一种同步分离高纯度植物叶绿体和线粒体的方法技术

本发明专利技术公开了一种同步分离高纯度植物叶绿体和线粒体的方法，其步骤是：A.叶片组织加入CIB缓冲液，研磨后依次通过70 μm、35 μm和15 μm滤网过滤，过滤液200×g离心5min，去除组织残渣、细胞碎片；B.将上述滤液1000×g离心10min，收集富含叶绿体的沉淀；C.收集步骤B离心后的上清液，5μm滤网过滤，过滤液经2000×g离心10min，弃沉淀，上清液17000×g离心10min，收集富含线粒体沉淀；D.上述沉淀分别用洗涤缓冲液洗涤，并用DNase I消化以去除背景基因组的污染；E.叶绿体沉淀1000×g离心10 min后弃上清，线粒体沉淀17000×g离心10 min后弃上清，沉淀用洗涤缓冲液洗涤。

Method for synchronously separating high purity plant chloroplast and mitochondrion

The invention discloses a method for simultaneous separation of high purity of chloroplast and mitochondria, which comprises the steps of: adding A. leaves CIB buffer after grinding followed by 70 m, 35 m and 15 m filter, filter liquid centrifugal 200 x g 5min, removal of tissue debris, broken cells the centrifugal filtrate; B. 1000 * g 10min, rich collection of chloroplast C. precipitation; step B collected after centrifugation supernatant, 5 M filter, filter liquid by centrifugation 2000 * g 10min, abandoned the precipitation, centrifugal supernatant of 17000 * g 10min, D. of the collection of mitochondria rich precipitation; precipitation were washed with buffer liquid washing, and using DNase I digestion to remove background genomic contamination; chloroplast E. 1000 * g 10 centrifugal precipitation supernatant after min, 17000 * 10 g centrifugal sedimentation mitochondrial min supernatant precipitated with washing buffer.

【技术实现步骤摘要】
一种同步分离高纯度植物叶绿体和线粒体的方法
本专利技术属于细胞生物学和分子生物学
，具体涉及一种同步分离高纯度植物叶绿体和线粒体的方法。
技术介绍
叶绿体(chloroplast)和线粒体(mitochondrion)的研究在系统进化、物种鉴定、核质互作、基因工程等领域具有举足轻重的作用。分离高纯度的叶绿体和线粒体细胞器是开展相关研究的关键。密度梯度离心是目前分离这两种细胞器最为常用的方法，它是用一定的介质在离心管内形成连续或不连续的密度梯度，将细胞匀浆或混悬液至于介质的顶部，通过重心或离心场力的作用使细胞分层和分离。密度梯度离心介质包括蔗糖(Sucrose)、血清白蛋白(Serumalbumin,ALB)、聚蔗糖(Ficoll)、氯化铯(CsCl)和Percoll等。密度梯度离心方法存在一些不足：1)血清白蛋白、聚蔗糖、氯化铯和Percoll等介质的价格昂贵；2)价格相对低廉的蔗糖在高浓度时又会对线粒体和叶绿体活性造成不利影响，特别是线粒体对介质的渗透压十分敏感，高浓度会导致其变形或破裂；3)配置惰性梯度介质溶液步骤繁琐且耗时；4)配置的分离液无法重复使用；5)离心时间较长；本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种同步分离高纯度植物叶绿体和线粒体的方法，其步骤是：A.植物叶片组织冲洗干净并剪碎，按照1:15(m:v)加入CIB缓冲液，研磨后依次通过70μm、35μm和15μm滤网过滤，过滤液200×g离心5min，去除组织残渣、细胞碎片；B.根据叶绿体和线粒体不同的沉降系数，将步骤A获得的滤液1000×g离心10min，收集富含叶绿体的沉淀；C.收集步骤B离心后的上清液，用5μm的滤网过滤，过滤液经2000×g离心10min，弃沉淀，上清液17000×g离心10min，收集富含线粒体沉淀；D.收集得到的叶绿体和线粒体沉淀分别用洗涤缓冲液洗涤，并用DNase I消化以去除核基因组的污染；E.叶绿体沉淀...

【技术特征摘要】
1.一种同步分离高纯度植物叶绿体和线粒体的方法，其步骤是：A.植物叶片组织冲洗干净并剪碎，按照1:15(m:v)加入CIB缓冲液，研磨后依次通过70μm、35μm和15μm滤网过滤，过滤液200×g离心5min，去除组织残渣、细胞碎片；B.根据叶绿体和线粒体不同的沉降系数，将步骤A获得的滤液1000×g离心10min，收集富含叶绿体的沉淀；C.收集步骤B离心后的上清液，用5μm的滤网过滤，过滤液经2000×g离心10min，弃沉淀，上清液17000×g离心10min，收集富含线粒体沉淀；D.收集得到的叶绿体和线...

【专利技术属性】
技术研发人员：华玮，李俊，范世航，刘红芳，
申请(专利权)人：中国农业科学院油料作物研究所，
类型：发明
国别省市：湖北,42