一种利用黄芪培养冬虫夏草菌的方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种利用黄芪培养冬虫夏草菌的方法及其应用，所述方法是在冬虫夏草种子培养和/或发酵过程中，将黄芪添加到冬虫夏草菌的培养基中，继续按冬虫夏草常规工艺进行培养和发酵；所述冬虫夏草菌优选为无性型中华被孢霉、有性型中华被孢霉、虫草头孢霉、弯颈霉、束丝霉或蝙蝠蛾拟青霉。本发明专利技术提供的方法简单、方便，所需黄芪提取物少，成本低；菌种生长快、质佳，所得到的发酵液和菌丝体虫草素含量高。采用本发明专利技术所述方法培养所得的发酵液和菌丝体可用于生产虫草保健品。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及微生物培养、发酵领域，具体涉及一种利用黄芪培养冬虫夏草菌的方法及其应用。
技术介绍
冬虫夏草是我国的一种名贵、稀有中药，是麦角菌科真菌寄生在蝙蝠蛾幼虫形成的子座和幼虫尸体的复合体，主要产于西藏，青海，四川，云南等省的青藏高寒地区，冬虫夏草用药历史悠久，与人参、鹿茸并列三大滋补品之一，用于补益肺肾两虚，久咳，支气管炎，阳痿，月经不调，高血脂，心供血不足等症，具有抗肿瘤，增强免疫力、抗病毒，抗真菌等药理作用，科学研究发现冬虫夏草含有腺苷、虫草素、虫草酸，多糖等药物化学物质，是冬虫夏草发挥药效，也是制定冬虫夏草质量标准的重要物质基础，近几年，国内外科学家发现，虫草素能干扰基因细细RNA和DNA的合成，抑制癌细胞等不正常细胞的分裂，表现出很强的抗真菌、抗HlV－I型病毒和抑制梭菌活性，作为抗癌、抗病毒新药，虫草素在美国己通过FDA的安全评价，并进入到三期临床价段。冬虫夏草菌是从新鲜、经消毒的冬虫夏草的虫体或子座中分离得到的一种药用真菌，用深层液体发酵生产得到的虫草菌丝，含有与野生冬虫夏草相同的药物成分，用冬虫夏草菌丝体制得多种药产品，如金水宝、百灵胶囊等作为国家一类新药已收入于中国药典，具有很好的市场前景。十多年来，国内许多单位，尽管已经对冬虫夏草菌的生长特征、发酵培养基优化和发酵工艺进行大量研究工作，冬虫夏草菌丝体活性成分还较低，特别是冬虫夏草菌丝体中虫草素含量更低，因此有必要提高冬虫夏草菌的虫草素含量。现有提高虫草素的技术方案一般是对发酵培养基进行改良，或在发酵过程，把一些化学物质，如油酸或其前体物类似物或植物生长调节剂等加入到发酵培养基中，由于发酵培养基体积大，所需原材料或添加物的重量大，成本高。很少见到通过对冬虫夏草菌种子培养基的研究，来提高虫草素含量的研究。因此，冬虫夏草真菌的种子培养和发酵工艺技术研究的创新，对提高发酵冬虫夏草菌发酵液和菌丝体的虫草素含量，改善冬虫夏草菌的产品质量和药用效果有积极意义。黄芪是我国常用的药食同用传统中药之一，主产于我国东北、华北和西北各省，黄芪药用已有2000年历史，具有增强机体免疫力，抗衰老，调节血糖，改善心肌供血等功能。但至今未见黄芪用于调控微生物代谢报导，更未见黄芪用于促进虫草菌产生更高活性成分的报导。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的缺陷，提出了一种利用黄芪培养冬虫夏草菌的方法，该方法是在冬虫夏草种子培养和/或发酵过程中，将黄芪粉碎物、黄芪提取液或黄芪粉末状提取物添加到所述培养基中，继续按冬虫夏草常规工艺进行培养和发酵，培养得到冬虫夏草发酵液和菌丝体。本专利技术所述冬虫夏草菌是指从新鲜、经消毒的冬虫夏草的虫体或子座中分离得到的药用真菌；优选为本领域公知的无性型中华被孢霉、有性型中华被孢霉、虫草头孢霉、弯颈霉、束丝霉或蝙蝠蛾拟青霉。本专利技术通过大量实践发现，将黄芪粉碎物、黄芪提取液或黄芪粉末状提取物用于冬虫夏草菌的培养过程，可以显著提高冬虫夏草菌的质量，尤其可以提冬虫夏草菌发酵液和菌丝中虫草素的含量，从而提高其药用价值。具体而言，本专利技术所述方法包括以下步骤：将冬虫夏草菌接入种子培养基中进行种子培养，得种子液；将所述种子液接入发酵培养基中进行发酵培养；期间，将黄芪粉碎物、黄芪提取液或黄芪粉末状提取物添加到种子培养基或/和发酵培养基中。本专利技术所述黄芪粉碎物、黄芪提取液或黄芪粉末状提取物在使用时，可以将其单独使用，或与已知的有利于冬虫夏草菌发酵的物质组合使用，也可以在优化培养基、优化培养条件后使用；可以在冬虫夏草菌的种子培养期或发酵期单独使用，或者在种子和发酵期组合使用。为了更好地提高虫草素的含量，同时尽量减少黄芪的用量，本专利技术将黄芪粉碎物、黄芪提取液或黄芪粉末状提取物添加到所述种子培养基中。具体而言，优选在未接入种子前或接入种子后的指数生长期内将黄芪粉碎物、黄芪提取液或黄芪粉末状提取物添加到种子培养基中。本专利技术还可以将黄芪粉碎物、黄芪提取液或黄芪粉末状提取物添加到所述发酵培养基中。具体而言，优选在所述发酵培养的延滞期或所述发酵培养的指数生长期，将黄芪粉碎物、黄芪提取液或黄芪粉末状提取物添加到所述发酵培养基中。本专利技术还可以将黄芪粉碎物、黄芪提取液或黄芪粉末状提取物添加到所述种子培养基和发酵培养基中。优选在未接入种子前或种子生长到指数生长期内，和发酵培养的延滞期或指数生长期，将黄芪粉碎物、黄芪提取液或黄芪粉末状提取物添加到种子培养基和发酵培养基中。本专利技术所述黄芪属于豆科多年生本草植物，栽种于我国东北、华北、西北各省，有野生或人工种植二种，也有一年生、二年生、三年生不同，但作为具有促进冬虫夏草菌产生更高活性成分的黄芪和作为制备提取物原料，均没有特别要求，只要是黄芪即可。作为制备提取物原料，以黄芪根为宜，但为了降低原料成本，黄芪茎或叶也可以采用。在本专利技术中，为显示更好的促进作用，或获得更好质量的提取物，或为获得高的提取率，本专利技术所述黄芪优选为三年生黄芪的根部。为促进冬虫夏草菌产生更高活性成分的使用，可以把黄芪根干燥、粉碎、研磨或超微粉碎成微粉直接使用，也可以将黄芪根作原料，经提取、浓缩制备成稳定的提取液或粉末状提取物。作为本专利技术的一种方案，所述黄芪粉碎物以黄芪根为原料，经机械粉碎后所得。优选其粒径为250～350目。在实际添加时，本专利技术优选所述黄芪粉碎物在所述培养基中的添加量为4～6g/L。作为本专利技术的一种方案，所述黄芪提取液由包括如下步骤的方法制备而成：取黄芪根干燥、粉碎后，加水，在40～70℃下，超声波负压回流提取20～40分钟，减压浓缩，即得黄芪提取液；所述黄芪提取液的体积ml相当于所述黄芪根质量g的0.5～1.5倍。具体而言，本专利技术所述黄芪提取物的制备方法包括下列步骤：(1)原料干燥；(2)粉碎；(3)提取；(4)浓缩。步骤(1)中，作为原料使用的黄芪根，新采收的含水量较高，从市场购买的黄芪，粉碎前需要进一步干燥脱水，干燥方法可用烘箱烘干，也可用干燥热风吹干，干燥温度没有特别限制，可以在80～90℃高温干燥或20～30℃低温干燥，在本专利技术所述方案中，优选在40～65℃干燥。步骤(2)中，对于干燥的原料，为了提高提取效率，简单的切片达不到理想效果，要进一步粉碎，对粉碎方法本专利没有特别规定和要求，可以采用气流粉碎，也可以采用物理粉碎，如用研磨机、粉碎机粉碎或超微粉碎，粉碎过程最好可控制粉碎温度在40～65℃范围，优选具有降温条件的粉碎设备。步骤(3)中，提取设备可用超声波提取器，也可采用多功能提取器，可在常压、负压力或脉冲压力下进行，对提取温度也没有严格限制，提取选用的溶剂可以是纯水或含有少量低级醇的水溶液，优选超声波提取器，纯水作溶剂，温度40～70度，负压力条件下，，超声提取时间20～40分钟。步骤(4)中，提取液浓缩可以借用生物化工或植物提取物质的浓缩设备和方法，可采用陶瓷膜或管式膜过滤后，用纳滤浓缩或反渗透除去溶剂，也可以使用多效浓缩器减压浓缩蒸去溶剂，得到提取液。在实际添加时，本专利技术优选所述黄芪提取液在所述培养基中的添加量为3～8ml/L。作为本专利技术的一种方案，所述黄芪粉末状提取物是所述黄芪提取液经醇沉、干燥后所得。具体而言，为了对所述黄芪提取液进行进一步的纯化，可以在所述提取液中加入乙醇，静置后滤去上清液，得膏状物，再依本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用黄芪培养冬虫夏草菌的方法，其特征在于，在冬虫夏草种子培养和/或发酵过程中，将黄芪粉碎物、黄芪提取液或黄芪粉末状提取物添加到种子培养基和/或发酵培养基中；所述冬虫夏草菌优选为无性型中华被孢霉、有性型中华被孢霉、虫草头孢霉、弯颈霉、束丝霉或蝙蝠蛾拟青霉。

【技术特征摘要】
1.一种利用黄芪培养冬虫夏草菌的方法，其特征在于，在冬虫夏草种子培养和/或发酵过程中，将黄芪粉碎物、黄芪提取液或黄芪粉末状提取物添加到种子培养基和/或发酵培养基中；所述冬虫夏草菌优选为无性型中华被孢霉、有性型中华被孢霉、虫草头孢霉、弯颈霉、束丝霉或蝙蝠蛾拟青霉。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：将冬虫夏草菌接入种子培养基中进行种子培养，得种子液；将所述种子液接入发酵培养基中进行发酵培养。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，将黄芪粉碎物、黄芪提取液或黄芪粉末状提取物添加到所述种子培养基中；优选在未接入种子前或接入种子到指数生长期内任意时间添加到所述种子培养基中；或，将黄芪粉碎物、黄芪提取液或黄芪粉末状提取物添加到所述发酵培养基中；优选在所述发酵培养的延滞期或所述发酵培养的指数生长期添加到所述发酵培养基中；或，将将黄芪粉碎物、黄芪提取液或黄芪粉末状提取物添加到所述种子培养基和发酵培养基中；优选在未接入种子前或种子指数生长期内添加到所述种子培养基中，并在发酵培养的延滞期或指数生长期添加到所述发酵培养基中。4.根据权利要求1～3任意一项所述的方法，其特征在于，所述黄芪粉碎物是以黄芪根为原料经机械粉碎后得到，优选其粒径为250～350目；优选地，所述黄芪粉碎物在所述培养基中的添加量为4～6g/L。5.根据权利要求1～3任意一项所述的方法，其特征在于，所述黄芪提取液由包括如下步骤的方法制备而成：取黄芪根，干燥、粉碎后，加水，在40～70℃下超声回流提取20～40分钟，减压浓缩，即得黄芪提取液；以ml/g计，所述黄芪提取液的体积相当于所述黄芪根质量的0.5～1.5倍；优选地，所述黄芪提取液在所述培养基中的添加量为3～8ml/L。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈家任，陶黎明，童佳琼，
申请(专利权)人：锬酃藏虫草生物科技深圳有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44