中药材中马兜铃酸类化合物含量测定方法技术

本发明专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种中药材中马兜铃酸类化合物含量测定方法。本发明专利技术的所述方法能够同时测定含马兜铃酸类中药材中马兜铃酸A，马兜铃酸B，马兜铃酸C，马兜铃酸D的含量，不仅能完善含马兜铃酸类化合物的中药材的质量评价，而且还能为马兜铃酸类化合物安全性评价提供科学依据。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种中药材中马兜铃酸类化合物含量测定方法。
技术介绍
马兜铃酸类化合物是一类硝基菲羧酸，这类化合物天然存在于诸如马兜铃属(Aristolochia)及细辛属(Asarum)等马兜铃科植物中，其中诸如广防己、青木香、天仙藤、马兜铃、寻骨风、朱砂莲等药材仍然被列入2015年版中国药典中，早期发现马兜铃酸类化合物具有抗癌和抗感染等活性，可用于支气管炎、扁桃体炎、肾炎、前列腺炎等感染性疾病，但现在马兜铃酸类成分已经被确认为有明确的肾毒性、致癌、致畸作用，用药不当产生强烈的毒性反应，危急病人生命健康。因此，这些中药材中马兜铃酸类物质的质量控制研究可以为毒理学研究和保证临床用药安全提供科学的指导依据。目前，文献报道的含马兜铃酸化合物的中药材质量控制指标仅有马兜铃酸A的测定，还没有进行过系统的马兜铃酸类系列化合物的质量控制方法研究，这极大程度上限制了对马兜铃酸类化合物的整体质量控制研究及安全性评价。
技术实现思路
为了克服现有技术中所存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种中药材中马兜铃酸类化合物含量测定方法。为了实现上述目的以及其他相关目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术的第一方面，提供一种中药材中马兜铃酸类化合物含量测定方法，包括以下步骤：(1)供试品溶液制备：称取中药材，经前处理，得供试品溶液；(2)对照品溶液制备：称取标准品，溶解，得对照品溶液；(3)测定：采用HPLC分别对供试品溶液和对照品溶液进行定性或定量检测。优选地，所述中药材选自：马兜铃、青木香、天仙藤、寻骨风、朱砂莲。优选地，所述马兜铃酸类化合物选自马兜铃酸A、马兜铃酸B、马兜铃酸C、马兜铃酸D。优选地，步骤(1)中，所述前处理包括如下步骤：称取中药材，加入提取溶剂提取，离心，取上清液进行过滤。进一步优选地，所述提取溶剂为甲醇。更优选，所述提取溶剂为体积百分比为70％的甲醇水溶液。进一步优选地，每0.2g的中药材中加入提取溶剂3.0～5.0ml提取溶剂。更优选，每0.2g的中药材中加入提取溶剂4.0ml提取溶剂。进一步优选地，加入提取溶剂提取时进行超声。更优选，所述超声的时间为20～40min。更优选，所述超声的时间为30min。进一步优选地，所述离心的速度是3000～5000rpm。更优选，所述离心的速度是3500rpm。进一步优选地，所述过滤采用微孔滤膜。更优选，采用0.22um微孔滤膜过滤。进一步优选地，过滤后，放弃初滤液后，取续滤液作为供试品。所述中药材称取时，应当精密称取。优选地，步骤(2)中，所述标准品选自马兜铃酸A、马兜铃酸B、马兜铃酸C、马兜铃酸D。优选地，步骤(2)中，对照品溶液的配置方法包括步骤：分别精密称取标准品适量，加入DMF溶解，然后再加入甲醇配置成标准品溶液，作为对照品溶液。进一步优选地，所述甲醇为体积百分比为50～100％的甲醇水溶液。更优选地，所述甲醇为体积百分比为70％的甲醇水溶液。优选地，步骤(2)中，对照品溶液中各标准品的浓度为50～100μg/ml。优选地，步骤(3)中，所述定性方法包括步骤：采用HPLC在相同色谱条件下分别测定供试品溶液和对照品溶液，将获得的供试品溶液的色谱图，与对照品溶液的色谱图进行比较，根据相对保留时间和特征峰，确认供试品溶液中马兜铃酸类化合物的特征峰，从而对供试品溶液中马兜铃酸类化合物成分进行定性。优选地，步骤(3)中，所述定量方法包括步骤：采用HPLC在相同色谱条件下分别测定供试品溶液和对照品溶液，将获得的供试品溶液的色谱图及其峰面积，按照内标法计算供试品溶液中马兜铃酸类化合物成分的含量。优选地，所述内标法是指：分别移取一系列不同体积的标准品溶液，配置一系列不同浓度的对照品溶液，采用HPLC进样分析，获得对照品溶液中马兜铃酸类化合物含量与峰面积的线形关系，计算得到各标准工作曲线的回归方程；再将供试品采用HPLC检测，将获得的供试品中马兜铃酸类化合物的色谱峰面积分别代入相应的标准曲线工作回归方程中，计算可得到相应马兜铃酸类化合物的含量。优选地，步骤(3)中，HPLC所用色谱柱为：AgilentproshellEC-C184.6*50mm2.7um。优选地，流动相中，A相为乙腈，B相为0.1～0.5％(体积百分含量)乙酸水溶液，A相与B相的体积比为：(30～70)：(70～30)。更优选地，流动相中，A相为乙腈，B相为0.2％(体积百分含量)乙酸水溶液，A相与B相的体积比为40：60。优选地，流速为0.5～1.5mlmin-1。更优选为0.65mlmin-1。优选地，柱温为20～40℃。更优选为30℃。优选地，检测波长为200～300nm。更优选地为254nm。优选地，进样量为5～30μL。更优选为10μL。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术的方法能够同时测定含马兜铃酸类中药材中马兜铃酸A，马兜铃酸B，马兜铃酸C，马兜铃酸D的含量，不仅能完善含马兜铃酸类化合物的中药材的质量评价，而且还能为马兜铃酸类化合物安全性评价提供科学依据。附图说明图1为马兜铃酸A对照品色谱图。图2为马兜铃酸B对照品色谱图。图3为马兜铃酸C对照品色谱图。图4为马兜铃酸D对照品色谱图。图5为马兜铃酸A，马兜铃酸B，马兜铃酸C,马兜铃酸D对照品色谱图。图6为马兜铃药材中含量测定色谱图。具体实施方式在进一步描述本专利技术具体实施方式之前，应理解，本专利技术的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本专利技术实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本专利技术的保护范围。下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件，或者按照各制造商所建议的条件。当实施例给出数值范围时，应理解，除非本专利技术另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本专利技术中使用的所有技术和科学术语与本
技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本
的技术人员对现有技术的掌握及本专利技术的记载，还可以使用与本专利技术实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本专利技术。除非另外说明，本专利技术中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本
常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技术及相关领域的常规技术。这些技术在现有文献中已有完善说明，具体可参见Sambrook等MOLECULARCLONING：ALABORATORYMANUAL，Secondedition，ColdSpringHarborLaboratoryPress，1989andThirdedition，2001；Ausubel等，CURRENTPROTOCOLSINMOLECULARBIOLOGY，JohnWiley&Sons，NewYork，1987andperiodicupdates；theseriesMETHODSINENZYMOLOGY，AcademicPress，SanDiego；Wolffe，CHROMATINSTRUCTUREANDFUNCTION，Thirdedition，AcademicPress，SanDiego，1998；METHODSINENZYM本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种中药材中马兜铃酸类化合物含量测定方法，包括以下步骤：(1)供试品溶液制备：称取中药材，经前处理，得供试品溶液；(2)对照品溶液制备：称取标准品，溶解，得对照品溶液；(3)测定：采用HPLC分别对供试品溶液和对照品溶液进行定性或定量检测。

【技术特征摘要】
1.一种中药材中马兜铃酸类化合物含量测定方法，包括以下步骤：(1)供试品溶液制备：称取中药材，经前处理，得供试品溶液；(2)对照品溶液制备：称取标准品，溶解，得对照品溶液；(3)测定：采用HPLC分别对供试品溶液和对照品溶液进行定性或定量检测。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述中药材选自：马兜铃、青木香、天仙藤、寻骨风、朱砂莲。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述马兜铃酸类化合物选自马兜铃酸A、马兜铃酸B、马兜铃酸C、马兜铃酸D。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述前处理包括如下步骤：称取中药材，加入提取溶剂提取，离心，取上清液进行过滤。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，还包括以下特征中的任一项或多项：1)所述提取溶剂为甲醇；2)每0.2g的中药材中加入提取溶剂3.0～5.0ml提取溶剂；3)加入提取溶剂提取时进行超声；4)所述离心的速度是3000～5000rpm；5)所述过滤采用微孔滤膜。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述标准品选自马兜铃酸A、马兜铃酸B、马兜铃酸C、马兜铃酸D。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，对照品溶液的配置方法包括步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨洲，辛振强，刘倩，许纪锋，夏梅玲，谢天培，钱勇，
申请(专利权)人：上海诗丹德标准技术服务有限公司，上海诗丹德生物技术有限公司，上海佰年诗丹德检测技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31