用于胃肠给予RNA的组合物制造技术

本发明专利技术涉及包括多核糖核苷酸(RNA)和阳离子剂的药物组合物，其中所述药物组合物被配制成用于给予胃肠(GI)道的固体剂型。本发明专利技术还涉及这种药物组合物用于全身性递送RNA的应用和全身性递送RNA至对象的方法——包括给予这种药物组合物至GI道的步骤。此外，本发明专利技术涉及试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及包括多核糖核苷酸(RNA)和阳离子剂的药物组合物，其中所述药物组合物被配制成给予至胃肠(GI)道的固体剂型。本专利技术还涉及这种药物组合物用于全身性递送RNA的应用和RNA全身性递送至对象的方法，该方法包括如下步骤：口服给予这种药物组合物至GI道。此外，本专利技术涉及试剂盒。核酸治疗的可行性基本上取决于将核酸递送到细胞中和/或递送至或递送到组织(一个或多个)中的有效方法的利用度。在核酸递送中，总体上，使用裸核酸在一些情况下是适当的并且足以转染细胞(Wolff等，1990，Science，247，1465-1468)。然而，在大多数设想的实际应用中，将核酸与至少第二试剂(保护核酸免于在递送过程中降解和/或促进分配至目标组织和分配在目标组织中和/或促进细胞摄取和能够实现适当的胞内加工)配制在一起是有利或甚至有必要的。这种用于核酸递送的制剂在科学文献中被称为载体。多种用于核酸载体化的化合物，所谓转染试剂，此前已被描述。这些化合物通常是聚阳离子或包括阳离子脂质或脂质样化合物如类脂质(lipidoids)的组合物(US8,450,298)。核酸与聚阳离子的络合物被称为多聚络合物(polyplexes)，与阳离子脂质的络合物被称为脂质络合物(Felgner等，1997，HumGeneTher，8，511-512)。包括聚阳离子和脂质的络合物也已被描述(Li和Huang，“NonviralVectorsforGeneTherapy”，AcademicPress1999，第13章，295-303)。转染试剂用于结合和致密化核酸，产生纳米大小范围的主要络合物。在含盐介质中，这些络合物容易聚集，也被称为盐诱导性聚集，这可有利于细胞培养或体内局部化给予中的转染(Ogris等，1998，GeneTher，5，1425-1433；Ogris等，2001，AAPSPharmSci，3，E21)。通过利用多聚体如聚(乙二醇)表面遮蔽，可避免聚集和可稳定化核酸与转染试剂的络合物。遮蔽还用于避免核酸与转染试剂的络合物的调理作用和补体活化作用(Finsinger等，2000，GeneTher，7，1183-1192)。通过转染试剂致密化核酸不仅保护免于被核酸酶降解，而且使其适于通过内吞作用进行细胞摄取。很多线性和分支聚阳离子适于结合和致密化核酸，包括但不限于聚(亚乙基亚胺)、聚(酰胺-胺)树枝状多聚体、聚(2-(二甲基氨基)乙基甲基丙烯酸酯)(pDMAEMA)或聚(N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺)(pHPMA)的阳离子衍生物、聚(β-氨基酯)(Akinc等，2003，BioconjChem14(5)：979-88)、天然和合成阳离子聚(氨基酸)或肽如聚(赖氨酸)、组蛋白、HMG蛋白或阳离子碳水化合物如壳聚糖。除上述包含伯-、仲-和/或叔胺的多聚体外，包含胍基部分的结构也是重要的一类用于核酸络合和递送的分子。诸如基于精氨酸的结构的胍基修饰多聚体(Yamanouchi等，2008，Biomaterialsmaterials29(22)：3269-77)、精氨酸修饰的PAMAM(Son等，2013，Bull.KoreanChem.Soc.Vol34，No.3)或胍基化PEI(Lee等，2008，Bull.KoreanChem.Soc.2008，Vol.29，No.3)已突出了这种系统的功效。特别是在RNA相互作用的情况下，胍基部分的分子特征呈现独特的结合特性(Calnan等，19991，Science252(5009)，1167-1171)。关于这种结构的生成，可采用Katritzky和Rogovoy(Katritzky&Rogovoy2005，ARKIVOC(iv)49-87)评述的方法。通常，多聚络合物经进一步修饰以包含细胞靶向或胞内靶向部分和/或膜去稳组分如灭活病毒(Curiel等，1991，ProcNatlAcadSciUSA，88，8850-8854)、病毒衣壳或病毒蛋白或肽(Fender等，1997，NatBiotechnol，15，52-56，Zhang等，1999，GeneTher，6，171-181)或膜破坏性合成肽(Wagner等，1992，ProcNatlAcadSciUSA，89，7934-7938，Plank等，1994，JBiolChem，269，12918-12924)。然而，尽管具有一些优点，当前用于基因递送的病毒载体与包括强免疫原性和插入诱变的安全问题有关。低基因转运效率限制了非病毒载体(Evans，2012，loc.cit.)。后者已主要归因于质粒DNA到核中的运送不足。在内吞性摄取时，络合物被隔离到胞内囊泡(如内含体和溶酶体)中，在此其暴露于细胞降解机制。因此，已认识到从胞内囊泡逃逸对于有效功能性核酸递送至关重要——一个也适用于功能性病毒感染的要求(Wagner等，1992，ProcNatlAcadSciUSA，89，7934-7938，Plank等，1994，JBiolChem，269，12918-12924)。自然界关于病毒感染性进化的机制已被模拟，以实现通过合成载体进行有效核酸递送。为此，两性膜去稳肽如INF、GALA和KALA肽或蜂毒肽和蜂毒肽衍生物(Boeckle等，2006，JControlRelease，112，240-248)已非常成功地用于向聚阳离子转染试剂补充内含体逃逸功能性(Plank等，1998，AdvDrugDelivRev，34，21-35)。在脂质络合物中，因其脂质部分融合细胞膜的能力，这种功能性是固有的(Xu和Szoka1996，Biochemistry，35，5616-5623；Zelphati和Szoka1996，ProcNatlAcadSciUSA，93，11493-11498)。因为Boussif等的关键性论文(Boussif等，1995，ProcNatlAcadSciUSA，92，7297-7301)，已知多聚络合物的内含体逃逸功能性可通过物理-化学手段实现。当聚(亚乙基亚胺)(PEI)用作聚阳离子以形成多聚络合物时，其在酸性pH下的缓冲能力足以引发内含体逃逸。已知内含体腔通过位于内含体膜中的质子泵被酸化(Lafourcade等，2008，PLoSOne，3，e2758)。这种酸化是一些病毒如流感或腺病毒的内含体逃逸的触发点。所谓质子海绵理论——得到实验证据支持——描述了包括PEI的化学结构特征的多聚体的假定的机械作用：PEI的大部分氨基在中性(生理)pH下未质子化(Ziebarth和Wang2010，Biomacromolecules，11，29-38)。凭借质子化的并且因此带正电荷的氨基，PEI样多聚体可结合和致密化核酸。未质子化的胺可在酸性pH下质子化，因此在内含体内具有缓冲能力。通过质子泵进行的内含体酸化伴随氯离子累积发生(Sonawane等，2003，JBiolChem，278，44826-44831)。在内含体腔中存在缓冲分子如PEI的情况下，质子泵会随着氯离子累积将更多质子接送到内含体腔中，尽管其在达到天然酸性内含体pH前不会存在。认为内含体内不成比例的离子累积导致囊泡的渗透性去稳，最终导致囊泡破裂和核酸络合物释放本文档来自技高网...

【技术保护点】
药物组合物，包括多核糖核苷酸(RNA)和阳离子剂，其中所述药物组合物被配制成用于给予至胃肠(GI)道的固体剂型。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.02.26 EP 14156847.7;2014.02.26 EP 14156855.01.药物组合物，包括多核糖核苷酸(RNA)和阳离子剂，其中所述药物组合物被配制成用于给予至胃肠(GI)道的固体剂型。2.根据权利要求1所述的药物组合物，其被配制成用于口服给予的固体剂型。3.根据权利要求1所述的药物组合物，其被配制成用于直肠给予的固体剂型。4.根据权利要求1至3中任一项所述的药物组合物，其中所述阳离子剂是阳离子寡聚体、多聚体或类脂质。5.根据权利要求1至4中任一项所述的药物组合物，其中所述阳离子剂是聚亚乙基亚胺(PEI)。6.根据权利要求1至4中任一项所述的药物组合物，其中所述阳离子剂是包括寡(亚烷基胺)的组分，所述组分选自：a)包括多个式(II)基团作为侧链和/或作为末端基团的寡聚体或多聚体：其中多个式(II)基团中的每个式(II)基团的变量a、b、p、m、n和R2至R6独立地限定如下：a是1，并且b是2至4的整数；或a是2至4的整数，并且b是1，p是1或2，m是1或2；n是0或1和m+n≥2；并且R2至R5彼此独立地选自氢；基团-CH2-CH(OH)-R7、-CH(R7)-CH2-OH、-CH2-CH2-(C＝O)-O-R7、-CH2-CH2-(C＝O)-NH-R7或-CH2-R7，其中R7选自C3-C18烷基或具有一个C-C双键的C3-C18烯基；氨基保护基团；和聚(乙二醇)链；R6选自氢；基团-CH2-CH(OH)-R7、-CH(R7)-CH2-OH、-CH2-CH2-(C＝O)-O-R7、-CH2-CH2-(C＝O)-NH-R7或-CH2-R7，其中R7选自C3-C18烷基或具有一个C-C双键的C3-C18烯基；氨基保护基团；-C(NH)-NH2；聚(乙二醇)链；和受体配体，并且，其中式(II)所示氮原子中的一个或多个可被质子化以提供式(II)的阳离子基团；b)包括多个式(III)基团作为重复...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·多曼，M·乌次音格，G·海森普荷，C·鲁德夫，C·普兰克，
申请(专利权)人：埃泽瑞斯公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE