一套大熊猫微卫星位点的三重PCR体系检测方法技术

本发明专利技术属于生物工程技术领域，具体涉及一套大熊猫微卫星位点的三重PCR体系检测方法。本发明专利技术一套大熊猫微卫星位点的三重PCR体系检测方法，大致包括1）提取基因组DNA；2）评估原始引物（单对引物）扩增产物的片段大小；3）设计并优化三重PCR引物组合；4）三重PCR扩增及条件优化；5）基因分型效果检测并确定最终组合方式。本发明专利技术大熊猫微卫星位点的三重PCR体系检测方法简单，与大熊猫常规的微卫星PCR体系相比，节约66.7%的DNA样本、66.7%的成本、效率提高了200%。本发明专利技术可在大熊猫的亲子鉴定、种群遗传多样性和遗传结构的评估方面进行推广。

A method of detecting three microsatellite PCR loci in giant panda microsatellite loci

The invention belongs to the technical field of biological engineering, in particular relates to a method for detecting the three microsatellite PCR system of giant panda microsatellite loci. Three PCR system of the invention is a set of giant panda microsatellite loci detection method, including 1) genomic DNA; 2) to evaluate the original primers (single primer) amplified fragment size; 3) design and optimization of three PCR primers; 4) and the three PCR amplification optimization; 5) genotype effect detection and determine the final combination. Compared with the conventional microsatellite PCR system of giant panda, the invention has the advantages of saving 66.7% of DNA samples, 66.7% cost, and three efficiency improvement of 200% of the giant panda microsatellite loci, and the detection method of the PCR system is simple. The invention can be popularized in the aspects of parent offspring identification, population genetic diversity and genetic structure evaluation of giant pandas.

【技术实现步骤摘要】
一套大熊猫微卫星位点的三重PCR体系检测方法
本专利技术属于生物工程
，具体涉及一套大熊猫微卫星位点的三重PCR体系检测方法。
技术介绍
微卫星DNA是真核生物基因组中短的串联重复序列(ZietkiewiczE,RafalskiA,LabudaD.Genomefingerprintingbysimplesequencerepeat(SSR)-anchoredpolymerasechainreactionamplification.Genomics,1994,20:176-183)。由于微卫星位点数量多，在基因组中均匀分布，共显性遗传且易于检测，微卫星DNA得到了广泛的应用(WanQH,WuH,FujiharaT,etal.Whichgeneticmarkerforwhichconservationgeneticsissue.Electrophoresis,2004,25:2165-2176)。大熊猫的微卫星已用来解决亲子鉴定、遗传多样性、遗传结构等问题(LiDS,CuiHM,WangCD,etal.Afastandeffectivemethodtoperformpaternit本文档来自技高网...

【技术保护点】
一套大熊猫微卫星位点的三重PCR体系检测方法，其特征在于，包括以下步骤：a、DNA样品提取：采用Axygen血液基因组提取试剂盒对大熊猫血液基因组DNA进行提取；b、评估引物的扩增产物的大小：从文献中选择15对大熊猫微卫星引物，分别为Gpz6，Gpz47，Gpz20，Gpl47，Gpl29，Gpl60，Gpz54，Gpl8，Gpl31，Gpl44，Gpz51，Gpl28，Gpl53，Gpy20，Gpy5，在上述15对引物上游的5’端加入接头序列5’‑CACGACGTTGTAAAACGAC‑3’，引物合成后，分别对大熊猫DNA进行单重PCR扩增，对扩增后的PCR产物按照150～200bp，200...

【技术特征摘要】
1.一套大熊猫微卫星位点的三重PCR体系检测方法，其特征在于，包括以下步骤：a、DNA样品提取：采用Axygen血液基因组提取试剂盒对大熊猫血液基因组DNA进行提取；b、评估引物的扩增产物的大小：从文献中选择15对大熊猫微卫星引物，分别为Gpz6，Gpz47，Gpz20，Gpl47，Gpl29，Gpl60，Gpz54，Gpl8，Gpl31，Gpl44，Gpz51，Gpl28，Gpl53，Gpy20，Gpy5，在上述15对引物上游的5’端加入接头序列5’-CACGACGTTGTAAAACGAC-3’，引物合成后，分别对大熊猫DNA进行单重PCR扩增，对扩增后的PCR产物按照150～200bp，200～250bp，250bp以上三个不同区间进行初步分组；c、引物优化：采用PrimerPremier6.0重新设计引物使得扩增产物长度符合要求，且引物组合需使得三个片段区域各包含5对引物；d、引物组合评估：利用PrimerPremier6.0进行引物间的评估，选择两两引物之间ΔdG<4.0的引物组合备用；e、三重PCR体系：对d步骤选择的三重PCR组合均采用10μLPCR体系；f、三重PCR扩增条件优化：采用降落PCR程序实施三重PCR；g、基因分型：取1uLPCR产物在7%的变性聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳，激光扫描检测目的产物。2.根据权利要求1所述一套大熊猫微卫星位点的三重PCR体系检测方法，其特征在于，b步骤中扩增体系为：1μL含Mg2+的10xBuffer，0.8μL2.5mM的dNTP，引物的上下...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱英，杨海琼，李裕冬，熊铁一，
申请(专利权)人：四川省自然资源科学研究院，中国大熊猫保护研究中心，
类型：发明
国别省市：四川,51