The invention relates to a synthetic method of artificial antigen of Paclobutrazol, belonging to the technical field of biochemistry. In the invention, Paclobutrazol and 4 bromo butyric acid benzyl ester, potassium hydroxide, lithium hydroxide products were obtained with carboxyl groups as hapten, wasconjugated with two imine carbon coupling method, determination of conjugates by UV method coupling ratio. The artificial antigen of Paclobutrazol is successfully synthesized, and the synthesis steps are simple and effective, and can be fully used in immunoassay, providing the necessary artificial antigen for future research.
【技术实现步骤摘要】
一种多效唑人工抗原的合成方法
本专利技术涉及一种多效唑人工抗原的合成方法,属于生物化工
技术介绍
多效唑作为一种抑制类的植物生长调节剂,具有延缓植物生长、抑制茎杆伸长、缩短节间、促进花芽分化、增加植物抗逆性能、提高作物产量等功能,广泛应用于水稻、麦类、花生、果树、烟草、油菜、大豆等农作物生产。多效唑在土壤中易被吸收,残留时间长,可能对非目标物产生危害,许多欧盟国家已经禁用,很多国家对多效唑也作出了严格限量,我国在农产品上对多效唑的最严限量≤0.2mg/kg。因此,建立快速有效的检测多效唑含量的方法具有重要意义及市场价值。酶联免疫法(ELISA)是一种极为高效、敏感、快速的检测方法,然而得到高亲和力和高特异性的单克隆单体是免疫学检测的前提,人工抗原的合成是其中重要的一步。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种多效唑人工抗原的合成方法,所制备的产品用于多效唑免疫分析方法研究,为今后人们的研究提供了必需的人工抗原。本专利技术的技术方案,一种多效唑人工抗原的合成方法,其由多效唑与4-溴丁酸苄酯、氢氧化钾、氢氧化锂反应得到具有羧基的产物,即半抗原PBBA,用碳二亚胺法将半抗原PBBA与载体蛋白偶联,即得到多效唑人工抗原;步骤为:(1)半抗原PBBA的合成:合成路线如下:称取化合物Ⅰ多效唑5g(17.06mmol)和4-溴丁酸苄酯13.16g(51.19mmol)溶解于二甲亚砜50mL中,加入氢氧化钾1.05g(18.77mmol),在90℃下搅拌过夜,然后加水30mL,用乙酸乙酯萃取。有机层用盐水洗涤,干燥并浓缩,得到粗产物。粗品通过制备型-HPLC纯化, ...
【技术保护点】
一种多效唑人工抗原的合成方法,其特征在于其由多效唑与4‑溴丁酸苄酯、氢氧化钾、氢氧化锂反应得到具有羧基的产物,即半抗原PBBA,用碳二亚胺法将半抗原PBBA与载体蛋白偶联,即得到多效唑人工抗原;步骤为:(1)半抗原PBBA的合成:合成路线如下:
【技术特征摘要】
1.一种多效唑人工抗原的合成方法,其特征在于其由多效唑与4-溴丁酸苄酯、氢氧化钾、氢氧化锂反应得到具有羧基的产物,即半抗原PBBA,用碳二亚胺法将半抗原PBBA与载体蛋白偶联,即得到多效唑人工抗原;步骤为:(1)半抗原PBBA的合成:合成路线如下:称取化合物Ⅰ多效唑5g即17.06mmol和4-溴丁酸苄酯13.16g即51.19mmol溶解于二甲亚砜50mL中,加入氢氧化钾1.05g即18.77mmol,在90℃下搅拌过夜,然后加水30mL,用乙酸乙酯萃取;有机层用盐水洗涤,干燥并浓缩,得到粗产物;粗品通过制备型-HPLC纯化,得到化合物Ⅱ800mg;称取化合物Ⅱ600mg即1.25mmol溶解在四氢呋喃3mL和水2mL混合溶液中,加入氢氧化锂131.5mg即3.13mmol,并在室温下搅拌2h;反应溶液用乙酸乙酯萃取,将有机层用盐水洗涤,干燥并浓缩,得到粗产物,通过制备型HPLC纯化粗产物,得到半抗原PBBA200mg;(2)完全抗原的制备:步骤(1)制备的半抗原PBBA,与KLH偶联得到偶联物完全抗原PBBA-KLH;或与BSA偶联得到偶联物完全抗原PBBA-BSA。2.如权利要求1所述多效唑人工抗原的合成方法,其特征在于:步骤(2)所述完全抗原PBBA-KLH制备方法如下:a、称取步骤(1)制备的PBBA4.3mg,二环己基碳二亚胺3mg,N-羟基琥珀酰亚胺2mg,用300μL无水N,N-二甲基甲酰胺溶解,称...
【专利技术属性】
技术研发人员:吴晓玲,姚蕾珺,胥传来,匡华,徐丽广,马伟,刘丽强,宋珊珊,郑乾坤,
申请(专利权)人:江南大学,得利斯集团有限公司,
类型:发明
国别省市:江苏,32
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。