一种筛选耐盐碱性植物材料的双向电泳凝胶考马斯亮蓝染色和脱色方法技术

本发明专利技术公开了一种筛选耐盐碱性植物材料的双向电泳凝胶考马斯亮蓝染色和脱色方法，所述方法包括如下步骤：步骤一、配制含有考马斯亮蓝R250、甲醇、乙酸、蒸馏水定容的染色液，混匀后静置0.5～1.5小时，过滤后室温保存备用。步骤二、配制含有乙醇、乙酸、蒸馏水定容的脱色液。步骤三、双向SDS凝胶蒸馏水冲洗2～3次，放入染色盒中，加入染色液，利用保鲜膜封口，室温条件下，摇床上染色2～3小时。步骤四、脱色：倒出染色液，蒸馏水冲洗凝胶2～4次；加入脱色液，脱色液用量为染色液用量的1～2倍，室温条件下，摇床上脱色2～3小时，蒸馏水冲洗2～4次。本发明专利技术在常规技术方法上进一步优化，省略掉前固定等程序，染色和脱色速度快、效果好。

A bidirectional gel electrophoresis screening of salt tolerant alkaline plant material with Coomassie brilliant blue staining and destaining method

The invention discloses a two-dimensional electrophoresis gel screening salt tolerant plant material of Coomassie brilliant blue staining and decolorization method, the method comprises the following steps: step one, preparation containing Coomassie brilliant blue R250 staining solution, methanol, acetic acid, distilled water volume, mixing after standing for 0.5 to 1.5 hours, filtering after room temperature preservation reserve. Step two, the preparation of containing ethanol, acetic acid, distilled water of the volume of the liquid. Step three, two way SDS gel distilled water rinse for 2 ~ 3 times, into the dyeing box, add dyeing liquid, use of plastic film sealing, room temperature conditions, the table dyeing for 2 ~ 3 hours. Step four: pour and decolorization of dyeing liquid distilled water gel 2 ~ 4 times; adding liquid liquid dosage for decolorization, decolorization of dyeing liquid dosage 1 ~ 2 times, under the condition of room temperature, 2 ~ 3 hours on the decolorization table, distilled water 2 to 4 times. The invention is further optimized on the conventional technical method, omits the procedures of pre fixation and the like, and has the advantages of high speed and high efficiency.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学
，涉及一种利用考马斯亮蓝R250快速染色双向电泳凝胶以及脱色的方法。
技术介绍
由于基因的功能主要通过其编码的蛋白质实现，利用蛋白质组学技术诠释基因功能被认为是后基因组研究中的最主要部分。目前，经典的蛋白质组学研究方法是制备蛋白样品，进行双向电泳，然后通过染色获得清晰的蛋白质图谱，再通过切较、酶切、质谱鉴定等技术，获得目标蛋白质。在此过程中，根据目的蛋白的性质，可利用不同的SDS凝胶适用的检测方法来检测双向凝胶，为了尽可能减少蛋白损失，提高检测的灵敏度，染色方法一直在被不断探索，综合考虑灵敏度、线性范围、方便程度、成本以及成像设备类型等条件基础上进行选择。目前常用的双向电泳染色方法为考马斯亮蓝染色、银染以及荧光染色。银染的灵敏度高，但容易产生很高的背景，造成蛋白分辨损失，且费时费力、费用高和需要更多地接触有毒化学物质。荧光染色虽然具有高灵敏度、背景低、与质谱匹配，但需要特别的扫描仪和荧光染料，所以存在染色成本较高的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种筛选耐盐碱性植物材料的双向电泳凝胶考马斯亮蓝染色和脱色方法。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：一种筛选耐盐碱性植物材料的双向电泳凝胶考马斯亮蓝染色和脱色方法，包括如下步骤：步骤一、染色液的配制：配制含有0.1～0.15wt％考马斯亮蓝R250、40～50vol％甲醇、10～20vol％乙酸、蒸馏水定容的染色液，混匀后静置0.5～1.5小时，过滤后室温保存备用。根据凝胶大小，调整染色液用量。步骤二、脱色液的配制：配制含有20～30vol％乙醇、10～15vol％乙酸、蒸馏水定容的脱色液。步骤三、染色：双向SDS凝胶蒸馏水冲洗2～3次，放入染色盒中，加入染色液，染色液没过凝胶即可；利用保鲜膜封口，室温条件下，摇床上染色2～3小时。步骤四、脱色：倒出染色液，蒸馏水冲洗凝胶3～4次；加入脱色液，脱色液用量为染色液用量的1～2倍，室温条件下，摇床上脱色2～3小时，蒸馏水冲洗3～4次。本专利技术具有如下优点：1、该方法试用范围广，对于多数被子植物如盐芥、拟南芥、麻类作物以及孢子植物如卷柏等都具有较好的效果。2、本专利技术在常规技术方法上进一步优化，省略掉前固定等程序，染色和脱色速度快、效果好。3、此方法操作更为简单易行、成本低、凝胶背景清晰，具有较高的灵敏度。附图说明图1为染色效果图。具体实施方式下面结合附图对本专利技术的技术方案作进一步的说明，但并不局限于此，凡是对本专利技术技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本专利技术技术方案的精神和范围，均应涵盖在本专利技术的保护范围中。具体实施方式一：本实施方式提供了一种筛选耐盐碱性植物材料的双向电泳凝胶考马斯亮蓝染色和脱色方法，具体实施步骤如下：步骤一、染色液的配制：配制含有0.1～0.15wt％考马斯亮蓝R250、40～50vol％甲醇、10～20vol％乙酸、蒸馏水定容的染色液，混匀后静置0.5～1.5小时，过滤后室温保存备用。根据凝胶大小，可调整染色液用量。步骤二、脱色液的配制：配制含有20～30vol％乙醇、10～15vol％乙酸、蒸馏水定容的脱色液。步骤三、染色：双向SDS凝胶蒸馏水冲洗2～3次，轻轻放入染色盒中，缓缓加入染色液，染色液没过凝胶即可；利用保鲜膜封口防止溶液挥发，室温条件下，摇床上缓慢摇动染色2～3小时。步骤四、脱色：倒出染色液，蒸馏水冲洗凝胶3～4次；缓缓加入脱色液，脱色液用量为染色液用量的1～2倍即可，室温条件下，摇床上缓慢摇动脱色2～3小时，蒸馏水冲洗3～4次。具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是，步骤一替换为：配制含有0.1～0.15wt％考马斯亮蓝R250、30～40vol％乙醇、10～15vol％乙酸、蒸馏水定容的染色液，混匀后静置0.5～1.5小时，过滤后室温保存备用。具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一不同的是，步骤四替换为：倒出染色液，蒸馏水冲洗凝胶3～4次，缓缓加入脱色液，脱色液用量为染色液用量的1～2倍即可，室温条件下，摇床上缓慢摇动脱色1～2小时。蒸馏水冲洗3～4次后，根据凝胶脱色情况，加入含有5～8vol％乙醇、8～10vol％乙酸的脱色液，进行第二次脱色，摇床上缓慢摇动脱色1～2小时。具体实施方式四：本实施方式提供了一种筛选耐盐碱性植物材料的双向电泳凝胶考马斯亮蓝染色和脱色方法，具体实施步骤如下：步骤一、染色液的配制：配制含有0.125wt％考马斯亮蓝R250、45vol％甲醇、15vol％乙酸、蒸馏水定容的染色液，混匀后静置1小时，过滤后室温保存备用。步骤二、脱色液的配制：配制含有25vol％乙醇、12.5vol％乙酸、蒸馏水定容的脱色液。步骤三、染色：双向SDS凝胶蒸馏水冲洗3次，轻轻放入染色盒中，缓缓加入染色液，染色液没过凝胶即可；利用保鲜膜封口防止溶液挥发，室温条件下，摇床上缓慢摇动染色约3小时。步骤四、脱色：倒出染色液，蒸馏水冲洗凝胶3次；缓缓加入脱色液，脱色液量为染色液用量的1～2倍即可，室温下摇床上缓慢摇动脱色2.5小时，蒸馏水冲洗3次。使用本实施方式的方法检测卷柏植物时，染色效果如图1所示。具体实施方式五：本实施方式提供了一种筛选耐盐碱性植物材料的双向电泳凝胶考马斯亮蓝染色和脱色方法，具体实施步骤如下：步骤一、染色液的配制：配制含有0.1wt％考马斯亮蓝R250、40vol％甲醇、20vol％乙酸、蒸馏水定容的染色液，混匀后静置1.5小时，过滤后室温保存备用。步骤二、脱色液的配制：配制含有30vol％乙醇、10vol％乙酸、蒸馏水定容的脱色液。步骤三、染色：双向SDS凝胶蒸馏水冲洗2～3次，轻轻放入染色盒中，缓缓加入染色液，染色液没过凝胶即可；利用保鲜膜封口防止溶液挥发，室温条件下，摇床上缓慢摇动染色3小时。步骤四、脱色：倒出染色液，蒸馏水冲洗凝胶4次，缓缓加入脱色液，脱色液用量为染色液用量的1～2倍即可，室温条件下，摇床上缓慢摇动脱色2小时，蒸馏水冲洗3～4次后，根据凝胶蛋白斑点染色和背景脱色情况，加入含有6vol％乙醇、9vol％乙酸的脱色液，进行第二次脱色，摇床上缓慢摇动脱色1.5小时。具体实施方式六：本实施方式提供了一种筛选耐盐碱性植物材料的双向电泳凝胶考马斯亮蓝染色和脱色方法，具体实施步骤如下：步骤一、染色液的配制：配制含有0.15wt％考马斯亮蓝R250、30vol％乙醇、10vol％乙酸、蒸馏水定容的染色液，混匀后静置0.5小时，过滤后室温保存备用。步骤二、脱色液的配制：配制含有20vol％乙醇、15vol％乙酸、蒸馏水定容的脱色液。步骤三、染色：双向SDS凝胶蒸馏水冲洗3次，轻轻放入染色盒中，缓缓加入染色液，染色液没过凝胶即可；利用保鲜膜封口防止溶液挥发，室温条件下，摇床上缓慢摇动染色2小时。步骤四、脱色：倒出染色液，蒸馏水冲洗凝胶3～4次；缓缓加入脱色液，脱色液用量为染色液用量的1～2倍即可，室温条件下，摇床上缓慢摇动脱色3小时，蒸馏水冲洗3～4次。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种筛选耐盐碱性植物材料的双向电泳凝胶考马斯亮蓝染色和脱色方法，其特征在于所述筛选耐盐碱性植物材料的双向电泳凝胶考马斯亮蓝染色和脱色方法步骤如下：步骤一、染色液的配制：配制含有0.1～0.15wt％考马斯亮蓝R250、40～50vol％甲醇、10～20vol％乙酸、蒸馏水定容的染色液，混匀后静置0.5～1.5小时，过滤后室温保存备用；步骤二、脱色液的配制：配制含有20～30vol％乙醇、10～15vol％乙酸、蒸馏水定容的脱色液；步骤三、染色：双向SDS凝胶蒸馏水冲洗2～3次，放入染色盒中，加入染色液，染色液没过凝胶即可；利用保鲜膜封口，室温条件下，摇床上染色2～3小时；步骤四、脱色：倒出染色液，蒸馏水冲洗凝胶2～4次；加入脱色液，脱色液用量为染色液用量的1～2倍，室温条件下，摇床上脱色2～3小时，蒸馏水冲洗2～4次。

【技术特征摘要】
1.一种筛选耐盐碱性植物材料的双向电泳凝胶考马斯亮蓝染色和脱色方法，其特征在于所述筛选耐盐碱性植物材料的双向电泳凝胶考马斯亮蓝染色和脱色方法步骤如下：步骤一、染色液的配制：配制含有0.1～0.15wt％考马斯亮蓝R250、40～50vol％甲醇、10～20vol％乙酸、蒸馏水定容的染色液，混匀后静置0.5～1.5小时，过滤后室温保存备用；步骤二、脱色液的配制：配制含有20～30vol％乙醇、10～15vol％乙酸、蒸馏水定容的脱色液；步骤三、染色：双向SDS凝胶蒸馏水冲洗2～3次，放入染色盒中，加入染色液，染色液没过凝胶即可；利用保鲜膜封口，室温条件下，摇床上染色2～3小时；步骤四、脱色：倒出染色液，蒸馏水冲洗凝胶2～4次；加入脱色液，脱色液用量为染色液用量的1～2倍，室温条件下，摇床上脱色2～3小时，蒸馏水冲洗2～4次。2.根据权利要求1所述的筛选耐盐碱...

【专利技术属性】
技术研发人员：王晓楠，孙宇峰，曹焜，韩喜才，夏尊民，姜颖，宋鑫玲，曹鸿勋，聂迪，
申请(专利权)人：黑龙江省科学院大庆分院，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23