一种小鼠合体滋养细胞微绒毛膜的制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种小鼠合体滋养细胞微绒毛膜的制备方法。该制备方法以小鼠胎盘为原材料，采用机械分离和改良差速离心法将小鼠合体滋养细胞微绒毛膜分离出来并进行富集；采用蛋白浓度定量对其进行浓度检测，并以组织多肽抗原进行鉴定和定量标记。本发明专利技术还公开了由所述制备方法制备的小鼠合体滋养细胞微绒毛膜在建立妊娠期高血压疾病小鼠模型中的应用。采用本发明专利技术所述制备方法制备的小鼠合体滋养细胞微绒毛膜产量大、浓度高，与人合体滋养细胞微绒毛膜在形态和蛋白标记物方面高度相似；可直接用于以研究子痫前期、子痫等妊娠期高血压疾病的发生、发展机制以及开发对抗药物为目的的医学基础和临床研究，也可以用于进一步制备妊娠期高血压疾病动物模型。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医学
，具体涉及一种小鼠合体滋养细胞微绒毛膜的制备方法及其应用。
技术介绍
合体滋养细胞微绒毛膜是合体滋养细胞凋亡或被激活时形成的带膜囊泡状结构，目前被认为可能与多种妊娠并发症相关。脱落至母体血液循环的合体滋养细胞微绒毛膜可作用于外周血管，导致血管内皮细胞功能障碍，同时通过调节机体炎性因子释放和调控细胞免疫等多种途径影响母体免疫系统。已经有大量证据提示合体滋养细胞微绒毛膜与子痫前期、子痫等妊娠期高血压疾病之间的关系，但基于医学研究的伦理要求和妊娠过程的特殊性质，目前尚无法通过临床试验研究合体滋养细胞微绒毛膜在人类疾病中的具体作用及其机制。另外，由于没有以合体滋养细胞微绒毛膜为研究靶点的适用动物模型可以利用，也无法开展动物实验和体内研究。体外制备和富集有活性的合体滋养细胞微绒毛膜是研究其在子痫前期、子痫等妊娠期高血压疾病中的作用和机制的先决条件，也是建立相关动物模型的基础。
技术实现思路
针对上述现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种小鼠合体滋养细胞微绒毛膜的制备方法。本专利技术所述制备方法以新鲜小鼠胎盘为原材料，采用机械分离和改良差速离心法将小鼠合体滋养细本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种小鼠合体滋养细胞微绒毛膜的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）将新鲜小鼠胎盘采用冰PBS缓冲液洗净后剪碎成胎盘碎片；（2）取步骤（1）所得的胎盘碎片放置在0.1～0.2mol/L的NaCl溶液中，2～6℃振荡过夜，其中所述NaCl溶液中添加了1～2%的青?链霉素；取上清，差速离心：1000g，10min，弃沉淀；10000g，10min，弃沉淀；100000g，60min，弃上清，得合体滋养细胞微绒毛膜富集沉淀；（3）将步骤（2）所得的合体滋养细胞微绒毛膜富集沉淀以2～6℃的PBS缓冲液洗涤，再以2～6℃的PBS缓冲液重悬，其中所述重悬步骤中PBS缓冲液中含3～7%的蔗糖，保存于?2...

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩健，胡炯宇，李怡琳，李力，刘晓洁，
申请(专利权)人：中国人民解放军第三军医大学第三附属医院，
类型：发明
国别省市：