小分子非编码RNA miR-100在制备用于治疗肿瘤包绕型血管类型肝癌的药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供一种小分子非编码RNA miR‑100在制备用于治疗肿瘤包绕型血管(VETC)类型肝癌的药物中的用途，其中所述miR‑100的RNA序列为5’‑AACCCGUAGAUCCGAACUUGUG‑3’。本发明专利技术通过免疫组化和实时定量PCR检测了人肝癌组织标本，表明肝癌病人组织标本中miR‑100的低表达与病人组织肿瘤包绕型血管类型以及Ang‑2的高表达显著相关；小鼠成瘤实验的结果表明恢复miR‑100的表达可显著抑制肝癌细胞表达Ang‑2、形成肿瘤包绕型血管和转移的能力。因此，miR‑100均可用于制备治疗形成肿瘤包绕型血管的肝癌病人的药物。

Application of small molecule non coding RNAmiR-100 in preparation of medicine for treating liver cancer with liver cancer

The present invention provides a kind of small molecule non encoding RNA miR-100 in preparation for the treatment of tumor around the vascular (VETC) drug use types of hepatocellular carcinoma, the RNA sequence of the miR-100 is 5 '-AACCCGUAGAUCCGAACUUGUG-3'. The detection of the human hepatocellular carcinoma tissue specimens by immunohistochemistry and real-time quantitative PCR showed significant correlation, high expression and low expression of miR-100 in patients with hepatocellular carcinoma patient tissue tumor tissues around the vascular type and Ang-2 mice; experimental results show that the restoration of miR-100 expression could significantly inhibit the expression of Ang-2 in HCC formation tumor metastasis and vascular wound ability. Therefore, miR-100 can be used in the preparation of the medicine for treating liver cancer patients with tumor wrapped vessels.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程领域，具体涉及小分子非编码RNAmiR-100及其在制备VETC血管类型肝癌治疗药物中的应用。
技术介绍
原发性肝细胞肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)是世界上最常见的恶性肿瘤之一，其中50％发生于中国，且发病率和致死率逐年上升，严重危害我国人民的健康。众所周知，易于发生转移是癌症难以根治并导致病人死亡的主要原因。一般认为，肿瘤中微血管密度越高，肿瘤越易于发生血行转移。但是，肝癌的微血管密度与肝癌复发转移的关系仍存在争议。最近我们发现：除毛细管状血管，肝癌中还广泛存在VETC(vesselsthatencapsulatetumorcluster，肿瘤包绕型血管)类型血管，它们相连成网，将肿瘤块包绕分隔开。具备VETC血管类型的肝癌病人通常术后复发率更高，生存时间更短。更为重要的是，VETC能够通过与癌旁血管融合释放被VETC分隔的肿瘤块，从而帮助肿瘤发生转移。这提示：VETC血管结构对肿瘤细胞发生转移具有重要的影响，因此制备针对VETC血管类型肝癌的治疗药物具有重要的应用价值。Sugino等于2002年最早报道了肿瘤中类似VETC的血管结构的存在，他们观察到乳腺癌细胞移植瘤中血管发展成融合的血窦样结构，并包绕肿瘤团块；随后，该课题组在人肝癌、肾癌和甲状腺癌中都观察到融合的血窦样结构的现象。我们之前的报道首次证明了VETC结构是肝癌独立的预后不良预测因素，与肝癌的转移密切相关。至今,关于VETC形成的潜在分子机制知之甚少。分别有两个研究小组发现：乳腺癌细胞株过表达SLPI和黑色素瘤过表达VEGFA可促进肿瘤细胞株成瘤组织中VETC结构血管的形成，但是具体机制不明。最近，我们首次揭示了Ang-2是诱导VETC形成的关键分子，在肿瘤细胞中敲低Ang-2的表达能够显著破坏VETC的形成，并最终导致转移率下降。Ang-2是血管重塑的重要调控分子，能够通过结合其受体Tie-2，激活下游信号通路，下调内皮细胞中粘附分子VE-Cad的表达，增加血管的通透性，并抑制周细胞的募集，从而阻碍血管成熟。缺少周细胞保护的不成熟血管通常处于一种不稳定的状态，它们通过感受外部信号，决定是出芽还是凋亡。在缺乏促血管生成信号的情况下，Ang-2高表达会导致内皮细胞凋亡，进而发生血管衰退；然而在富含VEGF等促血管生成信号的肿瘤中，Ang-2会促进内皮细胞接受促血管生成信号，诱导内皮细胞的增殖和迁移，引起血管生成。研究表明，Ang-2在多种肿瘤组织中高表达，且其表达水平与患者的生存时间显著负相关。多个基于动物模型的研究表明，抑制Ang-2的活性不仅能够增加肿瘤血管上周细胞的覆盖，使得血管正常化，还显著抑制了移植瘤的血管生成以及肿瘤生长。我们的前期结果表明，抑制肝癌细胞中Ang-2的表达不仅能够抑制VETC的形成，还能够抑制转移。由此可见，Ang-2主要起到促肿瘤的作用，是一个重要的抗血管药物潜在的靶分子。microRNA(miRNA)是一类保守的小分子非编码RNA，通过识别靶基因的3’非编码区域(3’UTR)抑制mRNA翻译或促进蛋白降解，从而在转录后水平调控蛋白编码基因的表达。miRNA的异常调控已被证实参与了多种肿瘤的发生发展。由于一个miRNA通常能够识别多个蛋白编码基因，同时调控多种生物学功能，包括增殖、凋亡、血管生成和转移等等，因此在肿瘤中过表达miRNA是一种潜在的抗肿瘤治疗策略。然而，国内外文献中至今未见有关miRNA参与VETC血管类型调控的研究报道。因此，研究miRNA在VETC类型血管生成中的作用及其在肝癌诊治中的应用，对于制备高效的抗肿瘤血管生成药物以及肿瘤个体化治疗意义重大。
技术实现思路
为了解决以上技术问题，本专利技术的目的在于提供一种抑制肿瘤细胞Ang-2表达和形成VETC血管，进而治疗肝癌的小分子非编码RNA。首先，本专利技术的内容小分子非编码RNAmiR-100在制备用于治疗VETC血管类型肝癌的药物中的应用，其中所述miR-100的RNA序列为：miR-100,5’-AACCCGUAGAUCCGAACUUGUG-3’；在另一实施方案中，本专利技术的小分子非编码RNAmiR-100抑制肿瘤细胞诱导形成VETC血管。在优选的实施方案中，本专利技术的小分子非编码RNAmiR-100抑制肿瘤细胞中Ang-2的表达。在另一实施方案中，本专利技术提供了用于治疗VETC血管类型肝癌的药物，其包含所述小分子非编码miR-100。在另一实施方案中，本专利技术提供了用于治疗VETC血管类型肝癌的药物，其包含能表达miR-100的试剂。在优选的实施方案中，所述表达miR-100的试剂包括RNA拟似物、过表达miR-100的质粒和携带有miR-100序列的病毒。本专利技术的内容还包括所述能表达miR-100的试剂在在制备用于治疗VETC血管类型肝癌的药物中的用途。进一步，本专利技术的内容还包括小分子非编码RNAmiR-100在制备抑制肿瘤细胞中Ang-2的表达和抑制肿瘤细胞诱导形成肿瘤包绕型血管的试剂中的用途。本专利技术通过免疫组化和实时定量PCR检测了人肝癌组织标本，表明肝癌病人组织标本中miR-100的低表达与病人组织肿瘤包绕型血管类型以及Ang-2的高表达显著相关；小鼠成瘤实验的结果表明恢复miR-100的表达可显著抑制肝癌细胞表达Ang-2、形成VETC类型血管和转移的能力。因此，miR-100均可用于制备治疗形成VETC血管类型的肝癌病人的药物，具有很好的应用前景。附图说明图1为肝癌组织标本miR-100的表达水平与包绕型血管VETC的相关性统计图。图1是实施例1的实验结果。图2为小鼠移植瘤实验结果图，检测在肝癌细胞中过表达miR-100对血管形态和转移的影响。其中，图2A是免疫组化检测人原代肝癌细胞VETC-2小鼠移植瘤中包绕型血管的代表图和血管指数统计图，代表图下方标示对应的每组发生转移的荷瘤小鼠数目/成瘤小鼠总数；图2B是鼠肝癌细胞Hepa1-6移植瘤的包绕型血管指数统计图。图2是实施例2中的实验结果。图3为miR-100调控肝癌细胞表达Ang-2的实验结果图。其中，图3A为在VETC-2或Hepa1-6细胞中稳定过表达miR-100后，肝癌细胞中Ang-2蛋白水平的蛋白质印迹检测图；图3B为在VETC-2或Hepa1-6细胞中拮抗内源miR-100后，细胞中Ang-2蛋白水平的蛋白质印迹检测图。图3是实施例3中的实验结果。图4为检测VETC-2和Hepa1-6形成的小鼠移本文档来自技高网...

【技术保护点】
小分子非编码RNA miR‑100在制备用于治疗肿瘤包绕型血管类型肝癌的药物中的应用，其中所述miR‑100的RNA序列为5’‑AACCCGUAGAUCCGAACUUGUG‑3’。

【技术特征摘要】
1.小分子非编码RNAmiR-100在制备用于治疗肿瘤包绕型血管类型肝癌的药物中的应用，
其中所述miR-100的RNA序列为5’-AACCCGUAGAUCCGAACUUGUG-3’。
2.根据权利要求1所述的用途，其中所述miR-100抑制肿瘤细胞诱导形成肿瘤包绕型血管。
3.根据权利要求2所述的用途，其中所述miR-100抑制肿瘤细胞中Ang-2的表达。
4.用于治疗肿瘤包绕型血管类型肝癌的药物，其包含小分子非编码RNAmiR-100，其中所
述miR-100的RNA序列为5’-AACCCGUAGAUCCGAACUUGUG-3’。
5.用于治疗肿瘤包绕型血管类型肝癌的药物，其包含能表达小分子非编码RNAmiR-100的
试剂，其中所述mi...

【专利技术属性】
技术研发人员：庄诗美，周慧超，方坚鸿，尚丽茹，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：广东;44