The invention discloses a method for preparing ginger infection of cucumber mosaic virus antiserum preparation method and application thereof, which comprises the following steps: coarse virus extraction and purification and preparation of cucumber mosaic virus coat protein gel, containing coat protein gel plus saline ground after immunization of mice, respectively. Cucumber mosaic virus particles with different doses of the invention, the preparation of isolated protein electrophoresis using 5 20% shell SDS PAGE gradient gel, together with polyacrylamide gel coat protein immunized mice antiserum with high titer, indicating that the technology is practical and reliable. The antiserum obtained from this method can be used for the detection of cucumber mosaic virus infecting ginger. It can rapidly detect the infection of ginger cucumber mosaic virus, which is very convenient for the detection of the virus.
【技术实现步骤摘要】
一种侵染生姜的黄瓜花叶病毒抗血清的制备方法
一种制备侵染生姜的黄瓜花叶病毒抗血清的制备方法,属免疫
技术介绍
黄瓜花病毒(CMV)是雀麦花叶病毒科(Bromoviridae)黄瓜花叶病毒属(Cucurnovirus)的典型成员,具有典型的三分体正义单链RNA(ssRNA)病毒的特点。CMV的寄主范围十分广泛,它能侵染包括茄科、十字花科、豆科等1000多种植物,对经济作物产生严重危害。CMV侵染生姜后出现花叶、矮化或者褪绿,且这些症状往往是复合出现。CMV因其发生的普遍性和所引起病害的严重性,是目前研究最多的植物RNA病毒之一。生姜(ZingiberoffcinaleRosc.)为姜科姜属多年生宿根草本植物,侵染生姜并引起严重危害的病毒主要是黄瓜花叶病毒(Cucumbermosaicvirus,CMV)和烟草花叶病毒(Tobaccomosaicvirus,TMV)。由于生姜采用无性繁殖,病毒逐年积累,病毒危害也逐年加重,病毒病可导致生姜减产30-50%,且影响品质。目前没有防治病毒病的有效药物,解决病毒病的途径是通过筛选无病毒生姜进行繁育,建立种子基地,用无病毒良种栽培。虽然检测植物病毒的方法有多种,但间接ELISA法是最常用的方法,每次可以检测几十乃至上百个样品,是一种经济、实用的方法,成本也低。由于市场上没有能检测侵染生姜的黄瓜花叶病毒的抗血清,脱毒生姜种苗的质量多通过目测或者指示植物方法确定是否脱毒完全,既缺乏科学性又费时。本专利技术制备检测侵染生姜的黄瓜花叶病毒抗血清,可大大方便该病毒的检测。
技术实现思路
本专利技术用感染黄瓜花叶病毒的生姜叶 ...
【技术保护点】
一种制备侵染生姜的黄瓜花叶病毒抗血清的方法,其特征在于,包括以下步骤:a、粗病毒的提取将黄瓜花叶病毒侵染的生姜病叶匀浆,过滤和低速离心去除大的固体杂质,四氯化碳去除叶绿素,加入聚乙二醇6000(PEG6000)、NaCl和Triton‑X 100后静置使病毒粒子沉淀,用20%蔗糖垫进一步纯化获得的黄瓜花叶病毒颗粒, 将其溶解于PBS中,得到病毒悬液,于‑80°C储存备用;b、黄瓜花叶病毒外壳蛋白的5‑20% SDS‑PAGE梯度分离纯化将病毒悬液与等体积的1.5‑2.5倍SDS上样缓冲液混合,沸水浴加热8‑12分钟,冷却后离心除去沉淀,然后将样品加入制备型的5‑20% SDS‑PAGE梯度凝胶板中电泳,完毕后凝胶用4°C的0.25M KCl浸泡染色,切下乳白色的黄瓜花叶病毒外壳蛋白条带,平分3‑5份;c、将含外壳蛋白的凝胶加生理盐水磨细后,免疫注射3‑5只小鼠,4次免疫注射,两次之间间隔6‑7天,第一次注射方式为皮下注射0.24‑0.26 mL,腹腔注射0.24‑0.26 mL,第二、第三和第四次注射均腹腔注射0.48‑0.52 mL,第四次注射后第3天断头取血,6小时后离心获得抗血清 ...
【技术特征摘要】
1.一种制备侵染生姜的黄瓜花叶病毒抗血清的方法,其特征在于,包括以下步骤:a、粗病毒的提取将黄瓜花叶病毒侵染的生姜病叶匀浆,过滤和低速离心去除大的固体杂质,四氯化碳去除叶绿素,加入聚乙二醇6000(PEG6000)、NaCl和Triton-X100后静置使病毒粒子沉淀,用20%蔗糖垫进一步纯化获得的黄瓜花叶病毒颗粒,将其溶解于PBS中,得到病毒悬液,于-80°C储存备用;b、黄瓜花叶病毒外壳蛋白的5-20%SDS-PAGE梯度分离纯化将病毒悬液与等体积的1.5-2.5倍SDS上样缓冲液混合,沸水浴加热8-12分钟,冷却后离心除去沉淀,然后将样品...
【专利技术属性】
技术研发人员:韦传宝,
申请(专利权)人:安徽威尔试剂盒科技有限责任公司,
类型:发明
国别省市:安徽,34
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