一种检测六种鸭易感病毒的多重PCR方法技术

本发明专利技术公开了一种检测六种鸭易感病毒的多重PCR方法，包括以下步骤：基因组准备；引物设计与合成；引物特异性检测；多重PCR体系建立；多重PCR特异性检测。本发明专利技术建立了可在单一反应体系中快速鉴别诊断鸭的6种常见病毒的m‑PCR方法，在国内外属首次报道。由于此方法所需检测时间短，特异性强，准确性好，敏感度较高，可普遍适用于临床上鸭病毒感染样品的快速鉴别诊断。

A multiplex PCR method for detection of six duck susceptible viruses

Multiple PCR, the invention discloses a method for detection of six kinds of duck virus susceptible, which comprises the following steps: preparing the genome; design and synthesis of primer; primer specificity detection; multiplex PCR system; multi PCR specific detection. The present invention establishes m PCR method of 6 kinds of common virus rapid differential diagnosis of duck in a single reaction system, are reported for the first time at home and abroad. The method has the advantages of short detection time, strong specificity, good accuracy and high sensitivity, and can be widely applied to the rapid differential diagnosis of duck virus infection samples in clinic.

【技术实现步骤摘要】
一种检测六种鸭易感病毒的多重PCR方法
本专利技术属于流行病学
，具体地说，涉及一种检测六种鸭易感病毒的多重PCR方法。
技术介绍
病毒性传染病是危害鸭群的重要疾病。近年来养鸭业规模的扩大、混合养殖模式的增多、人畜的流动性增强、水源污染造成的水质下降等多方面因素为病毒的传播创造了有利条件，地方流行的病毒性疾病明显增多，新的疫情不断发生，给养鸭业造成了严重经济损失。目前，感染鸭的主要病毒有1型鸭肝炎病毒、鸭瘟病毒、鸭坦布苏病毒、番鸭细小病毒、番鸭呼肠孤病毒和鸭H9N2低致病性禽流感病毒等，建立能够普遍适用这些病毒感染的快速检测方法，以今早采取防治措施，减少经济损失是困扰养鸭业的重要问题。临床上，病毒分离鉴定、血清学检测、免疫电镜、ELISA、Real-timePCR、LAMP和普通PCR等技术已被分别应用于这些病毒感染的检测，但是病毒分离鉴定耗时长，血清学和ELISA检测耗时费力，免疫电镜和Real-timePCR对设备及病毒的纯化要求较高，均给临床诊断带来了局限性。PCR检测技术灵敏度高、简便、快速、安全、易于推广，无需分离病毒即可检测，Real-timePCR、LAMP和普通本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测六种鸭易感病毒的多重PCR方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、基因组准备按照Viral RNA/DNA Extraction Kit试剂盒说明书分别提取6种病毒已有毒株基因组RNA/DNA，无核酸酶超纯水溶解后分光光度计测定浓度与纯度；将DHAV‑1、DTMUV、ARV及H9N2的RNA按照MMLV说明书反转录为cDNA，所有DNA/cDNA置于‑80℃保存备用；步骤2、引物设计与合成分别比对DHAV‑1、DPV、DTMUV、MPDV、ARV、H9N2这6种病毒在Genebank中已公布的蛋白序列与实验室已有毒株的病毒蛋白序列，选择保守区域利用Primer Premier V5.0...

【技术特征摘要】
1.一种检测六种鸭易感病毒的多重PCR方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、基因组准备按照ViralRNA/DNAExtractionKit试剂盒说明书分别提取6种病毒已有毒株基因组RNA/DNA，无核酸酶超纯水溶解后分光光度计测定浓度与纯度；将DHAV-1、DTMUV、ARV及H9N2的RNA按照MMLV说明书反转录为cDNA，所有DNA/cDNA置于-80℃保存备用；步骤2、引物设计与合成分别比对DHAV-1、DPV、DTMUV、MPDV、ARV、H9N2这6种病毒在Genebank中已公布的蛋白序列与实验室已有毒株的病毒蛋白序列，选择保守区域利用PrimerPremierV5.0和OligoV6.22软件进行引物的评价和筛选，设计特异性引物SEQIDNO:1-12所示，引物由英潍捷基(上海)贸易有限公司合成；步骤3、引物特异性检测分别以6种病毒已有毒株DNA/cDNA为模板，扩增相应的目的片段，每个反应体系总体积为50μl，包括单一病毒模板5μl、各自上、下游引物1μl、2×Taqmix酶25μl，水18μl；反应程序为：94℃预变性4min、94℃变性30s、52℃退火45s、72℃延伸1min，进行3...

【专利技术属性】
技术研发人员：王永娟，朱善元，左伟勇，洪伟鸣，王安平，吴双，郭长明，
申请(专利权)人：江苏农牧科技职业学院，
类型：发明
国别省市：江苏,32