本发明专利技术公开了一种从杧果中提取、分离和纯化欧南斯皮酮D的方法。将杧果晒干、去核粉碎后，乙醇回流提取，D101大孔树脂富集，后采用高速逆流色谱进行分离和纯化。该发明专利技术的优势：本发明专利技术（1）先用大孔树脂有效成分进行富集，降低了后续工序的处理量；（2）采用高速逆流色谱进行分离和纯化，不仅实现了连续化作业、动态逆流提取，且提高了有效成分的得率。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种药用植物领域，一种从杧果中提取、分离和纯化欧南斯皮酮D的方法。
技术介绍
欧南斯皮酮D（ArurasperoneD）是从漆树科Anacardiaceae杧果属MangiferaL.杧果Mangiferaindica的果实中提取出来的一种化合物，分子量：556.53，分子式C31H24O10，药理研究表明，欧南斯皮酮D具有中枢镇静剂(动物试验)。目前，国内外对欧南斯皮酮D的研究较少，尚未检索到制备欧南斯皮酮D的方法报道。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种欧南斯皮酮D的制备方法，以填补该化合物制备方法的空白。本专利技术的目的主要通过以下技术过程来实现：具体步骤如下：（1）乙醇提取：杧果切片，晒干，用粉碎机粉碎3kg，得到杧果粉末，过16目筛，将杧果粉末于若干滤纸筒中，在85℃水浴中用250mL60-95%的乙醇回流提取6-12h，收集杧果乙醇提取液。减压除去部分乙醇，得到浸膏适量，待用。（2）D101大孔树脂富集：将D101型大孔树脂采用湿法装柱(树脂量以湿体积计为200-300mL,径高比为1∶（10-15）)，先用乙醇清洗至洗出液澄清后，再用蒸馏水脱出至无醇味，备用。称取上述杧果乙醇提取物浸膏50g，经200~500mL的60~95%乙醇充分溶解后，向其中加入80~150mL水，静置过夜。将静置后的药液抽滤（0.22μm的滤膜），减压回收上清液中的乙醇除净，所得的杧果水溶液，用D101型大孔树脂按30%~100%的甲醇梯度进行洗脱，分段收集洗脱液。用HPLC进行分析，确定选用90-100%甲醇洗脱液作为杧果粗提物，待分离。按上述方法共得到杧果乙醇提取物浸膏130g，得到待分离纯化的杧果粗提物。（3）高速逆流色谱进行分离和纯化：用分液漏斗中配制石油醚-氯仿-甲醇-水的两相溶剂体系，充分摇匀后，室温静置过夜。两相溶剂分配达到平衡后，按上相和下相分开放入棕色广口瓶中，超声脱气20min，备用。准确称取杧果粗提物6.0g溶解于下相中，超声溶解，得到19g/L的样品溶液，备用。将两相溶剂系统中已超声脱气的上相为固定相，下相为流动相，以10~25mL/min的速度泵入高速逆流色谱分离管中，待上相充满分离管后，顺时针旋转，缓慢均匀调节主机转速至600~900r/min，同时以1.5mL/min的速度将下相注入其中，待两相平衡，将适量杧果粗提物溶液注入分离管中，采集数据，按照色谱峰收集目标成分。所述步骤（2）中用到的大孔树脂是经过预处理的。所述步骤（2）用D101型大孔树脂按30%~100%的甲醇梯度进行洗脱时，甲醇的浓度是逐渐递增的。所述步骤（3）用到的溶剂系统石油醚-氯仿-甲醇-水的体积比为（3-6）∶（2-9）∶（1-7）∶（3-8）。该专利技术所说的一种从杧果中提取、分离和纯化欧南斯皮酮D的方法的优势在于：本专利技术（1）先用大孔树脂有效成分进行富集，降低了后续工序的处理量；（2）采用高速逆流色谱进行分离和纯化，不仅实现了连续化作业、动态逆流提取，且提高了有效成分的得率。下面结合具体实施例对本专利技术做进一步的解释。实例1杧果切片，晒干，用粉碎机粉碎3kg，得到杧果粉末，过16目筛，将杧果粉末于若干滤纸筒中，在85℃水浴中用250mL75%的乙醇回流提取10h，收集杧果乙醇提取液。减压除去部分乙醇，得到浸膏适量，待用。将D101型大孔树脂采用湿法装柱(树脂量以湿体积计为250mL,径高比为1∶12)，先用乙醇清洗至洗出液澄清后，再用蒸馏水脱出至无醇味，备用。称取上述杧果乙醇提取物浸50g，经300mL的65%乙醇充分溶解后，向其中加入100mL水，静置过夜。将静置后的药液抽滤（0.22μm的滤膜），减压回收上清液中的乙醇除净，所得的杧果水溶液，用D101型大孔树脂按30%~100%的甲醇梯度进行洗脱，分段收集洗脱液。用HPLC进行分析，确定选用100%甲醇洗脱液作为杧果粗提物，待分离。按上述方法共得到杧果乙醇提取物浸膏130g，得到待分离纯化的杧果粗提物。用分液漏斗中配制石油醚-氯仿-甲醇-水的两相溶剂体系，充分摇匀后，室温静置过夜。两相溶剂分配达到平衡后，按上相和下相分开放入棕色广口瓶中，超声脱气20min，备用。准确称取杧果粗提物6.0g溶解于下相中，超声溶解，得到19g/L的样品溶液，备用。将两相溶剂系统中已超声脱气的上相为固定相，下相为流动相，以15mL/min的速度泵入高速逆流色谱分离管中，待上相充满分离管后，顺时针旋转，缓慢均匀调节主机转速至700r/min，同时以1.5mL/min的速度将下相注入其中，待两相平衡，将适量杧果粗提物溶液注入分离管中，采集数据，按照色谱峰收集目标成分。HPLC检测含量为97.86%。实例2杧果切片，晒干，用粉碎机粉碎3kg，得到杧果粉末，过16目筛，将杧果粉末于若干滤纸筒中，在85℃水浴中用250mL85%的乙醇回流提取12h，收集杧果乙醇提取液。减压除去部分乙醇，得到浸膏适量，待用。将D101型大孔树脂采用湿法装柱(树脂量以湿体积计为300mL,径高比为1∶15)，先用乙醇清洗至洗出液澄清后，再用蒸馏水脱出至无醇味，备用。称取上述杧果乙醇提取物浸膏50g，经500mL的85%乙醇充分溶解后，向其中加入130mL水，静置过夜。将静置后的药液抽滤（0.22μm的滤膜），减压回收上清液中的乙醇除净，所得的杧果水溶液，用D101型大孔树脂按30%~100%的甲醇梯度进行洗脱，分段收集洗脱液。用HPLC进行分析，确定选用90%甲醇洗脱液作为杧果粗提物，待分离。按上述方法共得到杧果乙醇提取物浸膏130g，得到待分离纯化的杧果粗提物。用分液漏斗中配制石油醚-氯仿-甲醇-水的两相溶剂体系，充分摇匀后，室温静置过夜。两相溶剂分配达到平衡后，按上相和下相分开放入棕色广口瓶中，超声脱气20min，备用。准确称取杧果粗提物6.0g溶解于下相中，超声溶解，得到19g/L的样品溶液，备用。将两相溶剂系统中已超声脱气的上相为固定相，下相为流动相，以18mL/min的速度泵入高速逆流色谱分离管中，待上相充满分离管后，顺时针旋转，缓慢均匀调节主机转速至800r/min，同时以1.5mL/min的速度将下相注入其中，待两相平衡，将适量杧果粗提物溶液注入分离管中，采集数据，按照色谱峰收集目标成分。HPLC检测含量为98.09%。实例3杧果切片，晒干，用粉碎机粉碎3kg，得到杧果粉末，过16目筛，将杧果粉末于若干滤纸筒中，在85℃水浴中用250mL95%的乙醇回流提取8h，收集杧果乙醇提取液。减压除去部分乙醇，得到浸膏适量，待用。将D101型大孔树脂采用湿法装柱(树脂量以湿体积计为200mL,径高比为1∶10)，先用乙醇清洗至洗出液澄清后，再用蒸馏水脱出至无醇味，备用。称取上述杧果乙醇提取物浸膏50g，经400mL的75%乙醇充分溶解后，向其中加入80mL水，静置过夜。将静置后的药液抽滤（0.22μm的滤膜），减压回收上清液中的乙醇除净，所得的杧果水溶液，用D101型大孔树脂按30%~100%本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种从杧果中提取、分离和纯化欧南斯皮酮D的方法，其特征在于制备具体步骤如下：（1）乙醇提取：杧果切片，晒干，用粉碎机粉碎3kg，得到杧果粉末，过16目筛，将杧果粉末于若干滤纸筒中，在85℃水浴中用250mL60‑95%的乙醇回流提取6‑12h，收集杧果乙醇提取液；减压除去部分乙醇，得到浸膏适量，待用；（2）D101大孔树脂富集：将D101型大孔树脂采用湿法装柱(树脂量以湿体积计为200‑300mL,径高比为1∶（10‑15）)，先用乙醇清洗至洗出液澄清后，再用蒸馏水脱出至无醇味，备用；称取上述杧果乙醇提取物浸膏50g，经200~500mL的60~95%乙醇充分溶解后，向其中加入80~150mL水，静置过夜；将静置后的药液抽滤（0.22μm的滤膜），减压回收上清液中的乙醇除净，所得的杧果水溶液，用D101型大孔树脂按30%~100%的甲醇梯度进行洗脱，分段收集洗脱液；用HPLC进行分析，确定选用90‑100%甲醇洗脱液作为杧果粗提物，待分离；按上述方法共得到杧果乙醇提取物浸膏130g，得到待分离纯化的杧果粗提物；（3）高速逆流色谱进行分离和纯化：用分液漏斗中配制石油醚‑氯仿‑甲醇‑水的两相溶剂体系，充分摇匀后，室温静置过夜；两相溶剂分配达到平衡后，按上相和下相分开放入棕色广口瓶中，超声脱气20min，备用；准确称取杧果粗提物6.0g溶解于下相中，超声溶解，得到19g/L的样品溶液，备用；将两相溶剂系统中已超声脱气的上相为固定相，下相为流动相，以10~25mL/min的速度泵入高速逆流色谱分离管中，待上相充满分离管后，顺时针旋转，缓慢均匀调节主机转速至600~900r/m in，同时以1.5mL/min的速度将下相注入其中，待两相平衡，将适量杧果粗提物溶液注入分离管中，采集数据，按照色谱峰收集目标成分。...
【技术特征摘要】
1.一种从杧果中提取、分离和纯化欧南斯皮酮D的方法，其特征在于制备具体步骤如下：
（1）乙醇提取：杧果切片，晒干，用粉碎机粉碎3kg，得到杧果粉末，过16目筛，将杧果粉末于若干滤纸筒中，在85℃水浴中用250mL60-95%的乙醇回流提取6-12h，收集杧果乙醇提取液；减压除去部分乙醇，得到浸膏适量，待用；（2）D101大孔树脂富集：将D101型大孔树脂采用湿法装柱(树脂量以湿体积计为200-300mL,径高比为1∶（10-15）)，先用乙醇清洗至洗出液澄清后，再用蒸馏水脱出至无醇味，备用；称取上述杧果乙醇提取物浸膏50g，经200~500mL的60~95%乙醇充分溶解后，向其中加入80~150mL水，静置过夜；将静置后的药液抽滤（0.22μm的滤膜），减压回收上清液中的乙醇除净，所得的杧果水溶液，用D101型大孔树脂按30%~100%的甲醇梯度进行洗脱，分段收集洗脱液；用HPLC进行分析，确定选用90-100%甲醇洗脱液作为杧果粗提物，待分离；按上述方法共得到杧果乙醇提取物浸膏130g，得到待分离纯化的杧果粗提物；（3）高速...
【专利技术属性】
技术研发人员：王宁，顾振华，刘敏，
申请(专利权)人：王宁，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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