重组高密度脂蛋白在治疗妊娠期高血压疾病中的应用制造技术

本发明专利技术涉及重组高密度脂蛋白在治疗妊娠期高血压疾病中的应用，特别是涉及重组高密度脂蛋白的制备，及其在生产用于预防和治疗妊娠期高血压疾病的药物中的应用。重组高密度脂蛋白的主要特征是蛋白组分包括使用甲基营养酵母生产的重组人载脂蛋白A‑I、重组人载脂蛋白E两种载脂蛋白；并以维生素E代替天然高密度脂蛋白中的胆固醇酯，作为重组高密度脂蛋白的核心部分，使其具有更强的抗氧化活性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及重组高密度脂蛋白在治疗妊娠期高血压疾病中的应用，特别是涉及重组高密度脂蛋白的制备，及其在生产用于预防和治疗妊娠期高血压疾病的药物中的应用。重组高密度脂蛋白的主要特征是蛋白组分包括使用甲基营养酵母生产的重组人载脂蛋白A-I、重组人载脂蛋白E两种载脂蛋白；并以维生素E代替天然高密度脂蛋白中的胆固醇酯，作为重组高密度脂蛋白的核心部分，使其具有更强的抗氧化活性。
技术介绍
妊娠期高血压疾病(HDCP)是最常见的妊娠期并发症，严重威胁母婴的健康，是导致孕产妇死亡、围生儿发病及死亡的主要原因之一(梁娟,李维敏,王艳萍,周光萱,吴艳乔,朱军,代礼,缪蕾.1996～2000年全国孕产妇死亡率变化趋势分析.中华妇产科杂志,2003,38(5):257-260)。子痫前期以妊娠20周后高血压、蛋白尿、水肿为特征，常存在不同程度的代谢综合症表现，其中血脂代谢紊乱在子痫前期中表现比较明显。血脂代谢紊乱可能导致妊娠期高血压疾病的发生，并且可能加重病情，引起子宫及胎盘床小动脉的急性动脉粥样硬化，导致胎盘功能下降、胎儿生长受限、胎儿宫内窘迫等不良后果。近年来随着分子生物学、蛋白质组学、医学生物工程等科学技术的迅速发展，人们更加深入地认识了HDCP的发生、发展过程，但是目前临床治疗高脂血症的药物都不能应用于孕妇的治疗。因此研究新型的既可以降脂同时又对母婴无毒副作用的药物，以纠正子痫前期患者的血脂代谢异常及减轻胎盘氧化应激损伤，有望成为治疗及预防子痫前期的有效途径。目前已有的研究表明，在小鼠发生子痫前期改变的同时给予高脂饮食，其妊娠结局更为不良。脂肪浸润情况较为严重的孕鼠，其胎盘重量、胎仔重量明显降低，推测胎盘脂质过氧化物增多及脂质代谢紊乱，导致胎盘滋养叶细胞能量供应不足及胎盘组织细胞氧化应激，从而引起胎盘滋养细胞和血管内皮系统功能障碍，影响胚胎发育，最终导致生长发育受阻(SunMN,YangZ,MaRQ.Effectofhigh-fatdietonliverandplacentafattyinfiltrationinearlyonsetpreeclampsia-likemousemodel.ChinMedJ(Engl),2012,125(19):3532-3538.)。子痫前期患者体内存在子宫螺旋动脉及胎盘床小动脉的急性动脉粥样硬化(As)并且有着与As相似的血脂异常——As的危险因子血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)显著升高；而保护因子高密度脂蛋白(HDL)及载脂蛋白A-I(ApoA-I)显著下降。氧化应激和脂质过氧化反应增多，同时几种重要的抗氧化物缺乏，是子痫前期发病的主要机制之一。HDL，即高密度脂蛋白，在生理上起着将肝外组织的胆固醇运送到肝脏的作用，因而可以防止游离胆固醇在肝外组织细胞上的沉积，是一种抗动脉粥样硬化的血浆脂蛋白，是冠心病的保护因子，俗称“血管清道夫”。HDL的心血管保护作用主要体现在胆固醇逆转运及抗炎、抗氧化功能，升高HDL己经成为针对As的一种疗效较为肯定的治疗方法。HDL可下调血管内皮细胞烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶表达，降低活性氧簇(ROS)水平，发挥其抗氧化作用(CampbellS,GenestJ.HDL-C:clinicalequipoiseandvascularendothelialfunction.ExpertRevCardiovascTher,2013,11(3):343-53.)。国内外学者在升高血浆HDL水平方面进行了相关研究，但是目前研究中的降脂药物仍存在如下弊端：①他汀类、贝特类、烟酸类等降脂药存在明显的副作用，不能用于孕妇及哺乳期妇女。②注射天然HDL可有效纠正由高脂血症引起的血脂代谢紊乱，预防或逆转As等并发症，具有巨大的临床应用价值。然而，获得天然的HDL需要大量的血浆，原料来源有限，并且生产成本高、规模难以扩大。③HDL替代疗法中使用单一组分的ApoA-I无法实现HDL功能的多样性，不能完全替代HDL用于治疗。HDL颗粒包含具有抗氧化活性的载脂蛋白，这包括ApoA-I、载脂蛋白E(ApoE)等。ApoA-I是HDL抗氧化活性的主要成份，可以通过清除LDL、动脉壁细胞或两者中氧化的磷脂，抑制或延迟LDL氧化。ApoE的脂质转运功能和显著的抗氧化活性使其具有明确的抗动脉硬化活性。此外，ApoE作为受体识别标志能与低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)特异性结合，ApoE运载循环中的脂蛋白残体，与LRP结合后可以介导脂蛋白残体的清除。大量的研究已证实，人早期及进展型As斑块中平滑肌细胞、巨噬细胞均有LRP的高表达(LupuF,HeimD,BachmannF,KruithofEK.ExpressionofLDLreceptor-relatedprotein/alpha2-macroglobulinreceptorinhumannormalandatheroscleroticarteries.riosclerThromb,1994,14(9):1438-1444.)。因此，针对目前已有研究中的不足，本项目利用前期工作中获得的重组人载脂蛋白A-I(rhApoA-I)、重组人载脂蛋白E(rhApoE)为主要的蛋白成分，利用基因工程技术、发酵技术、蛋白纯化技术、胆酸钠法，获得高活性、高产量、低成本的新型重组高密度脂蛋白(rhHDL)颗粒。利用rhApoE-LRP的特异性结合，使rhHDL靶向作用于子痫前期患者胎盘发生急性As的血管，发挥rhApoA-I、rhApoE调节血脂代谢，抗氧化应激作用。此外，与天然HDL不同的是，在制备rhHDL的过程中，我们还将利用脂溶性抗氧化剂——维生素E取代rhHDL核心的胆固醇酯，使rhHDL具有更强的抗氧化能力。新型rhHDL颗粒治疗子痫前期的创新之处就在于，通过rhApoE与子痫前期患者胎盘发生急性As组织中高表达的LRP结合，实现rhHDL的靶向作用；rhApoE-LRP特异性结合后，rhHDL颗粒的成分(rhApoA-I、rhApoE和维生素E)释放于胎盘局部，调节血脂转运及抵抗氧化应激作用双管齐下，从而减轻子痫前期患者胎盘氧化应激损伤。
技术实现思路
本专利技术涉及重组高密度脂蛋白(rhHDL)的制备，特别是涉及rhHDL治疗子痫前期，及其在生产用于预防和治疗妊娠期高血压疾病的药物中的应用。本专利技术的一个目的是提供一种新的重组高密度脂蛋白(rhHDL)的制备方法，特征在于它的蛋白组分包括使用甲基营养酵母生产的重组人载脂蛋白A-I和重组人载脂蛋白E两种载脂蛋白以及维生素E。利用胆酸钠法制备rhHDL(KatoH，NakanoST，AraiH，etal.Purification,micoheterogeneity，andstabilityofhumanlipidtransferprotein[J].JBiolChem，1989，264(7)：4082-4087.)，可得到稳定、大小适宜的颗粒。胆酸钠可促进载脂蛋白进入卵磷脂的酰基链。HDL中载脂蛋白的亲脂基团结合胆固醇酯，亲水基因暴露在表面突入周围水相，从而使HDL颗粒能稳定地分散在水相中；为提高rhHDL的抗氧化活性，我们利用脂溶性的维生素E为核本文档来自技高网...

【技术保护点】
重组高密度脂蛋白在治疗妊娠期高血压疾病中的应用，特征在于重组高密度脂蛋白的蛋白组分包括使用甲基营养酵母生产的重组人载脂蛋白A‑I、重组人载脂蛋白E两种载脂蛋白和维生素E。

【技术特征摘要】
1.重组高密度脂蛋白在治疗妊娠期高血压疾病中的应用，特征在于重组高密度脂蛋白的蛋白组分包括使用甲基营养酵母生产的重组人载脂蛋白A-I、重组人载脂蛋白E两种载脂蛋白和维生素E。2.根据权利要求1的方法，其中所说的甲基营养酵母是巴斯德毕赤酵母，是用包括下列可操作连接的元件的DNA构建体转化的：(1)甲基可诱导的转录启动子；(2)编码载脂蛋白A-I或E的DNA片段；(3)转录终止子和(4)可选择标志，并且其中所说的甲...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏曼曼，许天敏，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林;22