糖尿病肾病检测标志物制造技术

本发明专利技术提供糖尿病肾病检测标志物，所述糖尿病肾病检测标志物由12种蛋白组成：角蛋白19，结合珠蛋白，载脂蛋白E，C反应蛋白，血小板因子4前体，性激素结合球蛋白前体，免疫球蛋白重链Viiiregionhil，补体成分C4，角蛋白6l，C反应蛋白前体剪接异构体1，丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶WNK4和CD 5抗原。与现有的检测方法相比，本发明专利技术的检测标志物特异性、灵敏度和准确性高，可作为糖尿病肾病诊断的依据。

【技术实现步骤摘要】
糖尿病肾病检测标志物
本专利技术涉及糖尿病肾病检测标志物。
技术介绍
糖尿病肾病是糖尿病常见的并发症，是糖尿病全身性微血管病变表现之一，临床特征为蛋白尿，渐进性肾功能损害，高血压，水肿，晚期出现严重肾功能衰竭，是糖尿病患者的主要死亡原因之一，目前常规检测方法难以早期发现糖尿病肾病。
技术实现思路
本专利技术提供了糖尿病肾病检测标志物，将其用于检测糖尿病肾病，具有良好的特异性、灵敏度和准确率。血液由于采样方便且能较好反映机体病理生理过程而成为疾病标志物的最好来源之一。但要寻找到特异性和准确性高，能用于临床检测的蛋白标志物，有一定难度。糖尿病肾病属于多因素相关疾病，很难寻找到单一的蛋白标志物。因此，本专利技术提供上述差异蛋白用于糖尿病肾病检测，采取该组合标志物的方式能提高检测的特异性和准确性，同时具有一定的客观性，优于单一疾病标志物。本专利技术上述12种血清差异蛋白组合可作为糖尿病肾病检测标志物，具有一定的客观性、特异性和准确性。需说明的是，本专利技术糖尿病肾病检测标志物的来源除血清外，糖尿病肾病检测标志物还可以来自尿样。本专利技术提供糖尿病肾病检测标志物，所述糖尿病肾病检测标志物由12种蛋白组成：角蛋白19，结合珠蛋白，载脂蛋白E，C反应蛋白，血小板因子4前体，性激素结合球蛋白前体，免疫球蛋白重链Viiiregionhil，补体成分C4，角蛋白6l，C反应蛋白前体剪接异构体1，丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶WNK4和CD5抗原。本专利技术还提供一种分离血清或尿液中糖尿病肾病检测标志物的方法，所述糖尿病肾病检测标志物为权利要求1中所述的12种蛋白，采用蛋白质双向电泳方法分离血清或尿液中的糖尿病肾病检测标志物；双向电泳优化条件为：1）第一向等电聚焦24cm上样量120微克水化50V12小时（20℃）主动水化S1250V线性0.5小时除盐S21000V线性2小时除盐S310000V线性6小时升压S410000V快速80000VHr聚胶S5500v快速3小时保持；在本条件下，每个样品重复3次，第一向等电聚焦结果良好，蛋白点分开良好。2）第二向垂直电泳采用恒压来跑胶，开始进样时选择低电压60V，待样品分胶液溴酚蓝浓缩成一条线之后，加大电压至200V，直到溴酚蓝指示剂跑到底部位置，停止跑胶。本专利技术还提供一种糖尿病肾病检测试剂盒，所述试剂盒包括健康人的血清，在血清中，糖尿病肾病检测标志物的表达量在正常范围内；所述糖尿病肾病检测标志物由12种蛋白组成：角蛋白19，结合珠蛋白，载脂蛋白E，C反应蛋白，血小板因子4前体，性激素结合球蛋白前体，免疫球蛋白重链Viiiregionhil，补体成分C4，角蛋白6l，C反应蛋白前体剪接异构体1，丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶WNK4和CD5抗原。本专利技术还提供12种蛋白在作为糖尿病肾病检测标志物中的应用；所述12种蛋白为：角蛋白19，结合珠蛋白，载脂蛋白E，C反应蛋白，血小板因子4前体，性激素结合球蛋白前体，免疫球蛋白重链Viiiregionhil，补体成分C4，角蛋白6l，C反应蛋白前体剪接异构体1，丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶WNK4和CD5抗原。本专利技术还提供一种检测糖尿病肾病的蛋白芯片，所述蛋白芯片中的蛋白为：角蛋白19，结合珠蛋白，载脂蛋白E，C反应蛋白，血小板因子4前体，性激素结合球蛋白前体，免疫球蛋白重链Viiiregionhil，补体成分C4，角蛋白6l，C反应蛋白前体剪接异构体1，丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶WNK4和CD5抗原。本专利技术提供的一组血清差异蛋白可用于糖尿病肾病检测，用于糖尿病肾病检测时，较单一疾病标记物，提高了检测的特异性和准确性，同时具有一定的客观性。本专利技术采用蛋白质双向电泳方法，对电泳条件进行了优化，获得了清晰的蛋白电泳结果；通过对糖尿病肾病患者血清与健康对照血清的电泳结果进行比较分析，获得了二者血清差异蛋白12个，与对照相比，表达上调蛋白10个，表达下调蛋白2个。还可以在本专利技术的基础上进一步采用酶联免疫技术对这些蛋白进行逐个检测或采用蛋白芯片技术对这些蛋白进行同时检测，确定检测到的血清差异蛋白的浓度变化。与现有的检测方法相比，本专利技术的检测标志物特异性、灵敏度和准确性高，可作为糖尿病肾病诊断的依据。本专利技术的待检样本可以使用血清和尿液，采集更加方便；检测时用量为200ug-400ug，远小于应用其他方法的采血量。附图说明附图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本专利技术的实施例一起用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的限制。在附图中：图1为健康对照血清的双向电泳结果；图2-5为糖尿病肾病患者血清的双向电泳结果；图6为实验血清和健康对照血清的12种差异蛋白示意图。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市售。本申请人通过对糖尿病肾病患者和健康人群的血清和尿液进行比较分析，发现：与健康人群的血清和尿液相比，在糖尿病肾病患者血清和尿液中存在12个血清差异蛋白：角蛋白19，结合珠蛋白，载脂蛋白E，C反应蛋白，血小板因子4前体，性激素结合球蛋白前体，免疫球蛋白重链Viiiregionhil，补体成分C4，角蛋白6l，C反应蛋白前体剪接异构体1，丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶WNK4和CD5抗原，其中10个表达蛋白上调，2个表达蛋白下调。本申请人将该组差异蛋白用于糖尿病肾病的早期检测中，发现具有良好的特异性、灵敏度和准确性。实施例1本专利技术的糖尿病肾病检测标志物为：角蛋白19，结合珠蛋白，载脂蛋白E，C反应蛋白，血小板因子4前体，性激素结合球蛋白前体，免疫球蛋白重链Viiiregionhil，补体成分C4，角蛋白6l，C反应蛋白前体剪接异构体1，丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶WNK4和CD5抗原。实施例2本申请首先采用蛋白质双向电泳方法分离血清或尿液中的12种蛋白（即角蛋白19，结合珠蛋白，载脂蛋白E，C反应蛋白，血小板因子4前体，性激素结合球蛋白前体，免疫球蛋白重链Viiiregionhil，补体成分C4，角蛋白6l，C反应蛋白前体剪接异构体1，丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶WNK4和CD5抗原），然后对双向电泳凝胶差异点进行扣点，做质谱分析，确定蛋白名称以及其大小，并对健康对照组和糖尿病肾病患者血清或尿液中蛋白质的含量进行比较分析。具体操作如下：一、检测物是血清1、准备健康对照血清：健康对照血清采集自健康人群，血清中的上述12种蛋白的表达量在规范的正常范围内。健康对照血清在采集后分装，并且直接冷冻在-80℃的环境中，在使用的时候取出解冻使用。2、采集糖尿病肾病患者的血清作为实验血清。采血量最低为5ml。使用时，应用Affinity2bluegel和ProteinA分别去除实验血清和健康对照血清中的白蛋白和IgG，将未做处理的血清以及去除白蛋白和IgG的血清各400μg与水化液混合。水化液配方为：尿素8M4.805gCHAPS4%0.4gDTT65mM0.098g（现加）两性电解质0.2%（W/V）50ul（40%）（现加）溴酚蓝0.001%10ul（1%溴酚蓝）MilliQ水定容至10ml。分装为1ml，-20℃保存。3、通过蛋白质双向电泳方法，对实验血清和健康对照血清中的蛋白进行分离。本申请人对蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】
糖尿病肾病检测标志物，其特征在于：所述糖尿病肾病检测标志物由12种蛋白组成：角蛋白19，结合珠蛋白，载脂蛋白E，C反应蛋白，血小板因子4前体，性激素结合球蛋白前体，免疫球蛋白重链Viiiregionhil，补体成分C4，角蛋白6l，C反应蛋白前体剪接异构体1，丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶WNK4和CD 5抗原。

【技术特征摘要】
1.糖尿病肾病检测标志物，其特征在于：所述糖尿病肾病检测标志物由12种蛋白组成：角蛋白19，结合珠蛋白，载脂蛋白E，C反应蛋白，血小板因子4前体，性激素结合球蛋白前体，免疫球蛋白重链Viiiregionhil，补体成分C4，角蛋白6l，C反应蛋白前体剪接异构体1，丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶WNK4和CD5抗原。2.一种分离血清或尿液中糖尿病肾病检测标志物的方法，所述糖尿病肾病检测标志物为权利要求1中所述的12种蛋白，其特征在于：采用蛋白质双向电泳方法分离血清或尿液中的糖尿病肾病检测标志物；双向电泳优化条件为：1）第一向等电聚焦：水化50V12小时（20℃）主动水化S1250V线性0.5小时除盐S21000V线性2小时除盐S310000V线性6小时升压S410000V快速80000VHr聚胶S5500v快速3小时保持；2）第二向垂直电泳采用恒压来跑胶，开始进样时采用低电压60V，待样品分胶液溴酚蓝浓缩成一条线之后，加大电压至200V，直到溴酚蓝指示剂跑到底部位置，停止跑胶。3.一种糖尿病肾病检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒...

【专利技术属性】
技术研发人员：车团结，常运朝，吴玲，李琳，陈小兰，吕海宏，
申请(专利权)人：兰州百源基因技术有限公司，
类型：发明
国别省市：甘肃,62