十面体纳米银探针在利用表面等离子共振成像技术筛选核酸适配体中的应用制造技术
【技术实现步骤摘要】
十面体纳米银探针在利用表面等离子共振成像技术筛选核酸适配体中的应用
本专利技术属于生物监测
，具体涉及一种适配体修饰的纳米银对SPRI信号放大技术及其在乳铁蛋白实时筛选中的应用。
技术介绍
相比纳米金，纳米银具有优良的光化学性质，它能够产生更强和更窄的等离子共振峰。因此，纳米银表面的局域等离子体能够更好的与表面等离子共振(SPR)芯片表面的等离子波进行耦合，产生更强的信号输出。表面等离子共振成像(surfaceplasmonresnonace-imaging)是一种具有对样品无需标记、实时、高通量的光学检测仪器。能够对芯片表面多个靶标样品进行实时定量测定。因此可以通过将筛选靶标负载到芯片表面，通入核酸文库，能够对正筛/负筛靶标进行实时采集，观察适配体筛选过程中正筛/负筛通道文库的结合情况，从而筛选出高亲和、高特异性的核酸适配体。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种十面体纳米银探针用于对SPRI进行信号放大，有利于观察适配体筛选过程中正筛/负筛通道文库的结合情况，从而筛选出高亲和、高特异性的核酸适配体。本专利技术还要解决的技术问题是，提供上述十面体...
【技术保护点】
十面体纳米银探针在利用表面等离子共振成像技术筛选核酸适配体中的应用。
【技术特征摘要】
1.十面体纳米银探针在利用表面等离子共振成像技术筛选核酸适配体中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的十面体纳米银探针为：以50～60nm的十面体纳米银为内核，纳米银的外表面有两条核苷酸链，A链为文库反向引物互补链，所述文库反向引物互补链键合在纳米银的外表面；B链为核酸文库序列，所述核酸文库序列与文库反向引物互补链互补配对结合；其中，所述文库反向引物互补链为的结构如下：3’端为文库反向引物互补序列，中间为10～18个A碱基作为间隔臂，5’端为巯基修饰。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的十面体纳米银探针的制备方法如下：(1)十面体纳米银的合成：将柠檬酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、L-精氨酸、硝酸银按照摩尔比为(0.1～70):(0.1～10):(0.2～30):(0.2～30)加入到100～300mL去离子水中，然后加入0.1～1M的硼氢化钠水溶液，使硼氢化钠与硝酸银的摩尔比为(1～100)：1，在蓝光灯照射下反应16～72h，得到十面体纳米银溶液；(2)十面体纳米银的修饰：取步骤(1)得到的十面体纳米银溶液，加入文库反向引物互补链、氯化钠，其中，纳米银、文库反向引物互补链、氯化钠的摩尔比为(0.1～10pmol):(0.1～10nmol):(10～200μmol)，滴加吐温-20，吐温-20与纳米银溶液的体积比为(0.001～0.01):1，混匀，37℃震荡1～5h；(3)将步骤(2)得到的混合体系静置10～24小时；(4)离心步骤(3)得到的溶液，取沉淀加入1×PBS缓冲液重悬，重复离心与重悬的步骤2～4次，1×PBS缓冲溶液每次加入体积为沉淀体积0.1～5倍；最后离心得到的沉淀使用1×PBSM缓冲溶液重悬；(5)向步骤(4)得到的混合体系中加入核酸文库溶液，使核酸文库与修饰有反向引物互补链的十面体纳米银的摩尔比(100～2000):1，震荡反应10～60min，得到十面体纳米银探针。4.用于筛选乳铁蛋白核酸适配体的十面体纳米银探针，其特征在于，它是以50～60nm的十面体纳米银为内核，纳米银的外表面有两条核苷酸链，A链为文库反向引物互补链，所述文库反向引物互补链键合在纳米银的外表面；B链为核酸文库序列，所述核酸文库序列与文库反向引物互补链互补配对结合；其中，所述文库反向引物互补链为：5’-SH-(CH2)6-AAAAAAAAAAGAAGAGGAGGGAGGT-3’所述核酸文库序列为：5’-GACAGGCAGGACACCGTAAC-N40-CTGCTACCTCCCTCCTCTTC-3’，其中N40表示40个随机碱基。5.权利要求4所述的十面体纳米银探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1a)十面体纳米银的合成：将柠檬酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、L-精氨酸、硝酸银按照摩尔比为(0.1～70):(0.1～10):(0.2～30):(0.2～30)加入到100～300mL去离子水中，然后加入0.1～1M的硼氢化钠水溶液，使硼氢化钠与硝酸银的摩尔比为(1～100):1，在蓝光灯照射下反应16～72h，得到十面体纳米银溶液；(2a)十面体纳米银的修饰：取步骤(1)得到的十面体纳米银溶液，加入文库反向引物互补链、氯化钠，其中，纳米银、文库反向引物互补链、氯化钠的摩尔比为(0.1～10pmol):(0.1～10nmol):(10～200...
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