一种用于预防治疗番鸭细小病毒病的卵黄抗体制造技术

发明专利技术的目的是提供一种用于预防治疗番鸭细小病毒病的卵黄抗体，是用保藏编号为CGMCC No.8504的番鸭细小病毒作为抗原制备的。本发明专利技术用番鸭细小病毒YBMDP株接种番鸭胚，分别收获死亡胚胚体和胚液，经研磨、冻融后收取病毒液，经超滤浓缩、甲醛溶液灭活后，加油佐剂混合乳化制成疫苗。用此疫苗接种产蛋鸡，收获鸡蛋，分离蛋黄，灭活、萃提精制得到抗体。制备的抗体能预防番鸭细小病毒引起的雏鸭细小病毒感染，此卵黄抗体具有高效、安全性好、保护率高等优点。

An egg yolk antibody for the prevention and treatment of Muscovy Duck Parvovirus Disease

The aim of the invention is to provide a kind of egg yolk antibody for the prevention and treatment of Muscovy Duck Parvovirus Disease, is CGMCC No.8504 with the preservation number of Muscovy Duck Parvovirus antigen preparation. With the invention of Muscovy Duck Parvovirus YBMDP strain of Muscovy duck embryo inoculation, respectively harvest embryo and embryo death body fluid, by grinding, freezing and thawing for virus liquid, concentrated by ultrafiltration, Formaldehyde Solution was inactivated, gas mixed emulsion adjuvant vaccine. The hens were inoculated with this vaccine, the eggs were harvested, the yolk was separated, inactivated, extracted and purified, and the antibodies were obtained. Antibody preparation can prevent the cause of Muscovy Duck Parvovirus Duck Parvovirus Infection, the yolk antibody has the advantages of high efficiency, good safety, high protection rate.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于兽用生物制品领域，具体涉及一种用于预防治疗番鸭细小病毒病的卵黄抗体。
技术介绍
番鸭细小病毒病是侵害雏番鸭的一种急性或亚急性传染病，它具有高度传染性，发病率和死亡率都很高，常造成严重的经济损失，主要发生于1～3周龄的雏番鸭，尤其是10日龄左右的雏番鸭，3周龄以上基本不发病。雏番鸭以喘气、腹泻及胰脏坏死和出血为主要特征的传染病。本病最早于20世纪80年代中后期出现于中国福建和法国西部Brittany地区，20世纪90年代初才认识到它是不同于小鹅瘟的独立疾病，死亡率高达80%。对死亡的番鸭如果处理不当，往往造成病毒的蔓延，产生更大的危害，目前市场上有预防该病的活疫苗，但而尚无快速有效的药物或方法来防治番鸭细小病毒病。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用于预防治疗番鸭细小病毒病的卵黄抗体，提供的卵黄抗体具有效价高、保护率高、安全性好等优点。本专利技术所提供的用于预防治疗番鸭细小病毒病的卵黄抗体，是用保藏编号为CGMCCNo.8504的番鸭细小病毒作为抗原制备的。该保藏编号为CGMCCNo.8504的番鸭细小病毒，为YBMDV株，已于2013年11月08日保藏于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。本专利技术的卵黄抗体，其制备包括如下的步骤1）用番鸭细小病毒作为抗原，制成灭活疫苗；2)将制备的灭活疫苗注射免疫产蛋鸡，来获得用番鸭细小病毒免疫后的鸡蛋；3）将免疫后的鸡蛋收集卵黄用酸化水-辛酸的方法萃提、灭活制成卵黄抗体。本专利技术用番鸭细小病毒YBMDP株接种番鸭胚，分别收获死亡胚胚体和胚液，经研磨、冻融后收取病毒液，经超滤浓缩、甲醛溶液灭活后，加油佐剂混合乳化制成疫苗。用此疫苗接种产蛋鸡，收获鸡蛋，分离蛋黄，灭活、萃提精制得到抗体。制备的抗体能预防番鸭细小病毒引起的雏鸭细小病毒感染，此卵黄抗体具有高效、安全性好、保护率高等优点。具体实施方式本专利技术使用的抗原为番鸭细小病毒YBMDP株，其信息如下:一、YBMDV株的筛选2011年从浙江省某鸭场爆发了急性的番鸭细小病毒病，取病死鸭的胰脏及肠道，将胰脏及肠道组织用无生理盐水匀浆制成20%悬液，3000r/min离心15min，取上清除菌后经尿囊腔分别接种13日龄番鸭胚，孵化120小时，收集尿囊液及胚体组织，经匀浆后，反复冻融3次，取上清液冻存。收获的病毒液经纯化后进行了病毒含量、免疫原性、特异性及纯净性等方面的病毒特性的分析检测，结果表明该毒株病毒含量为105.7ELD50/0.2ml,最小免疫剂量为102.0ELD50/0.2ml，该病毒仅与番鸭细小病毒发生特异性反应，无细菌、支原体及外源病毒污染，适合作为制苗用毒株。将筛选的病毒株于2013年11月08日保藏于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.8504。对于本专利技术筛选的毒株的性状进行检测，结果表明，该株病毒属细小病毒，圆形无囊膜，直径在20μｍ左右、对乙醚、胰蛋白酶、酸不敏感，对红细胞无凝集现象。该病毒可引起雏番鸭发生以出血性肠炎为特征的急性败血性传染病。该毒株制备的疫苗免疫成年番鸭后，能保护免疫4个月内种番鸭所产子代免受流行毒株的攻击。该毒株作100倍稀释后，与等量雏番鸭细小病毒病抗血清中和，接种13日龄番鸭胚，结果表明，中和组番鸭胚全部健活，而病毒对照组番鸭胚全部死亡。对筛选的YBMDV株的结构基因VP进行测序,结果VP全长为2199bp，编码732个氨基酸；NCBI的blast序列分析表明，YBMDV株的结构基因VP与已公开的番鸭细小病毒的VP存在差异位点，同源性为97.7％～98.3％（即存在着9-16个氨基酸的差异）。实施例11.制苗用病毒液的制备将生产用毒种YBMDV株，尿囊腔接种12～14日龄易感番鸭胚，每胚0.2ml，36～37℃孵育，每日2次照胚检查。选择接种后48～120小时内死亡，且胚体有广泛出血，毛囊出血，肝脏变性和坏死，绒毛尿膜有轻度水肿的鹅胚，取其尿囊液及鹅胚体放入组织捣碎机中粉碎，取粉碎后的组织按1:2加入生理盐水混合；置2～8℃4～12小时，收取尿囊液、羊水及胚体（去掉头和四肢）。用胚液匀浆、冻融3次，4000r/min离心30min，取上清混合于无菌容器中，置2～8℃保存。（参见表1）。表1:病毒液的制备毒株名称制苗材料接种胚数（枚）胚日龄收获毒液（ml）YBMDP株番鸭胚1001312002.灭活将病毒液倒入灭活瓶内，计量加入10%甲醛溶液，使其充分混合，甲醛溶液的最终浓度为0.2%。加甲醛溶液后倒入另一灭活罐中，以避免罐口附近粘附的病毒未能接触灭活剂。37℃灭活16小时后取出，置2～8℃保存。3.疫苗半成品检验（1）无菌检验取灭活的胚液，按现行《中国兽药典》附录进行，无菌生长。（2）病毒含量测定将病毒液用灭菌生理盐水作10倍系列稀释，取10-2、10-3、10-4、10-54个稀释度，分别尿囊腔接种12～14日龄易感番鸭胚，每胚0.2ml，同时设接种生理盐水对照5枚，每胚0.2ml。置36～37℃继续孵育，每日照胚2次，观察168小时。以鸡胚死亡并出现尿囊膜水肿增厚，头、颈、背部等全身出血性病变判为感染，计算ELD50为104.7ELD50/0.2ml。（3）灭活检验将病毒液尿囊腔接种12～14日龄易感番鸭胚10枚，每胚0.2ml，置36～37℃继续孵育，连续观察168小时，鸭胚均无死亡。4.灭活疫苗的制备：经过检验合格后的半成品抗原进行疫苗制备（以下配制中各液体成分按体积比计，参见表2）。（1）油相制备取兽用白油95份，硬脂酸铝1份，置于油相制备罐中加热至80℃后，再加司本－805份，至温度达到115℃时，维持30min，冷却后备用。（2）水相制备将灭活检验合格的病毒液混合，检测每0.2ml水相中含YBMDP株病毒含量不低于104.0ELD50。取灭菌后的吐温-805份，加入配液罐中，同时加混合抗原液95份，开动搅拌电机搅拌20～30min，使吐温-80完全溶解。（3）乳化取油相2份放于高速剪切机内，开动电机慢速转动搅拌，同时徐徐加入水相1份，以10000r/m本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种卵黄抗体，其特征在于，所述的卵黄抗体是用番鸭细小病毒YBMDV株作为抗原制备的。

【技术特征摘要】
1.一种卵黄抗体，其特征在于，所述的卵黄抗体是用番鸭细小病毒YBMDV株作为抗原制备的。
2.如权利要求1所述的卵黄抗体，其特征在于，所述的番鸭细小病毒YBMDV株的番鸭细小病毒YBMDV株已于2013年11月08日保藏于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.8...

【专利技术属性】
技术研发人员：宫晓，徐保娟，宋新宇，李陆梅，胡潇，张维，王龙，
申请(专利权)人：青岛易邦生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37