl-α-生育酚醋酸酯杂质B；维生素E与各杂质的分离度、各杂质间的分离度均大于1.5。2.根据权利要求1所述的通过高效液相色谱法分离测定维生素E及其制剂中杂质的方法，其特征在于，所述色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，其粒度为3μm、5μm、7μm或10μm；其内径为2～5mm，例如是4mm、4.6mm或5mm；其长度为10～30cm，例如是15cm、25cm或30cm。3.根据权利要求1所述的通过高效...

【专利技术属性】
技术研发人员：邵爱霞，孟祥娟，王雅洁，
申请(专利权)人：济南维瑞医药科技开发有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37