一种富含羟基酪醇和毛蕊花苷油橄榄多酚提取物长循环脂质体的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种富含羟基酪醇和毛蕊花苷油橄榄多酚提取物长循环脂质体的制备方法，本发明专利技术是以油橄榄叶为原料，经30～50％乙醇提取、陶瓷膜和超滤膜分离，纳滤膜浓缩，制备油橄榄多酚提取物。将90％羟基酪醇与10～40％橄榄苦苷提取物及90％毛蕊花苷复配，制备富含羟基酪醇和毛蕊花苷油橄榄多酚提取物，以羟基酪醇和毛蕊花苷多酚为模型材料，由卵磷脂、胆固醇、吐温‑80表面活性剂等组成制成相应的脂质体。此脂质体显著增强油橄榄多酚提取物的生物利用度，包封率高，粒径分布均匀，稳定性好，有缓释性、抗氧化性和抑菌性作用。本发明专利技术的制备方法简单可行，设备简单，可扩大其医药领域的应用。

A preparation method of hydroxytyrosol rich and verbascoside olive polyphenol extracts of long circulating liposome

The invention discloses a method for preparing a hydroxytyrosol rich and verbascoside olive polyphenol extracts of long circulating liposome, the invention is based on olive leaves as raw material, after 30 to 50% ethanol extraction, ceramic membrane and ultrafiltration membrane, nanofiltration membrane concentration, preparation of olive polyphenol extract. 90% hydroxytyrosol and 10 ~ 40% oleuropein extract and 90% verbascoside compound, preparation of hydroxytyrosol rich and verbascoside olive polyphenol extracts to hydroxytyrosol and verbascoside polyphenols as model material, made of liposomes from the corresponding lecithin, cholesterol, Twain 80 surfactant etc.. The liposome significantly enhanced the bioavailability of olive polyphenol extract, with high encapsulation efficiency, uniform particle size distribution, good stability, slow release, antioxidation and bacteriostasis. The preparation method of the invention is simple and feasible, the equipment is simple, and the application of the medicine field can be expanded.

【技术实现步骤摘要】
一种富含羟基酪醇和毛蕊花苷油橄榄多酚提取物长循环脂质体的制备方法一、
本专利技术涉及生物、化学和药品领域，特别涉及羟基酪醇脂质体的制备方法。二、
技术介绍
脂质体主要是由类脂材料组成的双分子层空心小球，同时具有亲水性和疏水性两种性质，因此既能包封脂溶性物质又能包埋水溶性物质。将类脂材料分散于水中时，水溶性物质会自发地分布在脂质体的内部，而脂溶性物质分布在脂质体的亲脂端。脂质体的制备方法主要有：薄膜分散法、超声波分散法、冻融法、乙醇注入法、逆相蒸发法等。其理化性质的评价指标主要有：脂质体平均粒径及其粒径分布、包封率、物化稳定性等。制备的脂质体具有靶向性、缓释性、保护性、低剂量、长效性、低毒性等优点。长循环脂质体又称长效脂质体，是一种表面含有天然或合成聚合物修饰的类脂衍生物的新型脂质体。在血液中驻留时间延长，从而延长药物作用时间，具有长效作用。常用的修饰物有聚乙二醇(PEG)和神经节甘酯(GM1)。GM1增强膜刚性，减少单核吞噬细胞系统(MPS)的摄取，这种长循环脂质体在血液中的滞留量与被MPS摄取量的比值高于传统脂质体几十倍。但GM1难以大量获得，且有一定的免疫毒性。含有PEG的类脂衍本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种富含羟基酪醇和毛蕊花苷油橄榄多酚提取物长循环脂质体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：第一步：油橄榄多酚提取物制备取油橄榄叶，加入30～50％乙醇提取，油橄榄叶与30～50％乙醇质量体积比(kg∶L)1∶5～20，提取两次，温度70～85℃，合并提取液，滤液过陶瓷膜(孔径50nm)和分子量3000Da超滤膜，再用纳滤膜浓缩滤液，滤液过纳滤膜，橄榄叶与浓缩滤液质量体积比(kg∶L)1∶1～3，浓缩液真空干燥，粉碎成粉制成油橄榄多酚提取物，HPLC分析，其中橄榄苦苷10～40％，毛蕊花苷3～6％，羟基酪醇2～7％，水溶性为100mL水溶解2～8g；第二步：富含羟基酪醇和毛蕊花苷油橄榄多酚提取物...

【技术特征摘要】
1.一种富含羟基酪醇和毛蕊花苷油橄榄多酚提取物长循环脂质体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：第一步：油橄榄多酚提取物制备取油橄榄叶，加入30～50％乙醇提取，油橄榄叶与30～50％乙醇质量体积比(kg∶L)1∶5～20，提取两次，温度70～85℃，合并提取液，滤液过陶瓷膜(孔径50nm)和分子量3000Da超滤膜，再用纳滤膜浓缩滤液，滤液过纳滤膜，橄榄叶与浓缩滤液质量体积比(kg∶L)1∶1～3，浓缩液真空干燥，粉碎成粉制成油橄榄多酚提取物，HPLC分析，其中橄榄苦苷10～40％，毛蕊花苷3～6％，羟基酪醇2～7％，水溶性为100mL水溶解2～8g；第二步：富含羟基酪醇和毛蕊花苷油橄榄多酚提取物制备将90％羟基酪醇与10～40％橄榄苦苷提取物及90％毛蕊花苷复配，按质量比例为4～8∶2～5∶1～3，加入3～8倍无水乙醇，60～90℃加热回流10～30min，样品充分溶解后过滤，减压浓缩，制备富含羟基酪醇和毛蕊花苷油橄榄多酚提取物，其中羟基酪醇为50～70％，橄榄苦苷为10～20％，毛蕊花苷为5～15％；第三步：薄膜分散-机械振荡法制备长循环油橄榄多酚脂质体以富含羟基酪醇和毛蕊花苷油橄榄多酚提取物为包封目标，设计温度40～70℃、卵磷脂与胆固醇质量比为1∶1～8∶1，称卵磷脂与胆固醇质量3～10g，表面活性剂吐温-80体积2～10mL，PEG2001～5g，放入圆底烧瓶中，加入适量有机溶剂，超声振荡5～20min，溶解后减压薄膜蒸发除去溶剂，再加入1～4mg/mL羟基酪醇(HT)水溶液1～10mL，油橄榄多酚水溶液1～3mL，旋转洗膜水化时间5～50min，再超声溶解5～30min可得到脂质体。根据单因素与正交设计优化，制备均匀的乳白色长循环脂质体，具有稳定性、缓释性、抗氧化性和抑菌性等功能；第四步：富含羟基酪醇和毛蕊花苷油橄榄多酚提取物长循环脂质体包封率取脂质体于烧杯中，加入去离子水，脂质体与去离子水质量体积比浓度为2～15mg/mL，放入透析袋中，在室温下透析1～15h，HPLC分析水溶性中HT浓度(C)和透析滤液中HT浓度(C0)，HT水溶性体积(V)，透析滤液的总体积(V0)，根据下式计算富含羟基酪醇和毛蕊花苷油橄榄多酚提取物长循环脂质体包封率为20～80％以上；第五步：富含羟基酪醇和毛蕊花苷油橄榄多酚提取物长循环脂质体平均粒度及其分布将1～10mg/mL脂质体放入比色皿中，加入一定量的去离子水，用ZetaPlus型激光粒度仪在光源波长368nm和散射角90°下室温测试，制备的脂质体的粒径分布在200～1000nm。第六步：富含羟基酪醇和毛蕊花苷油橄榄多酚提取物长循环脂质体的稳定性1.物理稳定性：取1～8mg/mL脂质体悬浊液和相同浓度HT水溶液，分别用4000r/min～10000r/min离心机离心10～20min，制备的脂质体在4000～6000r/min无沉淀和不分层，乳液稳定；于4℃～25℃下贮藏0～30d，脂质体中羟基酪醇和毛蕊花苷稳定，相同条件下比HT水溶液中HT稳定性提高20～40％；2.水解稳定性：在薄膜分散-机械振荡法制备脂质体悬浮液，在pH值为3.0～7.0的柠檬酸缓冲液(0.1～0.5mol/L柠檬酸溶液与0.2～0.5mol/L磷酸氢二钠溶液)，分别测定各脂质体的包封率，结果是，随着水化液pH值的升高，包封率增加。第七步...

【专利技术属性】
技术研发人员：王成章，原姣姣，李文君，刘玉红，
申请(专利权)人：中国林业科学研究院林产化学工业研究所，陇南市祥宇油橄榄开发有限责任公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32