本发明专利技术涉及一种兴安升麻地上部分总苷及其在肿瘤治疗和肿瘤预防抗氧化损伤中的应用，所说总苷是将升麻地上部分药材粉碎过筛后，用８０％乙醇加热回流提取，过滤，减压浓缩，加入吸附剂（硅胶或硅藻土）进行柱层析，先以工业己烷洗去油脂，然后用乙酸乙酯洗脱，得到的乙酸乙酯部分经减压浓缩得总苷，工艺简单，收率提高，成本降低，极有利于工业化生产，药效学实验证明，所说总苷可望用于制备肿瘤化学预防和治疗药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及植物升麻地上部分总苷的提取制备及其在肿瘤的化学预防和治疗中的应用。
技术介绍
升麻是毛莨科升麻属(Cimicifugeae S.I.)植物，包括升麻或西升麻(Cimicifuga foetida)、北升麻或兴安升麻(Cimicifuga dahurica)以及总状升麻(Cimicifuga.racemosa)。兴安升麻是我国特有品种，与总状升麻(又称欧洲升麻)同属不同种。升麻族植物多以地下部分入药。据记载，升麻药材具有清热解毒、升举阳气、发表透疹的功能，主治风热头痛、齿痛、咽喉肿痛、子宫脱垂等症。兴安升麻(C.dahurica)的根茎作为常用中药已载入中国药典(2000版)，而地上部分通常作为废弃物。近一两年才开始对地上部分化学成分进行研究，结果表明，三萜及其皂甙是其主要成分。然而地上部分的药理研究几乎为一空白。总状升麻和国产升麻(C.foetida)的总三萜及其皂甙可提高去势大鼠血清雌二醇水平，而使黄体生成激素(LH)浓度降低，并能抑制由于内分泌紊乱、雌激素缺乏而引起的骨质疏松和更年期综合症。升麻中的阿魏酸、异阿魏酸等具有抗炎镇痛的作用，咖啡酸及其衍生物具有抗氧化活性。同时服用总状升麻根茎的40％异丙醇提取物，可以增强雌激素依赖性肿瘤治疗中的抗雌激素作用，在体外可增强他莫西芬对人乳腺癌(MCF-7)细胞的增殖抑制作用。另外，总状升麻提取物还适用于治疗良性及恶性前列腺肥大。含有升麻，黄连和Zanthoxylin的提取物可以用作口腔癌的替代疗法。从总状升麻根茎中提取的化合物升麻醇3-O-a-L-吡喃阿拉伯糖(cimigenol 3-O-a-L-arabinopyranoside)和23-O-乙酰升麻醇-3-O-a-L-吡喃阿拉伯糖(23-O-acetylshengmanol 3-O-a-L-arabinopyranoside)对人口腔鳞状细胞癌(HSC-2)有抑制作用，半数抑制率分别为30um和18um。提取自兴安升麻地上部分的23-氧-乙酰升麻醇-3-氧-β-D-木糖苷(23-O-acetylcimigenol-3-O-β-D-xylopyranoside)，24-氧-乙酰升麻醇-3-氧-β-D-木糖苷(24-O-acetylcimigenol-3-O-β-D-xylopyranoside)，25-氧-乙酰升麻醇-3-氧-β-D-木糖苷(25-O-acetylcimigenol-3-O-β-D-xylopyranoside)在体外具有抗肿瘤作用，能够抑制人肝细胞癌(HepG2)，人肝细胞癌耐药株(HepG2-R)，人急性早幼粒白血病细胞(HL-60)，及原代培养正常小鼠肝细胞，诱导HepG2细胞和HL-60细胞凋亡和周期阻滞，以及抗自由基氧化作用。本专利技术的目的是提取制备兴安升麻地上部分总苷并在研究其细胞毒性、对细胞形态学、细胞周期、自由基氧化和DNA损伤的影响的基础上，提供其在肿瘤临床预防治疗中的实际应用。
技术实现思路
本专利技术所说的兴安升麻地上部分总苷提取自兴安升麻(cimicifugadahurica)地上部分。原材料于1999年9月采自内蒙古自治区喀喇泌旗茅荆坝，经鉴定为升麻属植物兴安升麻(Cimicifuga dahurica Thurez Maxim)的地上部分。所说总苷的提取制备工艺是将原材料粉碎过筛后，进行化学成分预试验。研究结果表明，兴安升麻地上部分主要含有三萜皂甙类成分。总皂苷的提取方法确定如下将升麻地上部分药材粉碎过筛后，以10倍量的80％乙醇加热回流提取3次，每次1小时。提取完毕，过滤，滤液减压浓缩至波密度为1.12时加入吸附剂(硅胶或硅藻土)进行柱层析。先以工业己烷洗去油脂，然后用乙酸乙酯洗脱，得到的乙酸乙酯部分经减压浓缩得总苷，收率为6-7％。由总苷分离的30个三萜类化合物在总苷中所占比例编号 化合物 在总苷中所占比例(％)1升麻内酯A 1.02升麻内酯 1.43兴安升麻苷C2.34兴安升麻苷D1.75兴安升麻苷E1.76兴安升麻苷F1.77兴安升麻苷G5.0 8 兴安升麻苷H1.29 兴安升麻苷I1.610兴安升麻苷J1.71123-O-乙酰升麻醇木糖苷 1.71225-O-乙酰-7，8-二脱氢升麻 1.2醇木糖苷1325-O-乙酰升麻醇木糖苷 6.614升麻苷H-2 1.01525-脱水升麻醇木糖苷1.01624-epi-7，8-二脱氢升麻醇木 1.2糖苷17升麻醇木糖苷 5.8187，8-二脱氢升麻醇木糖苷1.21925-O-甲基升麻醇木糖苷 1.72015a-羟基升麻苷H-2 1.0217β-羟基升麻醇木糖苷 2.02212β-羟基升麻醇木糖苷 1.02324-O-乙酰-7，8-二脱氢升麻 1.2醇木糖苷2424-O-乙酰升麻醇木糖苷 2.02525-O-甲基-24-O-乙酰升麻醇 2.0木糖苷2612β-O-乙酰小升麻苷A 8.42712β-O-乙酰小升麻苷B 4.228小升麻苷A 1.529小升麻苷B 1.830升麻醇 1.7将兴安升麻地上部分总苷用DMSO溶解配成2.50g/ml的浓缩液，分别进行细胞毒性试验、细胞形态学试验、细胞周期试验、DPPH自由基清除试验(抗氧化)、羟自由基清除试验、羟自由基引起的DNA损伤试验、环氧酶2蛋白表达试验。细胞毒性试验结果表明，兴安升麻地上部分总苷对血液瘤、实体瘤均有较好的抑瘤作用。细胞毒强度与已获得专利申请号的23-氧-乙酰升麻醇-3-氧-β-D-木糖苷，24-氧-乙酰升麻醇-3-氧-β-D-木糖苷，25-氧-乙酰升麻醇-3-氧-β-D-木糖苷相当。对小鼠正常肝细胞的IC50值均大于其它肿瘤细胞株，说明兴安升麻地上部分总苷在抑制肿瘤细胞的同时对正常细胞的毒性较低。细胞形态学试验和细胞周期试验结果表明，兴安升麻地上部分总苷主要通过诱导肿瘤细胞凋亡和G0/G1细胞周期阻滞来起作用的。兴安升麻地上部分总苷有很好的清除自由基的作用，并可有效抑制羟自由基对DNA造成的损伤。因此，本专利技术中的兴安升麻地上部分总苷可望用作临床肿瘤预防和治疗药物。专利技术效果本专利技术涉及的兴安升麻地上部分总苷在体外对血液瘤(HL-60)和实体瘤(HepG2，SF-268，MCF-7)均有良好的杀伤作用，而对正常小鼠肝细胞损伤作用相对微弱；细胞形态学和细胞周期试验证明，兴安升麻地上部分总苷主要是通过诱导细胞凋亡和G0/G1阻滞来起作用，而环氧酶-2是诱导细胞凋亡和G0/G1阻滞的机制之一；兴安升麻地上部分总苷有很好的清除自由基以及DNA损伤保护作用，可以预防自由基氧化对生物大分子的损伤及其可能导致的癌变。兴安升麻地上部分总苷的细胞毒性与从中提取的三个单体化合物的作用强度相当，但清除自由基和DNA损伤保护作用强于三个单体化合物，而且与三个单体化合物相比，升麻总苷的提取工艺简单，收率提高(约达6-7％)，成本显著降低(较单体化合物成本降低10倍以上)，更有利于其在制备肿瘤预防和治疗药物中的实际应用。下面所列实施例有助于本领域技术人员更好的理解本专利技术，但不以任何方式限制本专利技术。实施例1细胞毒性试验1、材料人肝癌细胞株(HepG2)，人乳腺癌细胞株(MCF-7)，人神经胶质瘤细胞株(SF-268)，人急性本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种升麻总苷，其特征在于所说总苷是由兴安升麻地上部分提取的，主要含有三萜皂甙类成分。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：肖培根，田泽，斯建勇，陈迪华，潘瑞乐，
申请(专利权)人：肖培根，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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