重置多能干细胞制造技术

本发明专利技术提供了基于包含抑制剂组合的培养基的使用，重置或维持“幼稚”或“基态”状态的人干细胞的方法和材料。示例性的幼稚培养基包含PKC抑制剂、MEK抑制剂。还提供了获得或增殖此类细胞的方法、使用这些方法获得的细胞、和新型的培养基，其可以在这些方法中使用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】重置多能干细胞
本专利技术涉及幼稚状态的细胞、用于将人多能干细胞重置为更为幼稚的状态的方法、维持幼稚状态的细胞的方法、通过所述方法获得的细胞以及用于所述方法的材料。
技术介绍
基于干细胞的技术已经鉴定为提供治疗和非治疗应用的巨大潜力。人多能干细胞(PSC)，无论从超数胚(Reubinoff等,2000；Thomson等,1998)还是通过分子重程序化(Takahashi等,2007；Yu等,2007)衍生，显示与模范的小鼠胚胎干细胞(ESC)相比的几种区别性特征。最初认为是无关紧要的物种特异性特征(Thomson等,1998)，越来越多的证据提示这些差异反映了离散的发育身份(Rossant,2008；Smith,2001)。值得注意的是，植入后上胚层干细胞(EpiSC)的衍生(Brons等,2007；Tesar等,2007)证明可以从小鼠获得多能干细胞的备选表型。小鼠ESC自我更新受到阻断成纤维细胞生长因子(FGF)受体或下游促细胞分裂剂活化蛋白激酶(Erk)信号传导促进(Burdon等,1999；Ying等,2008)，并且由细胞因子白血病抑制剂量因子(LIF)刺激(Smith等,本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种将人干细胞重置为更为幼稚的状态的方法，所述方法包括：(a)提供要重程序化的人干细胞，(b)通过如下诱导更为幼稚的状态：(i)任选地，对所述细胞表达或导入一种或多种异源重程序化因子，(ii)在重置培养基中培养所述细胞，其中所述重置培养基包含MEK抑制剂，和任选地STAT3活化剂，和任选地一种或多种另外的抑制剂，(c)在幼稚培养基中维持所述细胞，其中所述幼稚培养基包含MEK抑制剂、PKC抑制剂和任选地GSK3抑制剂、和STAT3活化剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.08.22 GB 1414992.6;2014.08.29 GB 1415368.81.一种将人干细胞重置为更为幼稚的状态的方法，所述方法包括：(a)提供要重程序化的人干细胞，(b)通过如下诱导更为幼稚的状态：(i)任选地，对所述细胞表达或导入一种或多种异源重程序化因子，(ii)在重置培养基中培养所述细胞，其中所述重置培养基包含MEK抑制剂，和任选地STAT3活化剂，和任选地一种或多种另外的抑制剂，(c)在幼稚培养基中维持所述细胞，其中所述幼稚培养基包含MEK抑制剂、PKC抑制剂和任选地GSK3抑制剂、和STAT3活化剂。2.根据权利要求1的方法，其中步骤(b)(i)包括在所述细胞中表达重程序化因子，其中所述重程序化因子包含NANOG和KLF2。3.根据权利要求2的方法，其中所述重程序化因子由NANOG和KLF2组成。4.根据权利要求1至3中任一项的方法，其中所述重置培养基还包含GSK3抑制剂的存在。5.根据权利要求1至3中任一项的方法，其中所述重置培养基还包含FGF抑制剂的存在。6.一种将人多能干细胞重程序化为更为幼稚的状态的方法，所述方法包括在所述细胞中表达重程序化因子，其中重程序化因子包含NANOG和KLF2，并且在重置培养基中培养所述细胞，其中所述重置培养基包含MEK抑制剂、GSK3抑制剂和STAT3活化剂。7.一种将人多能干细胞重程序化为更为幼稚的状态的方法，所述方法包括在所述细胞中表达重程序化因子，其中所述重程序化因子包含NANOG和KLF2，并且在重置培养基中培养所述细胞，其中所述重置培养基包含MEK抑制剂、FGF抑制剂和STAT3活化剂。8.根据权利要求1至7中任一项的方法，其中所述重程序化因子的表达是瞬时的。9.根据权利要求8的方法，其包括对所述细胞导入在所述细胞中表达所述重程序化因子的质粒制备物。10.根据权利要求8或权利要求9的方法，其中在诱导型启动子的转录控制下表达所述重程序化因子。11.根据权利要求8至10中任一项的方法，其中在重编程化为幼稚状态后不维持编码所述重程序化因子的异源核酸。12.根据权利要求1的方法，其中所述重置培养基还包含HDAC抑制剂。13.根据权利要求1或权利要求12的方法，其中所述重置培养基还包含端锚聚合酶(Tankyrase)抑制剂和任选地PKC抑制剂。14.一种将人多能干细胞重程序化为更为幼稚的状态的方法，其在重置培养基中培养所述细胞，其中所述重置培养基包含MEK抑制剂、端锚聚合酶抑制剂、HDAC抑制剂和STAT3活化剂。15.根据权利要求12至14中任一项的方法，其中所述方法不涉及对所述细胞表达或导入一种或多种异源重程序化因子。16.权利要求6、7或14、或作为权利要求6、7或14的从属权利要求的权利要求8至13或权利要求15中任一项的方法，其还包括增殖幼稚状态的重程序化的人多能干细胞。17.根据权利要求16的方法，其中在幼稚培养基中以幼稚状态增殖所述重程序化的人多能干细胞，其中所述幼稚培养基包含GSK3抑制剂、MEK抑制剂和STAT3活化剂和PKC抑制剂。18.一种维持/保持幼稚状态的人细胞的方法，所述方法包括在幼稚培养基中培养所述细胞，其中所述幼稚培养基包含PKC抑制剂、MEK抑制剂。19.根据权利要求18的方法，其中所述幼稚培养基还包含STAT3活化剂。20.一种获得或增殖幼稚状态的重程序化人多能干细胞的扩增群体的方法，所述方法包括：a)提供已经重程序化为幼稚状态的人多能干细胞，b)在幼稚培养基中培养所述细胞，其中所述幼稚培养基包含PKC抑制剂、MEK抑制剂和任选地GSK3抑制剂和STAT3活化剂。21.根据权利要求20的方法，其中已经根据权利要求16的方法将所述人多能干细胞重程序化为幼稚状态。22.根据权利要求1至5、12至13或17至21中任一项的方法，其中所述幼稚培养基还包含ROCK抑制剂。23.根据权利要求1至22中任一项的方法，其中若存在的话，所述GSK3抑制剂是CHIR99021。24.根据权利要求1至23中任一项的方法，其中若存在的话，所述GSK3抑制剂的浓度足够低以允许维持基态形态，同时足够高以恢复生长速率。25.根据权利要求1至24中任一项的方法，其中若存在的话，所述MEK抑制剂是PD0325901。26.根据权利要求1至25中任一项的方法，其中若存在的话，所述PKC抑制剂是或Ro-31-8425。27.根据权利要求1至26中任一项的方法，其中若存在的话，所述PKC抑制剂的浓度允许在缺乏饲养细胞的情况下的培养物生长。28.根据权利要求1至27中任一项的方法，其中若存在的话，所述STAT3活化剂是LIF。29...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·史密斯，郭歌，高岛康弘，
申请(专利权)人：剑桥企业有限公司，
类型：发明
国别省市：英国,GB