基于FRET辨别DNA碱基长度及检测单链DNA结合蛋白的生物传感方法技术

本发明专利技术公开了基于荧光共振能量转移(FRET)辨别DNA碱基长度并检测单链DNA结合蛋白(SSB)的荧光传感方法，具体步骤如下：(1)阳离子共轭聚合物(CCP)与铱配合物混合，然后加入PBS缓冲溶液，得到用于检测SSB的基于CCP与铱配合物FRET效应的荧光传感器体系。检测荧光强度，计算CCP(415nm)的荧光强度与铱配合物(530nm)的荧光强度比值；(2)加入不同长度的DNA或发卡DNA到步骤(1)中的体系，检测荧光强度的变化；(3)不同浓度的SSB加入到步骤(2)中，然后加入缓冲溶液，检测荧光强度的变化，获得一系列不同浓度的SSB对应的荧光强度比值，建立荧光强度比值I530/I415与SSB浓度之间的定量关系；根据定量关系可以辨别DNA碱基长度并检测样品中SSB的未知浓度。

Biosensing method for distinguishing base length of DNA and detecting single chain DNA binding protein based on FRET

The present invention discloses based on fluorescence resonance energy transfer (FRET) to identify DNA base length and the detection of single stranded DNA binding protein (SSB) fluorescence sensing method, the specific steps are as follows: (1) cationic conjugated polymer (CCP) mixed with iridium, then add PBS buffer solution for fluorescence sensor system CCP and iridium FRET effect detection based on SSB. The fluorescence intensity, calculation of CCP (415nm) and the fluorescence intensity of iridium complexes (530nm) fluorescence intensity ratio; (2) with different length of the DNA or DNA card to step (1) in the system, to detect the changes of fluorescence intensity; (3) different concentrations of SSB added to the step (2) in then, adding buffer solution, to detect the changes of fluorescence intensity, fluorescence intensity ratio obtained a series of different concentrations of SSB corresponding to the establishment of the quantitative relationship between the fluorescence intensity ratio of I530/I415 and SSB concentration; according to the quantitative relationship between the concentration of DNA bases can identify unknown length and samples in SSB.

【技术实现步骤摘要】
基于FRET辨别DNA碱基长度及检测单链DNA结合蛋白的生物传感方法
本专利技术涉及荧光生物传感器，一种基于荧光共振能量转移(FRET)辨别DNA碱基长度并检测单链DNA结合蛋白(SSB)的荧光传感方法。
技术介绍
DNA是生命的物质基础，编码着自然界千变万化的遗传现象，贮存着生物界无穷无尽的遗传信息。众所周知，DNA分子由A、T、C、G四种核苷酸经3’，5’-磷酸二酯键相连构成DNA的基本骨架，并组成遗传指令，以引导生物发育与生命机能运作。其中包含的指令，与病原基因和遗传疾病、基因表达调控、细胞增殖分化和调亡及癌症的发生、发展存在着重要的联系。如果它在结构上稍有所改变、缺失或增多，就可能会引起遗传信息的改变或各种疾病的出现。目前，简单的静电作用不能容易地区分单链DNA、双链DNA或是DNA的长度。因此，专利技术一种无标记、容易区分单链DNA、双链DNA或是DNA长度的分析传感方法对相关疾病的预前预后检测具有十分重要的意义。蛋白和DNA之间的作用在很多生物过程中起着非常重要的作用，例如：DNA的复制、转录、重组以及修复等生命活动。单链DNA结合蛋白(single-strandedDN本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于荧光共振能量转移(FRET)辨别DNA碱基长度并检测单链DNA结合蛋白(SSB)的荧光传感方法，具体步骤如下：(1)将85～95μL浓度为3～4mM阳离子共轭聚合物(CCP)与0.5～2μL浓度为0.5～2mM铱配合物混合，然后加入0.05～0.15M pH6.8～7.6的PBS缓冲溶液，得到用于检测SSB的基于CCP与铱配合物FRET效应的荧光传感器体系。检测荧光强度，计算CCP(415nm)的荧光强度与铱配合物(530nm)的荧光强度比值I530/I415。(2)a.加入1～3μL 5～15μM的DNA到步骤(1)中的体系，检测荧光强度的变化，计算CCP(415nm)的荧光强度与铱...

【技术特征摘要】
1.一种基于荧光共振能量转移(FRET)辨别DNA碱基长度并检测单链DNA结合蛋白(SSB)的荧光传感方法，具体步骤如下：(1)将85～95μL浓度为3～4mM阳离子共轭聚合物(CCP)与0.5～2μL浓度为0.5～2mM铱配合物混合，然后加入0.05～0.15MpH6.8～7.6的PBS缓冲溶液，得到用于检测SSB的基于CCP与铱配合物FRET效应的荧光传感器体系。检测荧光强度，计算CCP(415nm)的荧光强度与铱配合物(530nm)的荧光强度比值I530/I415。(2)a.加入1～3μL5～15μM的DNA到步骤(1)中的体系，检测荧光强度的变化，计算CCP(415nm)的荧光强度与铱配合物(530nm)的荧光强度比值I530/I415；b.加入1～3μL5～15μM的发卡DNA到步骤(1)中的体系，检测荧光强度的变化，计算CCP(415nm)的荧光强度与铱配合物(530nm)的荧光强度比值I530/I415。注：a部分的实验步骤用于不同碱基数量DNA的检测；b部分的实验步骤用于S...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡宇芳，张青青，杜春暖，王娇，饶家佳，郭智勇，葛国平，王邃，
申请(专利权)人：宁波大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33