一种从毛喉鞘蕊花中提取福斯高林的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种从毛喉鞘蕊花中提取福斯高林的制备方法，其特征在于采用以下步骤：1）选择毛喉鞘蕊花根部切片作为外植体，消毒后接种于MS培养基进行无菌萌发，2～8 d后萌发长出无菌苗；2）取无菌苗胚根为外植体，接入愈伤组织诱导培养基中黑暗培养7天，诱导出愈伤组织，培养温度25oC；3）将愈伤组织干燥后于超临界CO2萃取罐中，加入乙醇作为夹带剂，萃取得到福斯高林初提液；4）将福斯高林初提液通过膜孔径20～100 nm的聚偏氟乙烯超滤膜过滤，所得过滤液经真空浓缩得到福斯高林提取物。本发明专利技术具有提取得率高，所制备的福斯高林纯度高、成本低，便于工业化生产等有益效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于天然产物制备
，特别涉及一种从毛喉鞘蕊花中提取福斯高林的制备方法。
技术介绍
毛喉鞘蕊花[Coleusforskohlii（Wild.）Briq.]系唇形科（Labiatae）鞘蕊花属（ColeusLour）植物，主要分布在印度、马来西亚、菲律宾、巴西等国家，目前我国云南东川和湖北通州两地也引进种植了该种植物。毛喉鞘蕊花中的活性成分倍半菇类化合物具有强降压和强心作用，可用于治疗心血管疾病、感冒、咳嗽和呼吸紊乱等疾病。福斯高林（forskolin）是从毛喉鞘蕊花根部提取的活性成分，是唯一已知源自植物的能直接激活腺苷酸环化酶的纯天然活性成分。腺苷酸环化酶被激活后，可升高环磷酸腺苷的浓度，进而提高激素敏感酯酶的活性，加快脂肪分解。因此，福斯高林作为化妆品中的功效活性物，可起到通过外用涂抹减少局部脂肪堆积的作用，在瘦身类化妆品中具有良好的应用前景。然而，现有研究表明，福斯高林在原植物中含量极低，其中根部0.14%，叶0.07%，茎0.04%，并且野生资源有限，栽培方法及条件尚有不少困难。另一方面，应用传统的化学全合成法获得的福斯高林价格十分昂贵，使得其在未来市场化生产和的推广中障碍重重，进而难以惠及普通大众，同时化学全合成法还存在高污染、高消耗、多副反应和收率低等缺点，故而难为有效的获取高纯度福斯高林的方法。因此，提高毛喉鞘蕊花中提取福斯高林的得率和纯度是十分有必要的。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是，提供一种从毛喉鞘蕊花中提取福斯高林的制备方法，该方法提取得率高，所制备的福斯高林纯度高、成本低，便于工业化生产。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案具体如下：一种从毛喉鞘蕊花中提取福斯高林的制备方法，其特征在于采用以下步骤：1）选择毛喉鞘蕊花根部切片作为外植体，消毒后接种于MS培养基（购于Sigma，M5524）进行无菌萌发，2～8d后萌发长出无菌苗；2）取无菌苗胚根为外植体，接入愈伤组织诱导培养基中黑暗培养7天，诱导出愈伤组织，培养温度25oC，愈伤组织诱导培养基pH6.0；所述愈伤组织诱导培养基为含有2.5~8mg/L2,4-二氯苯氧乙酸（CAS94-75-7）、0.1~1mg/L6-糠基氨基嘌呤（CAS208-382-2）、0.8~4%琼脂的MS基础培养基（购于Sigma）；3）将愈伤组织于50oC真空干燥箱中干燥至恒重，取干燥后的愈伤组织1~10g于超临界CO2萃取罐中，加入乙醇（CAS64-17-5，分析纯，购于国药集团）作为夹带剂，控制乙醇添加量为5~20mg/L，CO2流量为10~50kg/h，萃取压力10～100MPa，萃取温度25～45℃，萃取时间30～180min，得到福斯高林初提液；4）将福斯高林初提液通过膜孔径20～100nm的聚偏氟乙烯超滤膜（陶氏DowTMSFP系列）过滤，控制过滤压力0.2～0.5MPa，过滤温度25～40℃；5）上述过滤液经真空浓缩（miVacDuo真空离心浓缩仪，英国GeneVac）得到福斯高林提取物。真空浓缩的条件：真空度30~80KPa，浓缩温度35~65℃，离心转速1000~3000rpm，浓缩时间10~90min。本专利技术应用植物细胞工程技术，对毛喉鞘蕊花根部进行愈伤组织培养，利用植物组织的形态分化加强次生产物的形成和积累，提高活性物含量，使得愈伤组织中福斯高林含量高于1.16%，是原植物根部（0.14%）含量的8倍多；采用超临界CO2萃取法，对毛喉鞘蕊花愈伤组织进行萃取，超滤膜对提取液进行过滤，提高提取率和产物纯度，获得福斯高林的纯度大于90%，提取率高于1%。综上所述，本专利技术具有提取得率高，所制备的福斯高林纯度高、成本低，便于工业化生产等有益效果。具体实施方式以下举出的实施例是对本专利技术进行进一步详细说明，但本专利技术不仅限于这些实施例。实施例1：一种从毛喉鞘蕊花中提取福斯高林的制备方法，步骤如下：1）取毛喉鞘蕊花根部切片，消毒后接种于MS培养基进行无菌萌发，5d后萌发长出无菌苗；2）切取无菌苗的胚根接入愈伤组织诱导培养基中黑暗（0lx）培养7天，诱导出愈伤组织，培养温度25oC，培养基pH6.0。所述愈伤组织诱导培养基为含有2.5mg/L2,4-二氯苯氧乙酸、0.5mg/L6-糠基氨基嘌呤、2%琼脂的MS基础培养基；2）将愈伤组织于50oC真空干燥箱中干燥至恒重，称取10g干燥后的愈伤组织于超临界CO2萃取罐中，加入乙醇作为夹带剂，控制乙醇添加量为15mg/L，CO2流量为30kg/h，萃取压力60MPa，萃取温度45℃，萃取时间120min，得到福斯高林初提液；3）上述过程中提取的福斯高林初提液通过膜孔径为50nm的聚偏氟乙烯超滤膜过滤，控制过滤压力为0.45MPa，过滤温度为25℃；4）过滤后真空浓缩得到福斯高林样品，真空度30KPa，浓缩温度50℃，离心转速1000rpm，浓缩时间30min；实施例1所得毛喉鞘蕊花愈伤组织中福斯高林含量为1.22%，提取产物福斯高林纯度为99.2%，提取率1.21%。实施例2：一种从毛喉鞘蕊花中提取福斯高林的制备方法，步骤如下：1）取毛喉鞘蕊花根部切片，消毒后接种于MS培养基进行无菌萌发，8d后萌发长出无菌苗；2）切取无菌苗的胚根接入愈伤组织诱导培养基中黑暗（0lx）培养7天，诱导出愈伤组织，培养温度25oC，培养基pH6.0。所述愈伤组织诱导培养基为含有5mg/L2,4-二氯苯氧乙酸、0.8mg/L6-糠基氨基嘌呤、4%琼脂的MS基础培养基；2）将愈伤组织于50oC真空干燥箱中干燥至恒重，称取5g干燥后的愈伤组织于超临界CO2萃取罐中，加入乙醇作为夹带剂，控制乙醇添加量为5mg/L，CO2流量为50kg/h，萃取压力80MPa，萃取温度25℃，萃取时间60min，得到福斯高林初提液；3）上述过程中提取的福斯高林初提液通过膜孔径为20nm的聚偏氟乙烯超滤膜过滤，控制过滤压力为0.20MPa，过滤温度为35℃；4）过滤液经真空浓缩得到福斯高林样品，真空度60KPa，浓缩温度35℃，离心转速3000rpm，浓缩时间60min；实施例2所得毛喉鞘蕊花愈伤组织中福斯高林含量为1.19%，提取所得福斯高林纯度为90.2%，提取率1.07%。实施例3：一种从毛喉鞘蕊花中提取福斯高林的制备方法，步骤如下：1）取毛喉鞘蕊花根部切片，消毒后接种于MS培养基进行无菌萌发，2d后萌发长出无菌苗；2）切取无菌苗的胚根接入愈伤组织诱导培养基中黑暗（0lx）培养7天，诱导出愈伤组织，培养温度25oC，培养基pH6.0。所述愈伤组织诱导培养基为含有3mg/L2,4-二氯苯氧乙酸、0.1mg/L6-糠基氨基嘌呤、0.8%琼脂的MS基础培养基；2）将愈伤组织于50oC真空干燥箱中干燥至恒重，称取2g干燥后的愈伤组织于超临界CO2萃取罐中，加入乙醇作为夹带剂，控制乙醇添加量为20mg/L，CO2流量为10kg/h，萃取压力10MPa，萃取温度35℃，萃取时间30min，得到福斯高林初提液；3）上述过程中提取的福斯高林初提液通过膜孔径为100nm的聚偏氟乙烯超滤膜过滤，控制过滤压力为0.30MPa，过滤温度为30℃；4）过滤液经真空浓缩得到福斯高林样品，真空度80KPa，浓缩温度60本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从毛喉鞘蕊花中提取福斯高林的制备方法，其特征在于采用以下步骤：1）选择毛喉鞘蕊花根部切片作为外植体，消毒后接种于MS培养基进行无菌萌发，2～8 d后萌发长出无菌苗；2）取无菌苗胚根为外植体，接入愈伤组织诱导培养基中黑暗培养7天，诱导出愈伤组织，培养温度25oC，愈伤组织诱导培养基pH 6.0；所述愈伤组织诱导培养基为含有2.5~8 mg/L 2,4‑二氯苯氧乙酸、0.1~1 mg/L 6‑糠基氨基嘌呤、0.8~4%琼脂的MS基础培养基；3）将愈伤组织于50oC真空干燥箱中干燥至恒重，取干燥后的愈伤组织1~10 g于超临界CO2萃取罐中，加入乙醇作为夹带剂，控制乙醇添加量为5~20 mg/L，CO2流量为10~50 kg/h，萃取压力10～100 MPa，萃取温度25～45 ℃，萃取时间30～180 min，得到福斯高林初提液；4）将福斯高林初提液通过膜孔径20～100 nm的聚偏氟乙烯超滤膜过滤，控制过滤压力0.2～0.5 MPa，过滤温度25～40℃，所得过滤液经真空浓缩得到福斯高林提取物。

【技术特征摘要】
1.一种从毛喉鞘蕊花中提取福斯高林的制备方法，其特征在于采用以下步骤：1）选择毛喉鞘蕊花根部切片作为外植体，消毒后接种于MS培养基进行无菌萌发，2～8d后萌发长出无菌苗；2）取无菌苗胚根为外植体，接入愈伤组织诱导培养基中黑暗培养7天，诱导出愈伤组织，培养温度25oC，愈伤组织诱导培养基pH6.0；所述愈伤组织诱导培养基为含有2.5~8mg/L2,4-二氯苯氧乙酸、0.1~1mg/L6-糠基氨基嘌呤、0.8~4%琼脂的MS基础培养基；3）将...

【专利技术属性】
技术研发人员：晏青，陈玉燕，金激，孙晓昂，杜正芳，易聪聪，毕永贤，蒋丽刚，
申请(专利权)人：珀莱雅化妆品股份有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33