一种广西特色瑶族药四方藤的组培快繁方法技术

本发明专利技术涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种广西特色瑶族药四方藤的组培快繁方法，包括依次进行的如下步骤：获取四方藤植株的外植体、外植体诱导培养、增殖培养、生根培养、移栽；所述的外植体诱导培养操作的外植体诱导培养基包括：MS培养基、0.5～2.0mg/L 6‑BA、0.2～0.5mg/L NAA、0.01～0.05mg/L Paclobutrazol、25～30g/L蔗糖、3.5～4.0g/L琼脂、0.5～1.0g/L活性炭，pH为5.4～5.8，本发明专利技术选择四方藤带节茎段为外植体，经诱导培养、增殖培养、生根培养以及移栽等步骤，其诱导率达到了88.5％以上，成活率达到了95％以上，实现了四方藤的组培快繁，从而实现了本发明专利技术的目的。

Method for tissue culture and rapid propagation of Guangxi special Yao nationality medicine square vine

The invention relates to a method of plant tissue culture in agricultural biotechnology, in particular relates to a method of tissue culture and rapid propagation characteristics of Guangxi Yao nationality medicine square rattan, comprises the following steps in order: explants, explants were cultured to obtain treebine stem, proliferation culture, rooting and transplanting; explant explant the induction operation of induction medium including MS medium, 0.5 ~ 6 2.0mg/L BA, 0.2 ~ NAA, 0.01 ~ 0.05mg/L 0.5mg/L Paclobutrazol, 25 ~ 30g/L, 3.5 ~ 4.0g/L sucrose agar, 0.5 ~ 1.0g/L activated carbon, pH is 5.4 ~ 5.8, the choice of square with rattan stems as explants, the induction culture, proliferation culture, rooting culture, transplanting and other steps, the induction rate reached more than 88.5%, the survival rate reached more than 95%, to achieve the rapid propagation of tissue culture square rattan Thereby realizing the purpose of the invention.

【技术实现步骤摘要】
一种广西特色瑶族药四方藤的组培快繁方法
本专利技术涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种广西特色瑶族药四方藤的组培快繁方法。
技术介绍
四方藤(CissusPterocladaHayata)，别名红四方藤、翼枝白粉藤、春根藤等，为葡萄科(Vitaceae)白粉藤属(CissusLinn.)草质藤本植物，常生于阔叶林中，是广西特色瑶族药之一，主要分布于百色、陆川、贺州、博白、靖西等地，在民间广泛用于治疗风湿痹痛、腰肌劳损、外伤、止血等，疗效显著。据《广西中药志》记载，四方藤茎可入药，其味微苦，涩，甘，性平。具有舒筋活络，去瘀生新，治跌打损伤，筋络拘挛等功效。可用于治疗风湿痹痛、腰肌劳损、跌打损伤、内外伤出血、胃及十二指肠出血、疼痛等症，并可用于产后保健药浴。作为一种具有独特药效的瑶族药，目前四方藤多处于野生状态，但由于药农无序采挖，其野生资源锐减，因此人工栽培四方藤显得十分迫切！四方藤可通过种子、扦插、压条等方式繁殖，但均存在周期长、繁殖系数低下等缺点，限制了四方藤种苗的生产。因此有必要建立四方藤的组培快繁体系，本专利技术选择四方藤带节茎段为外植体，经诱导、增殖、生根、炼苗以及移栽等步骤，建立了四方藤的组培快速繁殖体系。本专利技术具有周期短、成本低廉、繁殖系数高等特点，可直接用于四方藤种苗的工厂化生产，对于促进瑶族药药四方藤的植物资源开发具有重要的现实意义。至目前为止，国内外尚未有四方藤组织培养技术的报道，也未有四方藤组培快繁专利的申请。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种广西特色瑶族药四方藤的组培快繁方法，本专利技术选择四方藤带节茎段为外植体，经诱导培养、增殖培养、生根培养以及移栽等步骤，其诱导率达到了88.5％以上，成活率达到了95％以上，实现了四方藤的组培快繁，从而实现了本专利技术的目的。本专利技术提供的技术方案为：一种广西特色瑶族药四方藤的组培快繁方法，包括依次进行的如下步骤：获取四方藤植株的外植体、外植体诱导培养、增殖培养、生根培养、移栽；所述的外植体诱导培养操作的外植体诱导培养基包括：MS培养基、0.5～2.0mg/L6-BA、0.2～0.5mg/LNAA、0.01～0.05mg/LPaclobutrazol、25～30g/L蔗糖、3.5～4.0g/L琼脂、0.5～1.0g/L活性炭，pH为5.4～5.8。在上述的广西特色瑶族药四方藤的组培快繁方法中，所述的外植体诱导培养操作的方法为：将采集得到的作为外植体的四方藤消毒后剪切成2.0～2.5cm的带节藤茎并接种到诱导培养基中，置于25～28℃进行全暗培养25～35天即可诱导形成不定芽。在上述的广西特色瑶族药四方藤的组培快繁方法中，所述的增殖培养操作所用到的增殖培养基包括：MS培养基、1.0～2.0mg/L6-BA、0.5～1.0mg/LNAA、20～30g/L蔗糖、3.5～4.0g/L琼脂、0.1～0.5g/L活性炭，pH为5.4～5.8。在上述的广西特色瑶族药四方藤的组培快繁方法中，所述的增殖培养操作具体为：将外植体诱导培养操作得到的不定芽切成长1.5～2.0cm的茎段并接种到增殖培养基中培养20～30天即可实现不定芽的增殖。在上述的广西特色瑶族药四方藤的组培快繁方法中，所述的生根培养操作所用到的生根培养基包括：1/2MS培养基、0.05～0.1mg/Lchlormequatchloride、0.5～1.0mg/LIBA、15～20g/L蔗糖、3.0～4.0g/L琼脂、0.1～0.3g/L活性炭，pH为5.4～5.8。在上述的广西特色瑶族药四方藤的组培快繁方法中，所述的生根培养操作的方法为：从增殖培养得到增殖后的不定芽的基部切取2.0～3.0cm不定芽并接种到生根培养基中培养25～30天即能实现试管苗的生根。在上述的广西特色瑶族药四方藤的组培快繁方法中，所述的移栽操作的具体方法为：将经生根培养操作得到的根系生长良好的试管苗在温室的自然光下炼苗2～3天，洗净根部的培养基移栽于体积比为1:1的腐殖土、泥炭土混合基质中栽培成苗即得四方藤种苗。在上述的广西特色瑶族药四方藤的组培快繁方法中，增殖培养操作、生根培养操中培养条件均为：培养温度为25～28℃，光照强度为2500～3000lx，光照时间为12～14小时/天。有益效果：本专利技术采用植物组织培养技术建立了瑶族药四方藤的组培快繁，本专利技术具有周期短、成本低廉、繁殖系数高等特点，可直接用于四方藤种苗的工厂化生产，对于促进瑶族药四方藤的植物资源开发具有重要的现实意义。具体实施方式下面结合具体实施方式，对本专利技术的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对本专利技术的任何限制。实施例一(1)外植体采集：在野外选取生长健壮、无明显病害的四方藤植株中上部、向阳充实的带节藤茎为外植体，采集后立即进行保水保湿处理并及时带回实验室。(2)外植体诱导：将步骤(1)采集回实验室的外植体置于自来水下冲洗3小时，置于超净工作台中于75％的乙醇溶液中消毒10秒钟，无菌水冲洗3次后用无菌滤纸吸干水分后，置于0.1％的升汞溶液中消毒15分钟，无菌水冲洗5次后用无菌滤纸吸干水分后切成2.0～2.5cm左右的带节藤茎并接种到诱导培养基中，置于25℃进行全暗培养25天即可诱导形成不定芽，诱导率达94.1％，污染率低于10％。所述的诱导培养基为：MS培养基+2.0mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+0.05mg/LPaclobutrazol(多效唑)+25g/L蔗糖+3.5g/L琼脂+0.5g/L活性炭，pH为5.4。(3)增殖培养：将步骤(2)诱导得到的不定芽切成长约1.5～2.0cm的茎段并接种到增殖培养基中培养20天即可实现不定芽的增殖，增殖系数达到5.0倍。所述的增殖培养基为：MS培养基+2.0mg/L6-BA+1.0mg/LNAA+20g/L蔗糖+3.5g/L琼脂+0.1g/L活性炭，pH为5.4。(4)生根培养：从基部切取步骤(3)增殖得到的长约2.0～3.0cm的不定芽并接种到生根培养基中培养20天即能实现试管苗的生根，生根率达到95.8％。所述的生根培养基为：1/2MS培养基+0.1mg/Lchlormequatchloride(矮壮素)+1.0mg/LIBA+15g/L蔗糖+3.0g/L琼脂+0.1g/L活性炭，pH为5.4。(5)移栽：将步骤(4)根系生长良好的试管苗在温室的自然光下炼苗2天，洗净根部的培养基移栽于体积比为1:1的腐殖土、泥炭土混合基质中栽培成苗即得四方藤种苗，移栽30天后成活率达到95％以上。上述步骤(3)～(4)的培养条件为：培养温度为25℃，光照强度为2500lx，光照时间为12小时/天。实施例二(1)外植体采集：在野外选取生长健壮、无明显病害的四方藤植株中上部、向阳充实的带节藤茎为外植体，采集后立即进行保水保湿处理并及时带回实验室。(2)外植体诱导：将步骤(1)采集回实验室的外植体置于自来水下冲洗4小时，置于超净工作台中于75％的乙醇溶液中消毒13秒钟，无菌水冲洗4次后用无菌滤纸吸干水分后，置于0.1％的升汞溶液中消毒17分钟，无菌水冲洗6次后用无菌滤纸吸干水分后切成2.0～2.5cm左右的带节藤茎并接种到诱导培养基中，置于26℃进行全暗培养31天即可诱导形成不定芽，诱导率达到90％以上，污染率本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种广西特色瑶族药四方藤的组培快繁方法，其特征在于：包括依次进行的如下步骤：获取四方藤植株的外植体、外植体诱导培养、增殖培养、生根培养、移栽；所述的外植体诱导培养操作的外植体诱导培养基包括：MS培养基、0.5～2.0mg/L6‑BA、0.2～0.5mg/L NAA、0.01～0.05mg/L Paclobutrazol、25～30g/L蔗糖、3.5～4.0g/L琼脂、0.5～1.0g/L活性炭，pH为5.4～5.8。

【技术特征摘要】
1.一种广西特色瑶族药四方藤的组培快繁方法，其特征在于：包括依次进行的如下步骤：获取四方藤植株的外植体、外植体诱导培养、增殖培养、生根培养、移栽；所述的外植体诱导培养操作的外植体诱导培养基包括：MS培养基、0.5～2.0mg/L6-BA、0.2～0.5mg/LNAA、0.01～0.05mg/LPaclobutrazol、25～30g/L蔗糖、3.5～4.0g/L琼脂、0.5～1.0g/L活性炭，pH为5.4～5.8。2.根据权利要求1所述的广西特色瑶族药四方藤的组培快繁方法，其特征在于：所述的外植体诱导培养操作的方法为：将采集得到的作为外植体的四方藤消毒后剪切成2.0～2.5cm的带节藤茎并接种到诱导培养基中，置于25～28℃进行全暗培养25～35天即可诱导形成不定芽。3.根据权利要求1所述的广西特色瑶族药四方藤的组培快繁方法，其特征在于：所述的增殖培养操作所用到的增殖培养基包括：MS培养基、1.0～2.0mg/L6-BA、0.5～1.0mg/LNAA、20～30g/L蔗糖、3.5～4.0g/L琼脂、0.1～0.5g/L活性炭，pH为5.4～5.8。4.根据权利要求3所述的广西特色瑶族药四方藤的组培快繁方法，其特征在于：所述的增殖培养操作具体为：将外植体诱导培养操作得到的不定芽切...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁钧淞，
申请(专利权)人：玉林师范学院，
类型：发明
国别省市：广西,45