本发明专利技术公开了一组乙型肝炎病毒抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽序列，分别是由HLA‑A*0101、A*0301、A*3001、A*3101、A*3201、A*3303、A*6801等分子限制性的抗原肽，可以特异性地与细胞毒性胸腺依赖性淋巴细胞结合，刺激后者活化、增殖和分化，从而发挥抗乙型肝炎病毒的免疫效应作用。这些抗原肽可以用来制备乙型肝炎病毒感染的治疗性和预防性疫苗，也可以用来制备检测乙型肝炎病毒特异性细胞毒型胸腺依赖性淋巴细胞的检测试剂等，在乙型肝炎的预防、治疗和诊断中有着潜在的应用价值。
Sequence of thymus dependent lymphocyte antigen epitope peptide of hepatitis B virus antigen
The invention discloses a group of hepatitis B virus antigen thymus dependent lymphocyte epitope peptide, respectively, by HLA A*0101, antigen peptide A*0301, A*3001, A*3101, A*3201, A*3303, A*6801 and other molecular restriction, can specificity and cytotoxicity of thymus dependent lymphocyte stimulation with the latter activation proliferation and differentiation, which play a role in immunity against hepatitis B virus. These peptides can be used to preventive and therapeutic vaccines for preparation of hepatitis B virus infection, can also be used for the preparation of the detection of hepatitis B virus specific cytotoxic T lymphocyte type detection reagent, have a potential application in the prevention, diagnosis and treatment of hepatitis B.
【技术实现步骤摘要】
乙型肝炎病毒抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽序列
本专利技术属于医学免疫学和感染病学领域，涉及多种乙型肝炎病毒的抗原表位肽序列。
技术介绍
乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus,HBV)感染是最常见感染性疾病之一，严重危及人类的健康。世界卫生组织2015年7月统计数据显示，预计全球1/3的人口感染过HBV，约2.48亿HBV携带者，后期可发展为肝硬化和原发性肝细胞癌。每年约78万HBV感染的患者因疾病进展为肝硬化、肝衰竭或是肝癌而导致死亡。流行病学调查显示在中国大陆地区约8亿人感染过HBV，乙肝表面抗原(hepatitisBsurfaceantigen,HBsAg)携带率高达10.34％，即我国目前约有1.2亿人为HBV携带者，占全球慢性感染人数的一半。另外，我国也是一个肝癌大国，约占全球肝癌人数的55％以上。HBV基因组由不完全双链环状DNA组成，长的为负链，含3020-3320个碱基，短的为正链，含1700-2800个碱基。包括四个开放阅读框(ORF)，分别称为C、X、P和S编码区。C区由pre-C和C基因组成，分别由不同的起始密码子调控，在相同的终止密码子处结束，pre-C和C基因共同编码pre-C蛋白，Pre-C蛋白再经过切割加工后形成核心抗原(HBeAg)。S区由S基因、PreS1和PreS2基因组成，由3个不同的起始密码子启动翻译，在同一个终止密码子处终止翻译，分别编码表面抗原(HBsAg)蛋白、PreS1蛋白和PreS2蛋白。P区基因编码的HBV的聚合酶蛋白(HBpol)。X区的基因编码X蛋白(HBx)，包含154个氨基酸，是最小的一个开放阅读框。细胞毒性T细胞(CytotoxicTlymphocyte,CTL)是介导适应性免疫应答的核心细胞，在抗感染、抗肿瘤以及超敏反应和自身免疫病的发生中起着至关重要的作用，其细胞膜上的T细胞受体(Tcellreceptor,TCR)能够特异性识别并结合抗原递呈细胞表面MHCI类分子与抗原肽的复合物，即MHC/抗原肽复合体分子。CTL表位是指与MHCI类分子结合的抗原肽，是抗原分子中能被TCR特异性识别的线性片段或空间构象性结构，是引起免疫应答反应的基本抗原单位，在CTL活化过程中扮演着关键角色。MHC系统指主要组织相容性复合体(majorhistocompatibilitycomplex,MHC)，是脊椎动物基因组中一组紧密连锁的基因群，编码表达MHCI类和II类蛋白分子。HLA(humanleukocyteantigen)是人类的MHC系统，是人体最复杂的基因群，在人群中具有高度多态性。HLA在抗原识别、抗原呈递等机体免疫过程中发挥重要作用，是影响人体免疫反应的主要因素。HLAI类分子主要负责将内源性HBV抗原呈递给CD8+CTL，活化的CTLs通过分泌穿孔素和颗粒酶等使病毒感染的肝细胞凋亡，同时分泌特定的细胞因子抑制HBV的复制。因此，动态监测HBV抗原特异性CD8+T细胞的数量和功能可以准确反映乙肝感染者针对HBV的特异性免疫功能状态。由于不同人的HLA分子型别不同，其对HBV不同抗原的加工、处理和提呈能力也不相同，从而引起不同程度的HBV抗原特异性免疫应答反应。根据乙肝患者不同的HLA分子型别，选择其所提呈的HBV特异性抗原肽，动态监测该HBV抗原肽特异性的CD8+T细胞的数量和功能，对HBV感染者的疾病进程监测、诊断与治疗方案的制定、疗效观察和预后转归的判断等都有重要意义，是实现乙肝精准医学治疗的重要技术手段。同时，利用这些HLA-A分子高亲和力结合的HBV特异性抗原肽，还可以制备多肽疫苗或基因疫苗，预防和治疗HBV感染。目前，国内外报道的与HLA-A分子呈高亲和力结合的HBV特异性抗原肽中，HLA-A*0201、A*0203、A*0206、A*1101和A*2402等分子限制性的抗原肽序列被报道和鉴定的较多。而中国人群中频率相对较高的HLA-A*0101、A*0301、A*3001、A*3101、A*3201、A*3303和A*6801等分子的限制性HBV抗原肽则较少报道。本专利通过生物信息学方法，利用六种在线表位预测数据库对HLA-A等位基因型限制的HBV特异性抗原表位肽进行预测，获得一组分别与HLA-A*0101、A*0301、A*3001、A*3101、A*3201、A*3303和A*6801等HLA-A分子呈高亲和力结合的HBV特异性抗原肽序列，为制备HBV感染的治疗和预防性疫苗以及检测HBV抗原特异性T细胞的试剂等提供候选抗原表位肽。
技术实现思路
技术问题：本专利技术提供一种能制备HBV感染的治疗和预防性疫苗以及研制HBV抗原特异性T细胞检测试剂的乙型肝炎病毒抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽序列。技术方案：本专利技术的乙型肝炎病毒抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽序列，为如下所示序列中的任一种：进一步的，本专利技术中，该序列为乙肝病毒核心抗原HBcAg、表面抗原HBsAg、聚合酶蛋白HBpol或X蛋白HBx的抗原肽序列。进一步的，本专利技术中，该序列能分别HLA-A*0101、A*0301、A*3001、A*3101、A*3201、A*3303、A*6801分子呈高亲和力结合。进一步的，本专利技术中，序列通过以下步骤制备：1.1通过GeneBank数据库或UniProt全球蛋白资源数据库检索获得乙肝病毒蛋白氨基酸序列；1.2利用六种表位预测数据库SYFPEITHI、BIMAS、SVMHC、IEDB、NETMHC和EPIJEN分别预测步骤1.1所得乙型肝炎病毒抗原中能分别与HLA-A*0101、A*0301、A*3001、A*3101、A*3201、A*3303、A*6801分子呈高亲和力结合的多肽序列；1.3对步骤1.2所得六种在线表位预测网站的预测结果，选择同一HLA-A分子至少有两种及以上方法都预测获得高亲和力结果的某一多肽序列作为乙型肝炎病毒抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽序列。本专利技术的一种将上述的乙型肝炎病毒抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽序列在制备多肽疫苗或基因疫苗中的应用，是将与HLA-A分子呈高亲和力结合的乙型肝炎病毒抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽制备成多肽疫苗或基因疫苗。本专利技术的一种将上述乙型肝炎病毒抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽序列在检测乙型肝炎病毒抗原特异性T细胞中的应用，是以与HLA-A分子呈高亲和力结合的乙型肝炎病毒抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽作为试剂，检测乙型肝炎病毒抗原表位肽特异性胸腺依赖性淋巴细胞。本专利技术的上述乙型肝炎病毒抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽序列在检测乙型肝炎病毒抗原特异性T细胞中的应用，所述试剂为酶联免疫斑点法试剂、酶联免疫吸附试验试剂、人类白细胞抗原多聚体荧光染色或流式细胞分析法试剂。本专利技术利用六种在线表位预测数据库预测6种HLA-A等位基因型限制性的HBV特异性抗原表位肽序列，获得一组能分别与HLA-A*0101、A*0301、A*3001、A*3101、A*3201、A*3303和A*6801等HLA-A分子呈高亲和力结合的HBV特异性抗原表位肽序列，为制备HBV感染的治疗和预防性疫苗以及研制HBV抗原特异性T细胞的检测试剂等提供了候选抗原表位肽。1.选择乙肝本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种乙型肝炎病毒抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽序列，其特征在于，该序列为如下所示序列中的任一种：
【技术特征摘要】
1.一种乙型肝炎病毒抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽序列，其特征在于，该序列为如下所示序列中的任一种：2.根据权利要求1所述的乙型肝炎病毒抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽序列，其特征在于，该序列为乙肝病毒核心抗原HBcAg、表面抗原HBsAg、聚合酶蛋白HBpol或X蛋白HBx的抗原肽序列。3.根据权利要求1所述的乙型肝炎病毒抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽序列，其特征在于，该序列能分别与HLA-A*0101、A*0301、A*3001、A*3101、A*3201、A*3303、A*6801分子呈高亲和力结合。4.根据权利要求1、2或3所述的乙型肝炎病毒抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽序列，其特征在于，所述序列通过以下步骤制备：1.1通过GeneBank数据库或UniProt全球蛋白资源数据库检索获得乙肝病毒蛋白氨基酸序列；1.2利用六种表位预测数据库SYFPEITHI、BIMAS、SVMHC、IEDB、NETMHC和EPIJEN分别预测步骤1.1所得乙型肝炎病毒抗原中能分别与HLA-A*0101、A*0301、A*3001、A*3101、A*3201、A*3303、A*6...
【专利技术属性】
技术研发人员：沈传来，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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