罗伊氏乳杆菌在替代饲用抗生素中的应用制造技术

本发明专利技术公开一种罗伊氏乳杆菌在替代饲用抗生素中的应用，属于微生物及其应用领域。本发明专利技术提供罗伊氏乳杆菌是从健康仔猪分离得到，安全性高。在无抗饲粮中添加该菌株可较好防止仔猪断奶后腹泻，该菌株具有较好的促生长作用。该菌株可明显促进仔猪因断奶导致肠道黏膜损伤的修复，且具有免疫调节功能。综上所述，罗伊氏乳杆菌可作为抗生素替代品用于断奶仔猪抗腹泻和促生长作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物及其应用领域，特别涉及一种罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)LR1在替代饲用抗生素中的应用。
技术介绍
在现代养猪生产中，仔猪腹泻是导致严重经济损失最常见的原因，腹泻可导致仔猪生长减缓，免疫力下降，肠道功能紊乱等，进而减低饲料利用率，显著提高仔猪死亡率(Fairbrotheretal.,2005)。致病菌引起的腹泻是断奶仔猪最常见的疾病(Fairbrotheretal.,2005)。目前控制断奶仔猪致病菌导致的腹泻的主要方法是使用饲用抗生素(Barton,2000)。抗生素发现并开始大规模使用的这几十年中，已经成为提高畜禽生产性能和预防疾病的常用添加剂(Thacker,2013)。饲料中使用抗生素在促进畜禽生长的同时，其弊端日益明显，包括：耐药菌株的产生和流行、引起机体内源感染或二重感染、导致机体免疫功能下降、药物在畜产品中残留并通过食物链影响人类健康和生态环境。随着人们对公共安全、环境保护和食品安全意识的不断提高，人们对饲用抗生素带来的巨大经济效益背后的隐藏问题开始关注起来。抗生素滥用导致的致病菌耐药性问题已经成为了危害公共卫生的重大因素(Docicetal.,2003)。瑞士于1986年首先宣布全面禁用饲用抗生素促生长剂，成为了禁用饲用抗生素的国际先行者；在2006年，欧盟宣布全面禁止饲用抗生素的使用；2011年，韩国成为第一个全面禁用饲用抗生素的亚洲国家；2014年，美国宣布3年时间过渡到全面禁用饲用抗生素。目前，中国是使用抗生素最多国家，其中饲用抗生素滥用情况尤为严重，我国年产抗生素约21万吨，其中有近半被用于了畜牧养殖业，国内饲用抗生素用量超出美国4倍以上。在全球禁用饲用抗生素的大趋势下，在可预见的将来，中国在畜禽生产中饲用抗生素势必也将会逐步被禁用。因此为了保证我国畜禽业的正常健康发展，必须寻找一种无毒害、无残留、生产效果好的饲料添加剂来替代抗生素。在此背景之下，安全、环保、高效的促生长饲料添加剂正在被不断的开发，其中的佼佼者有益生菌制剂、酸化剂、酶制剂、寡聚糖、植物提取物和中草药等，而益生菌制剂被认为是上述替代品中最有潜力的抗生素替代品(Shanahanetal.,2000)。
技术实现思路
为了克服现有技术的缺点与不足，本专利技术的目的在于提供一种罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)LR1在替代饲用抗生素中的应用。该罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)LR1从健康动物肠道筛选得到，通过微生物发酵、分离以及冷冻干燥工艺制备得到益生罗伊氏乳杆菌制剂。在体外肠上皮细胞模型试验中，该罗伊氏乳杆菌表现出具有典型的益生菌特征。在采用断奶仔猪进行罗伊氏乳杆菌替代饲用抗生素的应用效果评价试验过程中，该罗伊氏乳杆菌株可提高断奶仔猪生长性能；降低仔猪的腹泻率；可促进仔猪肠道损伤的修复，加强肠道屏障功能；同时该乳杆菌具有较强免疫调节功能。本专利技术的另一目的在于提供一种含有上述罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)LR1的无抗饲料。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：本专利技术提供一种罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)LR1在替代饲用抗生素中的应用。所述的罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)LR1，于2015年7月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCCNo.11154。并在“201510751130.3、一株具有益生特征的罗伊氏乳杆菌菌株及其应用”中被公开。所述的罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)LR1的培养条件：培养基采用MRS肉汤培养基，pH5.5，培养温度37±1℃，50～70rpm震荡培养24～48h。所述的MRS肉汤培养基的组成成分为：酪蛋白胨10g/L、牛肉浸粉10g/L、葡萄糖20g/L、酵母提取物5g/L、磷酸氢二钾2g/L、枸橼酸钠2g/L、七水硫酸镁0.58g/L、四水硫酸锰0.25g/L、醋酸钠5g/L、吐温-801mL/L；pH为5.5，121℃高压灭菌15min，放于4℃冰箱中备用；MRS固体培养基(pH5.5)只需要在灭菌前加入15g/L琼脂即可。一种无抗饲料，包括替代饲用抗生素的上述罗伊氏乳杆菌LR1菌株。上述罗伊氏乳杆菌LR1可以通过微生物发酵、分离以及冷冻干燥工艺制备得到益生罗伊氏乳杆菌制剂，然后添加到饲料中替代饲用抗生素；也可通过微生物发酵后直接灌服或饮用罗伊氏乳杆菌培养液。所述的罗伊氏乳杆菌LR1每天饲喂量为1×1010～2×1010CFU/仔猪。所述的罗伊氏乳杆菌制剂可提高断奶仔猪平均日增重，降低料肉比。所述的罗伊氏乳杆菌制剂可降低仔猪断奶后腹泻率。所述的罗伊氏乳杆菌制剂可促进断奶仔猪肠道黏膜损伤的修复，加强肠道屏障功能。所述的罗伊氏乳杆菌制剂具有明显的免疫调节功能，可降低断奶仔猪肠道炎症反应，维护仔猪肌体健康。本专利技术相对于现有技术，具有如下的优点及效果：本专利技术提供罗伊氏乳杆菌是从健康仔猪分离得到，安全性高。在无抗饲粮中添加该菌株可较好防止仔猪断奶后腹泻，该菌株具有较好的促生长作用。该菌株可明显促进因断奶仔猪导致肠道黏膜损伤的修复，且具有免疫调节功能。综上所述，罗伊氏乳杆菌可作为抗生素替代品用于断奶仔猪抗腹泻和促生长作用。附图说明图1是实施例2中断奶公猪的腹泻率的结果。图2是实施例3中断奶阉公猪的生长性能的结果。图3是实施例3中断奶阉公猪的腹泻率的结果。具体实施方式下面结合实施例及附图对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。下列实施例中未注明具体实验条件的实验方法，通常按照常规实验条件。实施例1罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)LR1冻干菌粉制剂制备制备MRS肉汤培养基，其组分为：酪蛋白胨10g、牛肉浸粉10g、葡萄糖20g、酵母提取物5g、磷酸氢二钾2g、枸橼酸钠2g、七水硫酸镁0.58g、四水硫酸锰0.25g、醋酸钠5g、吐温-801mL；将上述成分混溶于1000mL的水中，用浓盐酸调节pH为2.5，121℃高压灭菌15min，放于4℃冰箱中备用；将LactobacillusreuteriLR1菌株接种至MRS肉汤培养基中，37℃下50rpm培养24小时，按照体积比4％的接种量接种到MRS肉汤培养基中，37℃下50rpm培养24小时，之后4℃条件下10000rpm离心10min，收集细胞，然后按质量比1：2加入冻干保护剂(15～20％脱脂奶粉(m/v)+5％海藻糖+0.1％抗坏血酸)，搅拌混匀，于预冷3h，之后置于-80℃冷冻过夜，最后将样品置于真空冻干机内冻干36h。收集冻干菌粉，研磨过筛，实施例2罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)LR1替代饲用抗生素在断奶仔猪上抗腹泻效果选用21日龄杜×(长×大)三元杂交30头断奶公猪进行试验，仔猪分为3组，分别为对照组(基础饲粮)、抗生素组(基础饲粮+抗生素)、和罗伊氏乳杆菌组(基础饲粮+罗伊氏乳杆菌)，每组10头。饲喂试验分组处理见表1。基础饲粮参照NRC2012及国标本文档来自技高网...

【技术保护点】
罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)LR1在替代饲用抗生素中的应用。

【技术特征摘要】
1.罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)LR1在替代饲用抗生素中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的罗伊氏乳杆菌用于提高断奶仔猪平均日增重，降低料肉比。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的罗伊氏乳杆菌用于降低仔猪断奶后腹泻率。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的罗伊氏乳杆菌用于促进断奶仔猪肠道黏膜损伤的修复，加强肠道屏障功能。5.一种无抗饲料...

【专利技术属性】
技术研发人员：王丽，王志林，蒋宗勇，温晓鹿，杨雪芬，马现永，胡胜兰，
申请(专利权)人：广东省农业科学院动物科学研究所，
类型：发明
国别省市：广东;44