埃博拉病毒感染血液中的特征miRNA与应用制造技术

本发明专利技术公开了埃博拉病毒感染血液中的特征miRNA与应用。本发明专利技术公开的与EBOV病毒感染相关的血液中miRNA为hsa‑miR‑151a‑5p、hsa‑miR‑744‑5p、hsa‑miR‑423‑5p、hsa‑miR‑331‑3p、hsa‑miR‑1306‑5p、hsa‑miR‑1285‑3p、hsa‑miR‑185‑5p、hsa‑miR‑550a‑5p、hsa‑miR‑3940‑3p、hsa‑miR‑574‑5p和hsa‑miR‑941，这11个miRNA可以作为生物分子标识，用于EBOV感染者的临床诊断。

Characteristics, miRNA and applications of Ebola virus infection in the blood

The invention discloses characteristic miRNA and application of Ebola virus infecting blood. The invention discloses a EBOV virus infection and miRNA blood HSA miR 151a 5p, HSA 744 5p, miR HSA miR 423 5p, HSA 331, 3P miR HSA miR 1306 5p, HSA 1285, 3P miR HSA miR 185 5p, HSA miR 550A 5p, HSA 3940 3P, miR HSA miR 574 5p and HSA miR 941, the 11 miRNA can be used as biomarkers for clinical diagnosis, EBOV infection.

【技术实现步骤摘要】
埃博拉病毒感染血液中的特征miRNA与应用
本专利技术涉及生物医学领域中，埃博拉病毒感染血液中的特征miRNA与应用。
技术介绍
埃博拉病毒病是由纤丝病毒科(filoviridae)的埃博拉病毒(Ebolavirus，EBOV)所引起的一种急性出血性传染病。病死率很高，可达50％～90％。埃博拉病毒基因组为单股负链RNA，约长19kb，能编码核蛋白(NP)及包膜蛋白(VP35、VP40、VP30、VP24)、糖蛋白(GP)和RNA聚合酶等7个结构蛋白，其中GP基因对EBOV复制有独特的编码和转录功能。病毒在感染细胞的胞质中复制、装配，以芽生方式释放。埃博拉病毒主要包括扎伊尔型(EBOV-Z)，苏丹型(EBOV-S)，科特迪瓦型(EBOV-C)及雷斯顿型(EBOV-R)等，不同亚型的特性不同，其中扎伊尔型毒力最强，苏丹型次之，两者对人类和非人灵长类的致死率很高。雷斯顿型和科特迪瓦型对人的毒力较低，表现为亚临床感染，但对非人灵长类具有致命性。EBOV是一种人兽共患病毒，其传播途径尚不明确，通常由与人类密切接触到感染动物的血液、分泌物、器官或其他体液造成感染，而直接接触感染者的体液等均可造成人际传播。各种非人灵长类动物和人类普遍易感。因此，感染者家属、医务人员、检验人员、在埃博拉病毒流行现场的工作人员，感染动物接触者等均是高危人群。EBOV是一种泛嗜性的病毒，可侵犯各系统器官，尤以肝、脾损害为重。埃博拉病毒病的发生与机体的免疫应答水平有关。单核吞噬细胞系统尤其是吞噬细胞是首先被病毒攻击的靶细胞，随后成纤维细胞和内皮细胞均被感染，血管通透性增加，纤维蛋白沉着。感染后2天病毒首先在肺中检出，4天后在肝、脾等组织中检出，6天后全身组织均可检出。目前许多关于病毒致病性的研究都是在动物模型和体外实验中进行的，而关于人体病毒感染的相关研究少。病毒感染机体的每个阶段，从病毒进入细胞、局部复制、传播(病毒血症)、在靶器官内繁殖、患者康复(但仍带毒)或死亡，均存在两种因素的相互制约：病毒感染和宿主机体应答与防御。研究EBOV对人类的致病机理和免疫逃逸机制，进而根据这些关键步骤，确定新型靶标位点，研发治疗药物，对于埃博拉出血热的综合防控具有重要意义。同时，研究人体感染EBOV的反应特征，发现感染和预后特征性的分子标识，对于建立快速诊断方法、建立及时有效干预方案可以提供理论依据。
技术实现思路
本专利技术所要结决的技术问题是如何诊断EBOV感染。为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了下述1)或2)的应用：1)检测R1含量的系统在制备诊断或辅助诊断EBOV感染产品中的应用；所述R1为hsa-miR-151a-5p、hsa-miR-744-5p、hsa-miR-423-5p、hsa-miR-331-3p、hsa-miR-1306-5p、hsa-miR-1285-3p、hsa-miR-185-5p、hsa-miR-550a-5p、hsa-miR-3940-3p、hsa-miR-574-5p和/或hsa-miR-941；2)检测所述R1含量的系统在诊断或辅助诊断EBOV感染中的应用。上述应用中，所述检测R1含量的系统可为利用现有技术中的方法检测所述R1含量所需的试剂和/或仪器，如利用高通量测序检测所述R1含量所需的试剂和/或仪器，或利用定量PCR检测所述R1含量所需的试剂和/或仪器，或利用northern杂交技术检测所述R1含量所需的试剂和/或仪器，或利用基因芯片检测所述R1含量所需的试剂和/或仪器。上述应用中，所述高通量测序可利用Illumina测序平台进行。上述应用中，所述检测R1含量的系统还可包括数据处理系统，所述数据处理系统用来分析现有技术中的方法直接得到的结果，确定所述R1的含量。所述数据处理系统可为软件和/或模块。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了下述N1)或N2)的应用：N1)以所述R1作为EBOV感染标志物的诊断或辅助诊断EBOV感染方法中所用的系统在下述a1)或a2)中的应用：a1)制备诊断或辅助诊断EBOV感染产品；a2)诊断或辅助诊断EBOV感染；N2)以所述R1作为EBOV感染标志物在上述a1)或a2)中的应用。所述以所述R1作为EBOV感染标志物的诊断或辅助诊断EBOV感染方法中所用的系统可为上文所述检测R1含量的系统。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了诊断或辅助诊断EBOV感染产品。本专利技术所提供的诊断或辅助诊断EBOV感染产品，为所述检测R1含量的系统。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了非诊断目的的EBOV病毒载量相关分子特征谱的构建方法。本专利技术所提供的非诊断目的的EBOV病毒载量相关分子特征谱的构建方法包括：分别对EBOV感染组和非EBOV感染组血液中的RNA进行定量分析，根据分析结果获得EBOV病毒载量相关分子特征谱；所述EBOV病毒载量相关分子特征谱为所述R1。上述方法中，所述对EBOV感染组和非EBOV感染组血液中的RNA进行定量分析具体还可包括：纯化EBOV感染组和非EBOV感染组血液中的RNA，利用Illumina测序平台检测RNA的含量。所述纯化EBOV感染组和非EBOV感染组血液中的RNA可利用15％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术(PAGE)进行。纯化得到的RNA可为15-30bp的RNA。所述利用Illumina测序平台检测RNA的含量可包括：将纯化后的RNA连接3’和5’端接头后反转录为cDNA；然后进行PCR扩增，构建文库；利用Illumina测序平台对所述文库进行高通量测序，检测待测样本中RNA的含量。所述反转录可利用反转录酶进行，如Invitrogen的SuperScriptII反转录酶。所述扩增的条件可为：98℃预变性30s，98℃变性10s，60℃退火30s，72℃延伸15s，14个循环，72℃延伸8min。上述方法中，所述EBOV感染组可包括至少一个EBOV感染者。所述非EBOV感染组可包括至少一个非EBOV感染者。本专利技术中，所述诊断或辅助诊断EBOV感染产品可为诊断或辅助诊断EBOV感染的医药和/或卫生器械，如试剂、试纸、材料或仪器。本专利技术中，所述R1含量可为血液中所述R1的含量。在实际应用中，可通过比较所述R1的11个miRNA在待测对象与非EBOV感染者血液中的表达水平来判断待测对象是否为EBOV感染者。具体的判断标准可为：如待测对象的hsa-miR-1285-3p、hsa-miR-1306-5p、hsa-miR-151a-5p、hsa-miR-185-5p、hsa-miR-331-3p、hsa-miR-3940-3p、hsa-miR-423-5p、hsa-miR-550a-5p、hsa-miR-574-5p、hsa-miR-744-5p和hsa-miR-941这11个miRNA中有至少一个的表达水平低于非EBOV感染者相应miRNA表达水平的1/3，所述待测对象为候选为EBOV感染者，如所述待测对象的hsa-miR-1285-3p、hsa-miR-1306-5p、hsa-miR-151a-5p、hsa-miR-185-5p、hsa-miR-331-3p、hsa-miR-3940-3p、hsa-miR-423-5p、hsa-miR-550a-5p、hsa-miR-574-5p本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测R1含量的系统在制备诊断或辅助诊断EBOV感染产品中的应用；所述R1为hsa‑miR‑151a‑5p、hsa‑miR‑744‑5p、hsa‑miR‑423‑5p、hsa‑miR‑331‑3p、hsa‑miR‑1306‑5p、hsa‑miR‑1285‑3p、hsa‑miR‑185‑5p、hsa‑miR‑550a‑5p、hsa‑miR‑3940‑3p、hsa‑miR‑574‑5p和/或hsa‑miR‑941。

【技术特征摘要】
1.检测R1含量的系统在制备诊断或辅助诊断EBOV感染产品中的应用；所述R1为hsa-miR-151a-5p、hsa-miR-744-5p、hsa-miR-423-5p、hsa-miR-331-3p、hsa-miR-1306-5p、hsa-miR-1285-3p、hsa-miR-185-5p、hsa-miR-550a-5p、hsa-miR-3940-3p、hsa-miR-574-5p和/或hsa-miR-941。2.检测R1含量的系统在诊断或辅助诊断EBOV感染中的应用；所述R1为hsa-miR-151a-5p、hsa-miR-744-5p、hsa-miR-423-5p、hsa-miR-331-3p、hsa-miR-1306-5p、hsa-miR-1285-3p、hsa-miR-185-5p、hsa-miR-550a-5p、hsa-miR-3940-3p、hsa-miR-574-5p和/或hsa-miR-941。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述系统为检测所述R1含量所需的试剂和/或仪器。4.下述N1)或N2)的应用：N1)以R1作为EBOV感染标志物的诊断或辅助诊断EBOV感染方法中所用的系统在下述a1)或a2)中的应用：a1)制备诊断或辅助诊断EBOV感染产品；a2)诊断或辅助诊断EBOV感染；所述R1为hsa-miR-151a-5p、hsa-miR-744-5p、hsa-miR-423-5p、hsa-miR-331-3p、hsa-miR-1306-5p、hsa-mi...

【专利技术属性】
技术研发人员：王慧，曹务春，李涛，刘雄，江佳富，户义，邓永强，刘坤，宁年智，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11