二十二碳六烯酸的发酵方法技术

本发明专利技术涉及一种二十二碳六烯酸的发酵方法，本发明专利技术的方法中，发酵培养阶段中通过检测菌体OD

Method for fermenting twenty-two carbon six dilute acid

The invention relates to a method for fermenting twenty-two carbon six dilute acid. In the method of the invention, OD is detected by fermentation culture

【技术实现步骤摘要】
二十二碳六稀酸的发酵方法
本专利技术涉及二十二碳六烯酸发酵领域，具体地，涉及一种二十二碳六稀酸的发酵方法。
技术介绍
二十二碳六烯酸(docosahexaenoicacid，简称DHA)化学名称为二十二碳-4，7，10，13，16，19-六烯酸，属n-3系列长链多不饱和脂肪酸，已知DHA对脑功能的维持、发展发挥着重要作用。人虽然具有由亚麻酸合成DHA的能力，但其合成量与所需量相比很少，需要从外部摄取DHA。因此，含有DHA的食品、营养补充剂、婴儿配方奶在大量销售。这些制品中含有的DHA可以从鱼油中提取得到，鱼油价格低廉且富含DHA，因此是优良的DHA的供给源，但考虑到近来DHA的需求增高，以及伴随海洋污染产生的PCB、重金属在鱼中的蓄积等，更安全和更稳定供给DHA的生产方法也日益增多。最近的研究表明，除了从鱼油提取得到的DHA以外，还可以通过使用微生物发酵法制造DHA。例如可以通过裂殖壶菌发酵培养生产DHA，但是在发酵过程中DHA的产量较低，发酵周期也较长。因此，显著急需一种能够显著提高DHA产量并降低发酵周期的发酵方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有技术中DHA产量较低且发酵周期较长的缺陷，提供一种二十二碳六稀酸的发酵方法。为了实现上述目的，本专利技术提供了一种二十二碳六稀酸的发酵方法，该方法包括：采用裂殖壶菌(Schizochytriumsp.)依次进行活化培养、传代培养、种子培养和发酵培养，其中，在所述发酵培养阶段中通过检测菌体OD600值和糖耗值来控制所述发酵培养基的溶氧量和葡萄糖的流加速度，所述控制方式包括：依次进行下述步骤，(1)菌体OD600值在60以下，糖耗小于4g/L/h时，控制溶氧量在80％以下，且不流加葡萄糖；菌体OD600值在60以下，糖耗大于4g/L/h时，控制溶氧量在80％以上，并控制葡萄糖的流加速度为3.5-4.5g/L/h；(2)菌体OD600值在60以上70以下，糖耗小于3g/L/h时，控制溶氧量在80％以下，且不流加葡萄糖；菌体OD600值在60以上70以下，糖耗大于4g/L/h时，控制溶氧量在80％以上，并控制葡萄糖的流加速度为3.5-4.5g/L/h；(3)菌体OD600值在70以上时，控制溶氧量在50％以下，并控制葡萄糖的流加速度为3.5-4.5g/L/h。本专利技术的方法中，发酵培养阶段中通过检测菌体OD600值和糖耗值来控制发酵培养基的溶氧量和葡萄糖的流加速度，从而能够显著提高DHA的产量并显著降低发酵周期。本专利技术的其它特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。具体实施方式以下对本专利技术的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本专利技术，并不用于限制本专利技术。本专利技术提供了一种二十二碳六稀酸的发酵方法，该方法包括：采用裂殖壶菌(Schizochytriumsp.)依次进行活化培养、传代培养、种子培养和发酵培养，其中，在所述发酵培养阶段中通过检测菌体OD600值和糖耗值来控制所述发酵培养基的溶氧量和葡萄糖的流加速度，所述控制方式包括：依次进行下述步骤，(1)菌体OD600值在60以下，糖耗小于4g/L/h时，控制溶氧量在80％以下，且不流加葡萄糖；菌体OD600值在60以下，糖耗大于4g/L/h时，控制溶氧量在80％以上，并控制葡萄糖的流加速度为3.5-4.5g/L/h；(2)菌体OD600值在60以上70以下，糖耗小于3g/L/h时，控制溶氧量在80％以下，且不流加葡萄糖；菌体OD600值在60以上70以下，糖耗大于4g/L/h时，控制溶氧量在80％以上，并控制葡萄糖的流加速度为3.5-4.5g/L/h；(3)菌体OD600值在70以上时，控制溶氧量在50％以下，并控制葡萄糖的流加速度为3.5-4.5g/L/h。根据本专利技术所述的方法，其中，所述活化培养条件可以为本领域常规的裂殖壶菌活化培养条件，例如：培养温度可以为25-32℃，培养时间可以为12-36h，优选地，培养基为PDA固体培养基。根据本专利技术所述的方法，PDA固体培养可以为本领域常规的组成，例如可以含有：马铃薯汁200-250g，葡萄糖20-25g，琼脂15-20g，水1000-1200mL。根据本专利技术所述的方法，优选地，所述传代培养的传代次数为3-5代，即传代培养进行3-5代后再进行种子培养，更优选地，控制传代培养每代传代结束时的OD600值为25-35，从而更有利于后续种子培养和发酵培养的进行。其中，传代培养的条件可以包括：温度为25-32℃，时间为12-36h，摇床转速为100-200转/分钟，传代培养基可以含有：葡萄糖10-30g/L，酵母粉1-10g/L，玉米浆1-20g/L，CaCl2·2H2O1-2g/L，Na2SO48-10g/L，KCl1-2g/L，KH2PO41-4g/L，MgSO4·7H2O1-2g/L，VB11-2mg/L，VB120.1-0.2mg/L，VB61-2mg/L，硼酸1-20mg/L。本专利技术中，相对于1L的种子培养基，接种40-100mL传代培养得到的菌液。根据本专利技术所述的方法，种子培养的方式可以为一级扩培或者多级扩培的方式进行培养，当一级扩培时，将一级扩培得到的种子液直接用于发酵培养；当多级扩培时，多级扩培的次数可以为2-4级。在多级扩培方案中，罐体大小的设计以及培养的级数根据最终产能的大小来决定。根据本专利技术所述的方法，种子培养的条件可以本领域常规的条件，例如可以包括：温度为28-32℃，时间为12-36h，通风量为0.1-3vvm，搅拌速度50-800转/分钟，种子培养基可以含有：葡萄糖40-50g/L，酵母膏1-5g/L，蛋白胨1-5g/L，乙酸铵1-5g/L，谷氨酸钠1-10g/L，KH2PO41-4g/L，Na2SO4，5-12g/L，MgSO4·7H2O2-3g/L，KCl2-3g/L，MgCl21-3g/L，CaCl2·2H2O1-2g/L，FeCl30.1-0.15g/L，VB15-10mg/L，VB120.15-0.3mg/L，VB60.3-0.5mg/L。本专利技术中，传代培养基的配制方法可以为本领域常规的方法，例如可以包括：葡萄糖单独灭菌，酵母粉与玉米浆分别灭菌，除了维生素以外的其它原料一起灭菌，灭菌条件为121℃、30min，灭菌完成后，冷却至室温，在无菌条件下配制为所述培养基配方浓度即可；维生素配制为溶液后，经过0.1μm无菌过滤膜过滤，然后加入培养基中，然后将上述培养基装在含有挡板的250ml摇瓶中，保证最终装液量为50ml，自然pH值，以用于传代培养。本专利技术中，种子培养基的配制方法可以为本领域常规的方法，例如可以包括：葡萄糖单独灭菌，酵母粉单独灭菌，除了维生素以外的其它原料一起灭菌，灭菌条件为121℃、30min，灭菌完成后，冷却至室温，在无菌条件下配制为所述培养基配方浓度即可；维生素配制为溶液后，经过0.1μm无菌过滤膜过滤，然后加入培养基中，然后将上述培养基装在含有挡板的250ml摇瓶中，保证最终装液量为50ml，自然pH值，以用于种子培养。根据本专利技术所述的方法，发酵培养的条件除了上述控制的发酵培养基的溶氧量和葡萄糖的流加速度外，还可以包括：温度为25-32℃，发酵初本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种二十二碳六稀酸的发酵方法，其特征在于，该方法包括：采用裂殖壶菌(Schizochytrium sp.)依次进行活化培养、传代培养、种子培养和发酵培养，其中，在所述发酵培养阶段中通过检测菌体OD

【技术特征摘要】
1.一种二十二碳六稀酸的发酵方法，其特征在于，该方法包括：采用裂殖壶菌(Schizochytriumsp.)依次进行活化培养、传代培养、种子培养和发酵培养，其中，在所述发酵培养阶段中通过检测菌体OD600值和糖耗值来控制所述发酵培养基的溶氧量和葡萄糖的流加速度，所述控制方式包括：依次进行下述步骤，(1)菌体OD600值在60以下，糖耗小于4g/L/h时，控制溶氧量在80％以下，且不流加葡萄糖；菌体OD600值在60以下，糖耗大于4g/L/h时，控制溶氧量在80％以上，并控制葡萄糖的流加速度为3.5-4.5g/L/h；(2)菌体OD600值在60以上70以下，糖耗小于3g/L/h时，控制溶氧量在80％以下，且不流加葡萄糖；菌体OD600值在60以上70以下，糖耗大于4g/L/h时，控制溶氧量在80％以上，并控制葡萄糖的流加速度为3.5-4.5g/L/h；(3)菌体OD600值在70以上时，控制溶氧量在50％以下，并控制葡萄糖的流加速度为3.5-4.5g/L/h。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述传代培养的传代次数为3-5代，更优选地，控制传代培养每代传代结束时的OD600值为25-35。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，传代培养基含有：葡萄糖10-30g/L，酵母粉1-10g/L，玉米浆1-20g/L，CaCl2·2H2O1-2g/L，Na2SO48-10g/L，KCl1-2g/L，KH2PO41-4g/L，MgSO4·7H2O1-2g/L，VB11-2mg/L，VB120.1-0.2mg/L，VB61-2mg/L，硼酸1-20mg...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭超，沈乃东，熊强，李凡，林海龙，
申请(专利权)人：中粮集团有限公司，中粮营养健康研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11