一种沙棘叶片组织培养方法技术

本发明专利技术公开了一种沙棘叶片组织培养方法，包括以下步骤：步骤一、初代培养：取40日龄的试管苗叶片，剪成2.5‑3.0cm2的小块，接种到愈伤组织诱导培养基上；步骤二、继代增殖：取初代培养的无根苗剪切成茎尖、带腋芽的茎段分别接种到增殖培养基上；步骤三、生根培养：取继代增殖的无根苗，接种到生根培养基上；步骤四、移栽：当长根的试管苗高度约5.0cm时，整瓶移出培养室，置于室温阴凉处4‑5天，揭开瓶盖，在放置4‑5d，将试管苗取出，用自来水轻轻洗去根部的琼脂，移栽到事先经高温灭过菌的基质中；本发明专利技术以沙棘无菌苗叶片为材料，选择各个培养阶段的适宜的培养基配方和适宜的移栽基质，实现较高的幼苗成活率，为其工厂化生产提供依据。

Tissue culture method of sea buckthorn leaf

The invention discloses a method for culturing seabuckthorn leaf tissue, which comprises the following steps: step one: take the first culture, 40 day old seedlings leaves, cut into 2.5 small pieces of 3.0cm2, inoculated into callus induction medium, subculture; step two: no root cut stem apex, with axillary buds the stem segments were inoculated into the culture medium of proliferation from primary culture and rooting culture; step three: following the generation of no root proliferation, inoculated into the rooting medium; step four, the rooting plantlets transplanting: when the height is about 5.0cm, the whole bottle from the culture chamber at room temperature, shade 4 5 day, opened a bottle, placed in 4 5D, the plantlets were removed with tap water, gently wash the root of agar, prior to transplanting by high temperature sterilized substrate; the invention in sea buckthorn leaves of the sterile seedling as materials, selection of various culture The suitable medium formula and suitable transplanting medium can achieve higher seedling survival rate and provide basis for industrial production.

【技术实现步骤摘要】
一种沙棘叶片组织培养方法
本专利技术涉及果类作物组织培养
，具体是一种沙棘叶片组织培养方法。
技术介绍
沙棘(HippophaerhamnoidesL.)为胡颓子科(Elaeagnaceae)沙棘属(HippophaeL.)植物，是一种适应性很强的树种，具有广泛的生态效益和社会效益。其繁殖方式很多，常规林木繁育方法都能采用，但在规模化生产且要保证品质的前提下只能选择特定的繁育方法。前人以带腋芽的茎段、节间、茎尖等对沙棘快速繁殖进行初步研究，已有很多成功的报到。但是尚未出现以沙棘叶片作为材料进行快速繁殖的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种以沙棘叶片作为材料的沙棘叶片组织培养方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种沙棘叶片组织培养方法，包括以下步骤：步骤一、初代培养：取40日龄的试管苗叶片，剪成2.5-3.0cm2的小块，接种到愈伤组织诱导培养基上，每瓶10-15片叶；培养温度25℃左右，湿度50%-70%，光照强度2000-3000Lx，光照时间13-16h/d；所述愈伤组织诱导培养基的配方为1/2B5+6-BA0.5mg/L+IAA0.3mg/L+琼脂0.6%+蔗糖3%；步骤二、继代增殖：取初代培养的无根苗剪切成茎尖、带腋芽的茎段分别接种到增殖培养基上；所述增殖培养基的配方为1/2B5+6-BA0.3琼脂0.6%+蔗糖3%；步骤三、生根培养：取继代增殖的无根苗，接种到生根培养基上；所述生根培养基的配方为1/2B5+IBA0.3+琼脂0.6%+蔗糖3%；步骤四、移栽：当长根的试管苗高度约5.0cm时，整瓶移出培养室，置于室温阴凉处4-5天，揭开瓶盖，在放置4-5d，将试管苗取出，用自来水轻轻洗去根部的琼脂，移栽到事先经高温灭过菌的基质中，将移栽后的试管苗浇透，用透明的膜盖在上方，保持湿度，逐渐通风透光；成活的幼苗用1/2B5大量元素母液浇透；所述基质由草炭土和珍珠岩1:1混合而成。作为本专利技术进一步的方案：步骤四中移栽后的最初的一周内湿度基本控制在95%以上，逐渐延长通风和光照时间，15d左右完全揭开帘子；白天温度应控制在25℃，夜间15-18℃。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术以沙棘无菌苗叶片为材料，选择各个培养阶段的适宜的培养基配方和适宜的移栽基质，实现较高的幼苗成活率，为其工厂化生产提供依据。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。一种沙棘叶片组织培养方法，包括以下步骤：步骤一、初代培养：取40日龄的试管苗叶片，剪成2.5-3.0cm2的小块，接种到愈伤组织诱导培养基上，每瓶10-15片叶；培养温度25℃左右，湿度50%-70%，光照强度2000-3000Lx，光照时间13-16h/d；每隔3-5d观察记录一次；所述愈伤组织诱导培养基的配方为1/2B5+6-BA0.5mg/L+IAA0.3mg/L+琼脂0.6%+蔗糖3%；步骤二、继代增殖：取初代培养的无根苗剪切成茎尖、带腋芽的茎段分别接种到增殖培养基上；所述增殖培养基的配方为1/2B5+6-BA0.3琼脂0.6%+蔗糖3%；步骤三、生根培养：取继代增殖的无根苗，接种到生根培养基上，每隔3-5d观察根的诱导和生长情况；所述生根培养基的配方为1/2B5+IBA0.3+琼脂0.6%+蔗糖3%；步骤四、移栽：当长根的试管苗高度约5.0cm时，整瓶移出培养室，置于室温阴凉处4-5天，揭开瓶盖，在放置4-5d，将试管苗取出，用自来水轻轻洗去根部的琼脂，移栽到事先经高温灭过菌的基质中，将移栽后的试管苗浇透，用透明的膜盖在上方，保持湿度，逐渐通风透光；成活的幼苗用1/2B5大量元素母液浇透；所述基质由草炭土和珍珠岩1:1混合而成。上述，步骤四中移栽后的最初的一周内湿度基本控制在95%以上，逐渐延长通风和光照时间，15d左右完全揭开帘子；白天温度应控制在25℃，夜间15-18℃。本专利技术的实验过程：1材料与方法1.1供试材料沙棘的试管苗由阿勒泰地区小浆果研究中心实验室提供。品种为2016年选育出的大果沙棘新品种“QX-01-04”，红果、软刺，2017拟大力推广的品种。1.2方法1.2.1培养基设计初代培养以1/2B5为基本培养基，添加不同浓度的细胞分裂素6-BA和生长素IAA、NAA。将初代分化出的芽接种到继代培养基中，继代增殖培养基以1/2B5为基本培养基，添加不同浓度的细胞分裂素6-BA和生长素IAA。以上培养基PH值均为5.8，琼脂0.6%，蔗糖3%。1.2.2初代培养取40日龄的试管苗叶片，剪成2.5-3.0cm2的小块，接种到初代不同组合的培养基上，每瓶10-15片叶。培养温度25℃左右，湿度50%-70%，光照强度2000-3000Lx，光照时间13-16h/d。每隔3-5d观察记录一次。1.2.3继代增殖与生根培养取初代培养的无根苗剪切成茎尖、带腋芽的茎段分别接种到不同植物生长调节剂组合的增殖培养基上，每隔7d观察1次，记载芽苗的生长和增殖情况。无菌苗切下的叶片原接种到初代筛选出的适宜培养基中。取继代增殖的无根苗，接种到生根培养基上，每隔3-5d观察根的诱导和生长情况。1.2.4试管苗移栽当长根的试管苗高度约5.0cm时，整瓶移出培养室，置于室温阴凉处4-5天，揭开瓶盖，在放置4-5d，将试管苗取出，用自来水轻轻洗去根部的琼脂，移栽到事先经高温灭过菌的基质中，基质为草炭土：珍珠岩=1:1。将移栽后的苗浇透，用透明的膜盖在移栽苗上方，保持湿度，逐渐通风透光；15d后统计苗成活率。成活的幼苗用1/2B5大量元素母液浇透，以保证芽苗的健壮生长。2结果与分析2.1不同生长调节剂配比对沙棘叶片初代培养影响将初代无菌苗剪切下的叶片插入愈伤组织诱导培养基，7d左右，可见叶片基部膨大，有淡绿色愈伤组织生成，继续培养20d，该愈伤组织出现绿色芽点，继续培养，40d后大部分的愈伤组织开始分化出0.2-0.5cm的不定芽。不同浓度的激素配比，叶片愈伤组织芽的增值效果及生长情况也不同，筛选出适宜沙棘叶片愈伤组织诱导培养基为1/2B5+6-BA0.5+IAA0.3（表1）；表1不同植物生长调节剂配比对沙棘不定芽诱导的影响表1为接种50d后的统计结果。由表1可以得知，6-BA与IAA配合使用叶片诱导产生不定芽效果优于6-BA与NAA组合。当6-BA浓度在1.0mg/L时，分化出的不定芽形态明显异常，芽弱小，不饱满，叶片扭曲畸形。当6-BA浓度在0.5mg/L时诱导的芽效果较好，IAA在0.5mg/L时诱导芽玻璃化明显增多。综合分析认为沙棘叶片诱导最佳初代培养基为1/2B5+6-BA0.5+IAA0.3。2.2不同生长调节剂配比对沙棘叶片继代培养影响将初代培养分化出的芽切下转接入继代增殖培养基中，沙棘叶片诱导最佳初代培养基为1/2B5+6-BA0.5+IAA0.3基础上，添加不同含量的IAA，研究其对芽苗继代增殖的影响（表2）。表2不同生长调节剂对沙棘不定芽诱导的影响由表2可以看出仅添加6-BA的情况下不定芽增殖效果较好，当6-BA浓度超过1.0mg/L时，增值苗基本为玻璃化苗，低于0.2mg/L时，苗生长缓慢，瘦弱。当添加一定浓度的IAA后，苗前期生长较快，15d后茎尖停止生本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种沙棘叶片组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、初代培养：取40日龄的试管苗叶片，剪成2.5‑3.0cm2的小块，接种到愈伤组织诱导培养基上，每瓶10‑15片叶；培养温度25℃左右，湿度50%‑70%，光照强度2000‑3000Lx，光照时间13‑16h/d；所述愈伤组织诱导培养基的配方为1/2B5+6‑BA0.5mg/L+IAA0.3mg/L+琼脂0.6%+蔗糖3%；步骤二、继代增殖：取初代培养的无根苗剪切成茎尖、带腋芽的茎段分别接种到增殖培养基上；所述增殖培养基的配方为1/2B5+6‑BA0.3琼脂0.6%+蔗糖3%；步骤三、生根培养：取继代增殖的无根苗，接种到生根培养基上；所述生根培养基的配方为1/2B5+IBA0.3+琼脂0.6%+蔗糖3%；步骤四、移栽：当长根的试管苗高度约5.0cm时，整瓶移出培养室，置于室温阴凉处4‑5天，揭开瓶盖，在放置4‑5d，将试管苗取出，用自来水轻轻洗去根部的琼脂，移栽到事先经高温灭过菌的基质中，将移栽后的试管苗浇透，用透明的膜盖在上方，保持湿度，逐渐通风透光；成活的幼苗用1/2B5大量元素母液浇透；所述基质由草炭土和珍珠岩1:1混合而成。...

【技术特征摘要】
1.一种沙棘叶片组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、初代培养：取40日龄的试管苗叶片，剪成2.5-3.0cm2的小块，接种到愈伤组织诱导培养基上，每瓶10-15片叶；培养温度25℃左右，湿度50%-70%，光照强度2000-3000Lx，光照时间13-16h/d；所述愈伤组织诱导培养基的配方为1/2B5+6-BA0.5mg/L+IAA0.3mg/L+琼脂0.6%+蔗糖3%；步骤二、继代增殖：取初代培养的无根苗剪切成茎尖、带腋芽的茎段分别接种到增殖培养基上；所述增殖培养基的配方为1/2B5+6-BA0.3琼脂0.6%+蔗糖3%；步骤三、生根培养：取继代增殖的无根苗，接种到生根培养基上；所...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵英，徐航，郑兴国，韩晓燕，刘伟，张志刚，
申请(专利权)人：新疆阿勒泰地区园林场，
类型：发明
国别省市：新疆,65