用于鲑鳟鱼苗种鉴定的生物传感检测方法技术

本发明专利技术公开了一种鲑鳟鱼苗种鉴定的生物传感检测方法，该方法基于公共数据库中不同株系来源的IHNV基因序列保守性分析结果，设计了以IHNV病毒基质蛋白(M)编码基因为扩增靶点的6条特异性引物，对待测鱼卵或鱼苗样品总RNA模板进行恒温逆转录扩增，扩增时间仅需15‑30min。扩增反应中全部或部分引物带有电化学活性标记，dNTP中部分带有锚定标记，因此成功扩增的病毒M基因序列同时带有电化学活性标记和锚定标记，能够利用锚定标记将扩增产物捕获在电极表面，通过检测电极表面的电化学信号，准确判定样品是否携带IHNV。本发明专利技术操作简单，反应迅速，对设备精密度要求低，适用于苗种场、养殖场等生产经营性场所的现场快速检测。

【技术实现步骤摘要】
用于鲑鳟鱼苗种鉴定的生物传感检测方法
本专利技术属于水产生物
，涉及一种用于鲑鳟鱼苗种鉴定的生物传感检测方法，涉及用于鉴定鲑鳟鱼卵和鱼苗是否携带传染性造血器官坏死病毒(infectioushematopoieticnecrosisvirus，IHNV)的检测技术。
技术介绍
鲑鳟鱼是鲑科(Salmonidae)鱼类的统称，作为重要的冷水性名优水产物种，在我国26个省市区都有人工养殖，养殖规模逐年稳步扩大，2015年总产量已达到41，607万吨。传染性造血器官坏死病(infectioushematopoieticnecrosis，IHN)是一种严重威胁鲑鳟鱼养殖业发展的暴发性疾病，能够感染大多数鲑鳟鱼养殖种，其中虹鳟(Oncorhynchusmykiss)、大西洋鲑(Salmosalar)等感染后死亡率高达90％以上，且缺乏有效的治疗药物。目前在鲑鳟鱼养殖业中，防控病害较为有效的方式是倡导“生物安保(Biosecurity)”风险管理理念，从切断病原传播途径入手，通过对特定病原的监测，防范疫病传入，实现水产健康养殖管理。IHNV属于弹状病毒科(Rhabdoviridae)，诺拉弹本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于鲑鳟鱼苗种鉴定的生物传感检测方法，其特征在于，包括：步骤一、提取到待测鲑鳟鱼样品的RNA；步骤二、以所述RNA为模板，以如SEQ ID NO：1、2、3和4所示的核苷酸序列作为引物，且该引物中的至少一种引物上携带有电化学活性标记分子，构建逆转录环介导等温扩增体系，向该体系中添加部分带有锚定标记分子的dNTP，对待测鲑鳟鱼样品的RNA进行扩增，得到扩增反应液；步骤三、首先将所述扩增反应液加于修饰有锚定受体的电极表面进行锚定反应，之后检测所述电极表面是否存在所述电化学活性标记分子的电化学信号，若能够检测到所述电化学标记分子的电化学信号，表明所述待测鲑鳟鱼样品携带有IHNV。

【技术特征摘要】
1.一种用于鲑鳟鱼苗种鉴定的生物传感检测方法，其特征在于，包括：步骤一、提取到待测鲑鳟鱼样品的RNA；步骤二、以所述RNA为模板，以如SEQIDNO：1、2、3和4所示的核苷酸序列作为引物，且该引物中的至少一种引物上携带有电化学活性标记分子，构建逆转录环介导等温扩增体系，向该体系中添加部分带有锚定标记分子的dNTP，对待测鲑鳟鱼样品的RNA进行扩增，得到扩增反应液；步骤三、首先将所述扩增反应液加于修饰有锚定受体的电极表面进行锚定反应，之后检测所述电极表面是否存在所述电化学活性标记分子的电化学信号，若能够检测到所述电化学标记分子的电化学信号，表明所述待测鲑鳟鱼样品携带有IHNV。2.如权利要求1所述的用于鲑鳟鱼苗种鉴定的生物传感检测方法，其特征在于，所述步骤二中，还以如SEQIDNO5和6所示的核苷酸序列作为引物。3.如权利要求1所述的用于鲑鳟鱼苗种鉴定的生物传感检测方法，其特征在于，所述步骤二中，SEQIDNO：3所示的核苷酸序列带有所述电化学活性标记分子。4.如权利要求3所述的用于鲑鳟鱼苗种鉴定的生物传感检测方法，其特征在于，所述步骤二中，SEQIDNO：4所示的核苷酸序列带有所述电化学活性标记分子。5.如权利要求1所述的用于鲑鳟鱼苗种鉴定的生物传感检测方法，其特征在于，所述步骤二中，所述部分带有锚定标记分子的d...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵紫霞，许建，江炎亮，张瀚元，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院，
类型：发明
国别省市：北京,11