The invention discloses a Alosa sapidissima male germ cells cryopreservation method, which comprises the following steps: (1) the male Alosa sapidissima alcohol sterilization treatment, then remove the spermary, rinse and soak in phosphate buffer of testis, into the tube, cold storage; (2) phosphate buffer discard the tube. Cut the testis in phosphate buffer clean, transferred to the frozen liquid loading in freezing tube, cooling box to program cooling to 80 DEG C, 1 2 days after transfer to cryopreservation in liquid nitrogen. The method of less steps, simple operation, good repeatability and can obtain high survival rate of alosasapidissima early germ cells to mature sperm, the male germ cells, for the protection of species resources, including the practical application is of great significance and value for the protection of wildlife resources.
【技术实现步骤摘要】
美洲鲥鱼雄性生殖细胞的冷冻保存方法
本专利技术涉及生殖细胞的冷冻保存方法,尤其是涉及美洲鲥雄性生殖细胞的冷冻保存方法。
技术介绍
鱼类生殖细胞不同于其他体组织细胞,其携带了生物体的遗传信息并能传递到子代,特别是生殖细胞中的原始生殖细胞和精原干细胞都具有一定的细胞全能性,既能通过细胞培养或种间细胞移植技术进行体内外细胞的增殖,也可进一步分化而产生配子,产生后代。因此,生殖细胞的冷冻保存,一方面是通过细胞工程技术进行生物种质改良的细胞基础,另一方面是水产优良或珍稀种质资源保护的最直接有效的方法。国内外关于鱼类精子保存的研究技术已经日趋完善,已分别建立了鲤科鱼类、鲑科鱼类、斑马鱼、罗非鱼、鲷科鱼类及鲻鱼等淡、海水鱼类的精子冷冻保存技术,并建立了某些淡、海水经济鱼类的冷冻精子库。同时,也有研究进行了鱼类雄性早期生殖细胞的冷冻保存,譬如有学者进行了斑马鱼、虹鳟、西伯利亚鲟、细鳞鲑等鱼类生殖细胞的冻存进行了相关研究。也有学者对各种鲟鱼的精巢细胞和草鱼性腺细胞(CO)进行冷冻保存。目前,最常见的细胞冻存方法都是将分离或培养的游离细胞进行冻存,复苏后再直接用于其它实验;此外精子冷冻保存一般是直接用冷冻剂稀释精液随后冻存。而本方法将性腺组织块直接进行冷冻保存,在解冻复苏后进行细胞分离,能得到各时期的生殖细胞,包括精原干细胞、精母细胞、精子细胞及成熟精子。但是,目前的冷冻保存技术对生殖细胞的发育期有很强的针对性,用于冻存早期生殖细胞和精子的冷冻剂、冷冻方法均有较大差异,而且因为冷冻剂成份复杂,程序繁琐,生殖细胞的存活率受多种因素的影响,包括实验人员的技术经验及统计方法的灵敏性 ...
【技术保护点】
一种美洲鲥鱼雄性生殖细胞冷冻保存方法,其特征是,包括以下步骤:(1)对雄性美洲鲥进行酒精杀菌处理,然后取出精巢组织,用磷酸盐缓冲液冲洗并浸泡精巢组织,装入试管,冷藏;(2)弃去所述试管的磷酸盐缓冲液,在干净的磷酸盐缓冲液中剪碎精巢组织,转移到冷冻保存液后分装于冻存管中,于程序降温盒中降温至‑80℃,1‑2天后转移到液氮中冷冻保存。
【技术特征摘要】
1.一种美洲鲥鱼雄性生殖细胞冷冻保存方法,其特征是,包括以下步骤:(1)对雄性美洲鲥进行酒精杀菌处理,然后取出精巢组织,用磷酸盐缓冲液冲洗并浸泡精巢组织,装入试管,冷藏;(2)弃去所述试管的磷酸盐缓冲液,在干净的磷酸盐缓冲液中剪碎精巢组织,转移到冷冻保存液后分装于冻存管中,于程序降温盒中降温至-80℃,1-2天后转移到液氮中冷冻保存。2.根据权利要求1所述美洲鲥鱼雄性生殖细胞冷冻保存方法,其特征是,所述步骤(1)中雄性美洲鲥为性成熟或性未成熟的个体。3.根据权利要求1所述美洲鲥鱼雄性生殖细胞冷冻保存方法,其特征是,所述步骤(1)中酒精灭菌处理时采用体积百分比含量为60~90%的酒精。4.根据权利要求1所述美洲鲥鱼雄性生殖细胞冷冻保存方法,其特征是,所述步骤(2)中冷冻保存液成份:每100mL中含有5~10mL二甲基亚砜,胎牛血清30~50mL,高糖DMEM1.3~1.4g,pH值缓冲剂Hepes0.4~0.5g。5.根据权利...
【专利技术属性】
技术研发人员:徐红艳,朱新平,吴栩灵,
申请(专利权)人:中国水产科学研究院珠江水产研究所,
类型:发明
国别省市:广东,44
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。