一种用于浮游植物、原生动物定量样品鉴定的封片方法技术

本发明专利技术公开了一种浮游植物、原生动物定量样品鉴定的封片方法，步骤是：A、取纸张，浸染甘油，放置于载玻片上，重复2－3次，甘油均匀的布满盖玻片，纸片用之前残留的甘油浸染；B、将水体中浓缩后定量的浮游植物、原生动物样品稀释，取稀释液于0.1ml的计数框内，晃动载玻片，让样品平铺于计数框内；C、取盖玻片沿45度方向对样品进行盖片，逐渐排出计数框内的空气；D、用第一步已经浸染好甘油的纸片沿着盖玻片的四周进行密封；E、在室温条件下，对样品计数完成后，计数框内样品未见有气泡出现，该封片提高封片效果。法操作简单，成本低廉，可重复利用，不会污染显微镜的物镜，同时封片的效果显著，提高了工作效率，提高了样品计数的精确度。

A method for quantitative identification of phytoplankton, protozoa sample mounting method

The invention discloses a method for quantitative identification of phytoplankton, protozoa sample mounting method comprises the following steps: A, dip paper, glycerin, placed on the slide, repeated 2 to 3 times, even with glycerol coverslip, before using residual glycerol impregnated paper; B, the water body after the concentration of quantitative phytoplankton protozoa, sample dilution, counting from dilution to 0.1ml box, shaking the slides, let the sample tile on the counting frame; C, take cover along the 45 degree direction of the sample cover plate, the box counting gradually discharged air; D, the first step has good slip along the dip of glycerol glass around the seal; E, at room temperature, the sample counting is completed, the box counting samples no bubbles appear, the improvement effect of mounting mounting. Simple operation, low cost, repeatable use, no pollution of the microscope objective, while significantly sealing effect, improve work efficiency, improve the accuracy of sample counting.

【技术实现步骤摘要】
一种用于浮游植物、原生动物定量样品鉴定的封片方法
本专利技术属于水体生态研究领域，更具体涉及一种用于浮游植物、原生动物定量样品鉴定的封片方法，适用于水库、湖泊、河流、池塘等水体中浮游植物、原生动物定量样品的鉴定时的前处理，可节约重复制片的时间，提高技术的准确性。
技术介绍
浮游植物是在水体中营浮游生活的光合自养生物，是水体的生产者。它们的个体寿命通常很短，从几个小时到几十天，在一个生长期内可以繁殖很多代。由于个体较小，浮游植物对环境变化的响应十分迅速，是水体富营养化监测的重要指标之一。原生动物作为水体的初级消费者，是一类形态各异，分布极广的单细胞生物，它们在水生生物物质循环和能量流动中扮演了极为重要的角色，具有承上启下的功能。因此，浮游植物和原生动物被广泛地应用于水域环境监测及水体富营养化评价中，许多种类也被认为是水体污染的指示生物而得到广泛利用。通过浮游植物、原生动物的定量分析来估算其水体中的生物量是常用的监测手段。在对浮游植物和原生动物进行定量分析时，由于水体中它们的生物量较大，鉴定通常需要较长时间。在计数过程中多数工作者会对样品进行稀释，然而样品必须在有效时间内完成计数，否则就会因水分蒸发使计数框内出现气泡造成计量误差，影响计数的准确性。基于这样一种情况，对盖玻片采取封片措施，延缓样品出现气泡的时间是急需解决的问题，尤其是针对于初学者。
技术实现思路
为了解决上述现有技术存在的问题，本专利技术的目的是在于提供了一种用于浮游植物、原生动物定量样品鉴定的封片方法，该封片方法操作简单，甘油消耗量少，成本低廉，可重复利用，不会污染显微镜的物镜，同时封片的效果显著，在一定程度提高了工作效率，提高样品计数的精确度。为了实现上述的目的，本专利技术采用以下技术方案：一种浮游植物、原生动物定量样品鉴定的封片方法，其步骤是：1、取80g的A4纸张，该纸张具有硬度大、薄、易于吸收甘油的特点。用剪刀将其裁剪为长26mm宽2mm的纸条，浸染甘油(化学名称：丙三醇，武汉力博瑞生物科技有限公司购买)，放置于载玻片上，重复2－3次，这样在重力的作用下，甘油会逐渐均匀的布满盖玻片，以后的纸片均可以用之前残留的甘油浸染。浸染时间不宜过长(一般为3-4min)，这样能延长纸片的使用寿命；浸染的量不宜过多(一般是1-3ml)，否则会污染盖玻片，影响显微镜下的观察效果。2、将水体中(湖泊、池塘等)浓缩(浓缩方法：样品静置24-48h后用浓缩装置将上清液抽去)后定量的浮游植物、原生动物样品加灭菌双蒸水稀释10-100倍，取0.1ml稀释液于0.1ml的计数框内(ZH7116型浮游生物计数框)，轻轻晃动载玻片，让样品平铺于计数框内。所述的稀释液顾名思义就是申请人检测的浓缩溶液加灭菌双蒸水降低浓度后得到的溶液。注意：是混合物，在日常的实际实验操作中，若浓缩样品浓度不高(计数框内每个方格内出现不同的浮游植物个数为2-3个)则不需要稀释，若浓度太高(超过上述数量)，则需要因此采用加灭菌的双蒸水稀释的方式来得到浓度较低的稀释液，从而更好的实验。综上所述：凡是通过增加溶剂来降低浓度的方法所得到的溶液都是稀释液。3、取盖玻片沿45度方向对样品进行盖片(图3)，该方法会逐渐排出计数框内的空气，起到最佳的封片效果。4、用第一步已经浸染好少量甘油(0.5-1.0ml)的纸片沿着盖玻片的四周进行密封。其中密封的性状如图1所示，用镊子调整纸片的位置做到完美对接，以保证最佳的密封效果。5、在室温(20－25℃，以下相同)条件下，对样品计数完成后(3－5h)，计数框内样品仍未见有气泡出现，已密封。表明该封片方法可显著提高封片效果，避免重复制片，提高了工作效率。本专利技术与现有技术相比，具有以下优点和效果：1)该方法的操作性简单，所需材料简单(A4纸张、甘油)，且能够重复利用，成本低廉。2)该方法用浸入甘油的纸张来封片，避免了甘油的浪费和对物镜的污染，延长了显微镜的使用寿命。3)该方法封片效果明显，避免样品中水分的蒸发，节约重复制片的时间，提高了工作效率，也提高了计数的准确性。为了验证此种方法的效果，申请人将不封片的样本和按照此种方法封片的样本进行了比较，比较计数框里出现气泡的时间。实验是在一间密封效果较好的实验室内进行，用空调控制温度，首先设定温度，待温度稳定后进行实验。实验结果如下：实验结果显示，在空调能够设置的温度范围内，此种封片方法比普通方法的时间延长5小时以上，极显著的提高了封片效果。附图说明图1为一种浮游植物、原生动物定量鉴定封片装置示意图。图2为一种封片用的纸片示意图。将纸片放在甘油里进行浸染，然后再放在载玻片上。图3为一种0.1ml计数框进行封片的演示图。其中：1－浮游生物计数框、2－盖玻片、3－纸条、4－载玻片。具体实施方式实施例1：下面结合附图对本专利技术进行具体说明。本专利技术提供了用于浮游植物、原生动物定量样品鉴定的一种新型封片方法，其完整结构如图1所示，图中0.1mlZH7116型浮游生物计数框1，盖玻片2，长26mm宽2mm的纸条3，载玻片4。纸条的长宽是根据计数框的大小而定，这样才能和盖玻片2相吻合，起到最佳的密封效果。一种浮游植物、原生动物定量样品鉴定的封片方法，其步骤是：1、用剪刀将80g的A4纸张裁剪为长26mm宽2mm的纸条，浸染甘油(1.5ml)，放置于载玻片4上，重复3次，这样在重力的作用下，甘油会逐渐均匀的布满盖玻片2，以后的纸条3均可以用之前残留的甘油浸染。浸染的甘油量不宜过多，过多会污染盖玻片4，影响显微镜下观察效果。浸染时间为3min，不宜过长，避免损耗纸条3的使用寿命；2、将黄颡鱼主养池塘中浓缩的浮游植物(以绿藻门、硅藻门和裸藻门为主)、原生动物(以纤毛虫为主)浓缩定量样品用灭菌的双蒸水稀释20倍，取0.1ml稀释液于0.1ml的计数框内，轻轻晃动载玻片4，让样品平铺于浮游生物计数框1内。3、取盖玻片2沿45度方向对样品进行盖片(图3)，该方法会逐渐排出浮游生物计数框1内的空气，起到最佳的封片效果。4、用第一步已经准备好的浸染少量甘油的纸条3沿着盖玻片2的四周进行密封。其中密封的性状如图1所示，用镊子调整纸片的位置做到完美对接，以保证最佳的密封效果。5、在室温条件下(23℃)，对样品计数完成后(4h)，计数框内样品仍未见有气泡出现，已密封，表明该封片方法可显著提高封片效果，避免重复制片，提高了工作效率。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种浮游植物、原生动物定量样品鉴定的封片方法，其步骤是：A、取A4纸张，用剪刀将其裁剪为长26mm宽2mm的纸条，浸染甘油，放置于载玻片上，重复2－3次，甘油均匀的布满盖玻片，纸片用之前残留的甘油浸染，浸染时间为3‑4min；B、将水体中浓缩后定量的浮游植物、原生动物样品加灭菌双蒸水稀释10‑100倍，取0.1ml稀释液于0.1ml的计数框内，晃动载玻片，让样品平铺于计数框内，所述的稀释液的浓缩溶液加灭菌双蒸水降低浓度后得到的溶液；C、取盖玻片沿45度方向对样品进行盖片，逐渐排出计数框内的空气；D、用第一步已经浸染好甘油0.5‑1.0ml的纸片沿着盖玻片的四周进行密封；E、在室温条件下，对样品计数完成后，计数框内样品未见有气泡出现，已密封。

【技术特征摘要】
1.一种浮游植物、原生动物定量样品鉴定的封片方法，其步骤是：A、取A4纸张，用剪刀将其裁剪为长26mm宽2mm的纸条，浸染甘油，放置于载玻片上，重复2－3次，甘油均匀的布满盖玻片，纸片用之前残留的甘油浸染，浸染时间为3-4min；B、将水体中浓缩后定量的浮游植物、原生动物样品加灭菌双蒸水稀释10-100倍，取0.1ml稀释液...

【专利技术属性】
技术研发人员：李学梅，朱永久，杨德国，许德高，张家波，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院长江水产研究所，
类型：发明
国别省市：湖北,42