一种谷胱甘肽还原酶测定试剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及生化检测领域，具体的，涉及一种谷胱甘肽还原酶测定试剂测定试剂及其制备方法和应用。本发明专利技术采用的技术方案是：一种谷胱甘肽还原酶测定试剂，其特征在于：所述试剂包括试剂1和试剂2，试剂1的组成成分包括：缓冲液、氧化型谷胱甘肽、稳定剂A；试剂2的组成成分包括：缓冲液、还原型辅酶Ⅱ、稳定剂B。本发明专利技术的优点是：本发明专利技术所提供的谷胱甘肽还原酶测定试剂在2‑8℃开盖使用状态下的稳定时间可以达到20‑30天，在2‑8℃密闭避光存储过程中的稳定时间可以达到10‑15个月。

【技术实现步骤摘要】
一种谷胱甘肽还原酶测定试剂及其制备方法和应用
本专利技术涉及生化检测领域，具体的，涉及一种谷胱甘肽还原酶测定试剂测定试剂及其制备方法和应用。
技术介绍
谷胱甘肽还原酶(glutathionereductase)是一种利用还原型NAD(P)将氧化型谷胱甘肽(GS－SG)催化反应成还原型(GSH)的酶。在动植物组织、微生物、酵母中均可以见到，其反应是不可逆的。鼠肝脏的酶几乎只能利用NADP作为补酶，但是在人的红血球的酶也利用NAD进行作用。对胱氨酸和高胱氨酸均无作用。可从酵母中制取结晶物。植物组织中似乎可对脱氢酶和氧化酶的连结起作用。将谷胱甘肽还原酶GS－SG、NADP和叶绿体混合一起用光照射，就会放氧，这就是受人重视的希尔(Hill)反应。大肠杆菌这种酶中含有黄素。谷胱甘肽是一种重要的细胞抗氧化剂。缺失谷胱甘肽还原酶会使细胞对氧化剂和抗生素更为敏感。传统的检测方法使用复溶液加干粉，试剂现溶现用，稳定性差，不适于全自动分析的要求，因此有必要开发一种新的具有良好稳定性和检测准确性的谷胱甘肽还原酶测定试剂。
技术实现思路
本专利技术的目的是在于克服传统的谷胱甘肽还原酶测定方法存在的稳定性差的缺陷，提供一种在2-8℃开盖使用状态下和在2-8℃密闭避光存储条件下持续稳定的谷胱甘肽还原酶测定试剂。本专利技术的另一个目的是在于提供上述谷胱甘肽还原酶测定试剂的制备方法和在测定中的应用。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是：一种谷胱甘肽还原酶测定试剂，所述试剂包括试剂1和试剂2，所述试剂1的组成成分包括：缓冲液、氧化型谷胱甘肽、稳定剂A；试剂2的组成成分包括：缓冲液、还原型辅酶Ⅱ、稳定剂B；所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘氨酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、碳酸盐缓冲液中的任一种；所述稳定剂A为乙二胺四乙酸二钠、氯化镁、山梨酸钾中的一种或两种以上的混合物；所述稳定剂B为蔗糖、抗坏血酸、牛血清白蛋白、山梨酸钾中的一种或两种以上的混合物。其中：所述试剂1中，氧化型谷胱甘肽的浓度为0.1-1mmol/L；缓冲液的终浓度为50-100mmol/L；稳定剂A的浓度为1-2g/L。所述试剂2中，还原型辅酶Ⅱ的浓度为0.1-1g/L；缓冲液的终浓度为100-500mmol/L；稳定剂B的浓度为1-10g/L。进一步的技术方案：还包括校准品，所述校准品的组成成分包括基质、纯品及稳定剂C，所述基质为缓冲液、酪蛋白、牛血清白蛋白中的一种或两种以上的混合物，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘氨酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、碳酸盐缓冲液中的任一种；所述纯品为谷胱甘肽还原酶；所述稳定剂C为海藻糖、抗坏血酸、乙二胺四乙酸二钠中的一种两种以上的混合物。其中：在所述校准品中纯品的浓度为30-100U/L；稳定剂C的浓度为1-10g/L；当所述基质中含有缓冲液时，缓冲液的浓度为50-100mmol/L；当所述基质中含有酪蛋白时，酪蛋白的浓度为1-10g/L；当所述基质中含有牛血清白蛋白时，牛血清白蛋白的浓度为1-10g/L。更进一步的：所述试剂1的pH为7.0-8.0，试剂2的pH为9.0-10.0。所述校准品的pH为7.5-8.0。一种谷胱甘肽还原酶测定试剂的制备方法，包括如下步骤：a)试剂1的配制：试剂1的制备过程中各成分的混合顺序没有特别要求，在室温条件下，直接将所述缓冲液、氧化型谷胱甘肽、稳定剂A进行同时、分批或分步混合，只要能得到均匀的稳定相即可，通过搅拌使混合更加均匀；b)试剂2的配制：试剂2的配制是在室温条件下，按照缓冲液、稳定剂B、还原型辅酶Ⅱ的顺序，依次混合，得到均匀的稳定相，通过搅拌使混合更加均匀；c)校准品的配制：校准品的配制是在室温条件下，按照基质、稳定剂C、纯品的顺序，依次混合，得到均匀的稳定相，通过搅拌使混合更加均匀。一种谷胱甘肽还原酶测定试剂在谷胱甘肽还原酶测定中的应用，包括如下步骤：将待测样本、试剂1、试剂2按照6μL：150μL：50μL的体积比(可根据试剂中主要成分的浓度和检测仪器的不同，按比例进行用量的调整)混匀后静置180-300秒，然后置于检测仪器中测量2-3分钟吸光度值(A)，计算每分钟吸光度变化率(△A/min)，其中：测试温度37℃、检测仪器主波长340nm、副波长405nm，光径1cm，使用纯化水和校准品进行线性校准，测量待测样本中谷胱甘肽还原酶的浓度。其中：所述待测样本为血清、血浆、校准品、质控品或其他含有谷胱甘肽还原酶的溶液，所述检测仪器为具有双试剂功能的全自动生化分析仪。由于上述技术方案的应用，本专利技术与现有技术相比具有如下优点：1、通过上述技术方案，本专利技术所提供的谷胱甘肽还原酶测定试剂在2-8℃开盖使用状态下的稳定时间可以达到20-30天，在2-8℃密闭避光存储过程中的稳定时间可以达到10-15个月。2、该专利技术使用方便、消除干扰明显、灵敏度高，对生化仪器管道无污染，使其在谷胱甘肽还原酶的准确、快速测定中有重要的意义。具体实施方式下面结合具体的实施例对本专利技术的技术方案做进一步的描述，但本专利技术并不限于下述实施例。实施例一一种谷胱甘肽还原酶测定试剂，所述试剂包括试剂1和试剂2，所述试剂1的组成成分包括：缓冲液、氧化型谷胱甘肽、稳定剂A，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液，其终浓度为50mmol/L，所述稳定剂A为乙二胺四乙酸二钠、氯化镁、山梨酸钾的混合物，其中乙二胺四乙酸二钠、氯化镁和山梨酸钾的终浓度分别为1.5g/L，氧化型谷胱甘肽终浓度为0.5mmol/L；试剂2的组成成分包括：缓冲液、还原型辅酶Ⅱ、稳定剂B，所述缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液，其终浓度为250mmol/L，稳定剂B为蔗糖、抗坏血酸、牛血清白蛋白、山梨酸钾的混合物，其中蔗糖、抗坏血酸、牛血清白蛋白、山梨酸钾的终浓度分别为5g/L，还原型辅酶Ⅱ终浓度为0.5g/L；该试剂还包括校准品，所述校准品的组成成分包括基质、纯品及稳定剂C，所述基质为缓冲液、酪蛋白和牛血清白蛋白的混合物，其中缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液，其终浓度为50mmol/L，所述酪蛋白、牛血清白蛋的终浓度分别为5g/L；所述纯品为谷胱甘肽还原酶，其终浓度为80U/L；所述稳定剂C为海藻糖、抗坏血酸的混合物，所述海藻糖、抗坏血酸终浓度分别为5g/L。上述谷胱甘肽还原酶测定试剂的制备方法，包括如下步骤：a)试剂1的配制：量取配制体积等体积的纯化水，选用磷酸盐缓冲液，其终浓度为50mmol/L，按配制体积计算并称取适量的磷酸盐加入，调节pH为7.5，按配制体积计算并称取适量的氧化型谷胱甘肽加入，终浓度为0.5mmol/L；按配制体积计算并分别称取适量的乙二胺四乙酸二钠、氯化镁、山梨酸钾加入，终浓度分别为1.5g/L，搅拌均匀，即为试剂1。b)试剂2的配制：量取配制体积等体积的纯化水，选用三羟甲基氨基甲烷缓冲液，终浓度为250mmol/L，按配制体积计算并称取适量的三羟甲基氨基甲烷加入，调节pH为9.5，按配制体积计算并分别称取适量的蔗糖、抗坏血酸、牛血清白蛋白、山梨酸钾加入，终浓度分别为5g/L，按配制体积计算并称取适量的还原型辅酶Ⅱ加入，终浓度为0.5g/L，搅拌均匀，即为试剂2。c)校准品的配制：量取配制体积等体积的纯化水，选用三羟甲基氨基甲烷缓冲液，终浓度为5本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种谷胱甘肽还原酶测定试剂，其特征在于：所述试剂包括试剂1和试剂2，所述试剂1的组成成分包括：缓冲液、氧化型谷胱甘肽、稳定剂A；试剂2的组成成分包括：缓冲液、还原型辅酶Ⅱ、稳定剂B；所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘氨酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、碳酸盐缓冲液中的任一种；所述稳定剂A为乙二胺四乙酸二钠、氯化镁、山梨酸钾中的一种或两种以上的混合物；所述稳定剂B为蔗糖、抗坏血酸、牛血清白蛋白、山梨酸钾中的一种或两种以上的混合物。

【技术特征摘要】
1.一种谷胱甘肽还原酶测定试剂，其特征在于：所述试剂包括试剂1和试剂2，所述试剂1的组成成分包括：缓冲液、氧化型谷胱甘肽、稳定剂A；试剂2的组成成分包括：缓冲液、还原型辅酶Ⅱ、稳定剂B；所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘氨酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、碳酸盐缓冲液中的任一种；所述稳定剂A为乙二胺四乙酸二钠、氯化镁、山梨酸钾中的一种或两种以上的混合物；所述稳定剂B为蔗糖、抗坏血酸、牛血清白蛋白、山梨酸钾中的一种或两种以上的混合物。2.根据权利要求1所述的一种谷胱甘肽还原酶测定试剂，其特征在于：所述试剂1中，氧化型谷胱甘肽的浓度为0.1-1mmol/L；缓冲液的终浓度为50-100mmol/L；稳定剂A的浓度为1-2g/L。3.根据权利要求1所述的一种谷胱甘肽还原酶测定试剂，其特征在于：所述试剂2中，还原型辅酶Ⅱ的浓度为0.1-1g/L；缓冲液的终浓度为100-500mmol/L；稳定剂B的浓度为1-10g/L。4.根据权利要求1或2或3所述的一种谷胱甘肽还原酶测定试剂，其特征在于：还包括校准品，所述校准品的组成成分包括基质、纯品及稳定剂C，所述基质为缓冲液、酪蛋白、牛血清白蛋白中的一种或两种以上的混合物；所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘氨酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、碳酸盐缓冲液中的任一种；所述纯品为谷胱甘肽还原酶；所述稳定剂C为海藻糖、抗坏血酸、乙二胺四乙酸二钠中的一种两种以上的混合物。5.根据权利要求4所述的一种谷胱甘肽还原酶测定试剂，其特征在于：在所述校准品中纯品的浓度为30-100U/L；稳定剂C的浓度为1-10g/L；当所述基质中含有缓冲液时，缓冲液的浓度为50-100mmol/L；当所述基质中含有酪蛋白时，酪蛋白的浓度为1-10g/L；当所述基质中含有牛...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁嘉扬，崔为明，吴朝晖，李晓捷，
申请(专利权)人：苏州普瑞斯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32