利用鱼的GPX活性检测水体污染程度的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用鱼的谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性检测水体污染程度的方法。本方法通过获取需要检测水域中的鱼，并采用所述鱼的GPX作为敏感生物标记物，实现检测待测水体的污染。本方法利用鱼的GPX作为敏感生物标记物，可敏感地监测菲(Phe)等多环芳烃污染和多氯联苯(PCB)污染的污染程度和危害程度，为水体生态环境监测、毒理诊断、调控和防治提供准确、快速的科学方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及利用生物敏感标志物检测水体污染，更具体地说，本专利技术涉及一种利用鱼的GPX活性检测水体污染程度的方法。
技术介绍
随着城镇化和工农业的迅猛发展，水体污染日益加剧。水域中的水体污染物也各有不同，有的为单一污染物，也有多种污染物混合污染。对于未知水域中，不管是单一污染物的污染，还是多种污染物的污染，怎样获悉水体是否被污染，甚至知道其污染程度，并能直观判断该水域的污染对生物的危害已达到何种程度。对于水体中受到重金属或菲一种或两种污染时，用化学方法可以定性、定量检测到污染，但是无法检测其危害性和危害程度以及污染程度的准确性。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是解决至少上述问题和/或缺陷，并提供至少后面将说明的优点。本专利技术还有一个目的就是提供一种利用鱼的GPX活性检测水体污染程度的方法，本方法利用鱼的GPX作为敏感生物标记物，可敏感地监测多氯联苯污染的污染程度和危害程度，还可以敏感检测菲(Phe)等多环芳烃污染的污染程度和危害程度，为水体生态环境监测、毒理诊断、调控和防治提供准确、快速的科学方法。为了实现根据本专利技术的这些目的和其他优点，提供了一种利用鱼的GPX活性检测水体污染程度的方法。本检测方法为获取需要检测的水域中的鱼，并采用所述鱼的GPX作为敏感生物标记物。其中，GPX为谷胱甘肽过氧化物酶的简写。优选的是，所述鱼的GPX活性与水体中菲的浓度呈负相关。优选的是，所述鱼的GPX活性与水体中多氯联苯的浓度呈负相关。优选的是，建立鱼的GPX活性与污染物浓度关系的标准曲线，然后将待检测水域中的同种同大小的鱼的GPX活性与所述标准曲线比对，得到待检测水域中水体污染物浓度。优选的是，所述标准曲线为鱼的GPX活性与菲浓度关系的曲线，或者鱼的GPX活性与多氯联苯浓度关系的曲线。优选的是，所述鱼的GPX活性测定包括如下步骤：步骤一、待测样本处理：制备全鱼匀浆，然后离心分层，取上层清液为待测样本；步骤二、待测样本蛋白浓度的测定：分别将等量的双蒸水、蛋白标准品和待测样本加入1、2、3号管中，并分别向各管加入等量的考马斯亮蓝显色剂，分别混匀，静置，预热，用分光光度计并用双蒸水调零后，于1cm光径，在波长595nm处，测定1、2、3号管中物质的光密度(OD)，分别记为1号OD值，2号OD值，3号OD值，然后代入如下公式计算得待测样本蛋白浓度：步骤三、酶促反应：使用谷胱甘肽过氧化物酶测定试剂盒进行测定，分别在对照管和测定管中加入0.2mL浓度为1mmol/L的谷胱甘肽(GSH)，只在测定管中加入0.2mL待测样本，然后将所述对照管和测定管置于37℃水浴预温5分钟后，分别各加入试剂一应用液0.1mL，于37℃反应2.5-5分钟，再分别各加入试剂二应用液2mL，只在对照管中加入待测样本0.2mL，然后分别混匀，用冷冻离心机，1000g，4℃，离心10分钟，分别取上清液稀释n倍作显示反应；步骤四、显色反应：在空白管中加入1mL浓度为1mmol/L的GSH,在标准管中加入1mL浓度为20umol/L的GSH标准品应用液，在对照管中是其稀释n倍的上清液1mL，在测定管中是其稀释n倍的上清液1mL，然后分别在空白管、标准管、对照管和测定管中各加入试剂三应用液1mL，试剂四应用液0.25mL和试剂五应用液0.05mL，然后分别混匀，室温静置5-10分钟，于412nm处，用1cm光环比色杯和双蒸水调零后，测各管OD值，分别记为空白管OD值，标准管OD值，对照管OD值和测定管OD值，然后代入如下公式计算得鱼的谷胱甘肽过氧化物酶活性：优选的是，所述步骤一中全鱼匀浆为全鱼与浓度0.65％的鱼用生理盐水按质量比为1:9配置，且所述离心分层用冷冻离心机，11028g，4℃，离心10min。优选的是，所述步骤二中等量的双蒸水、蛋白标准品和待测样本均为0.05ml，蛋白标准品的浓度为0.563g/L，分别加入考马斯亮蓝显色剂的量均为3ml，静置10min；所述步骤三中反应时间为2.5分钟，稀释倍数n＝5；所述步骤四中室温静置10分钟。优选的是，所述鱼为海水青鳉或淡水青鳉。本专利技术至少包括以下有益效果：本专利技术以水域中鱼的GPX作为敏感生物标记物，通过对比GPX活性就可以检测出水体是否受到污染，不但检测准确和敏感，而且直观反映该水域的污染对生物的危害程度。特别是鱼的GPX活性与水体中菲或多氯联苯的一种或一种以上的浓度均呈负相关，所以检测到鱼的GPX活性越低，其的水域受污染的程度越大，并且明示受到菲或多氯联苯的一种或一种以上的污染。通过建立鱼的GPX活性与菲浓度关系的曲线，或者鱼的GPX活性与多氯联苯浓度关系的曲线，可以将待检测水域中与建立标准曲线同种同大小的鱼的GPX活性比对，获得水域中菲或多氯联苯浓度或综合污染浓度值，并且能反映出目前的污染程度对生物是否在安全范围或受到危害。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书能够据以实施。实施例1本方案利用鱼的GPX活性检测水体污染程度的方法，获取需要检测的水域中的鱼，并采用所述鱼的GPX作为敏感生物标记物，通过检测鱼的GPX活性，然后比对同类同大小的鱼的GPX活性与某污染物浓度关系的标准曲线，就可以检测出水体是否受到某污染物的污染，不但检测准确，且敏感度高，而且能直观反映该水域的某污染物的污染程度及其对生物的危害程度。实施例2本方案利用鱼的GPX活性检测水体污染程度的方法，获取需要检测的水域中的鱼，并采用所述鱼的GPX作为敏感生物标记物，根据鱼的GPX活性与水体中菲(Phe)等多环芳烃的浓度呈负相关，通过测定鱼的GPX活性，然后比对同类同大小的鱼的GPX活性与菲浓度关系的标准曲线，如果检测样本鱼的GPX活性比正常情况下的同类同大小的鱼的GPX活性低，则判断水域受到菲的污染；如果比正常情况下的同类同大小的鱼的GPX活性越低，则判断水域的菲污染越严重，甚至可判断是否达到危害水体生物的程度。实施例3本方案利用鱼的GPX活性检测水体污染程度的方法，获取需要检测的水域中的鱼，并采用所述鱼的GPX作为敏感生物标记物，根据鱼的GPX活性与水体中多氯联苯的浓度呈负相关，通过测定鱼的GPX活性，然后比对与建立标准曲线的鱼同类同大小的鱼的GPX活性与多氯联苯浓度关系的标准曲线，如果检测样本鱼的GPX活性比正常情况下的同类同大小的鱼的GPX活性低，则判断水域受到多氯联苯的污染；如果比正常情况下的同类同大小的鱼的GPX活性越低，则判断水域的多氯联苯污染越严重，甚至可判断是否达到危害水体生物的程度。实施例4本方案利用鱼的GPX活性检测水体污染程度的方法，获取需要检测的水域中的鱼，并采用所述鱼的GPX作为敏感生物标记物。首先通过实验建立鱼的GPX活性与某污染物浓度关系的标准曲线，然后将待检测水域中的同种同大小的鱼的GPX活性与所述标准曲线比对，得到待检测水域中某污染物的浓度。通过实验建立鱼的GPX活性与菲(Phe)浓度关系的标准曲线如下：本实验的检测样本以海水青鳉为例，分5组，每组3个平行进行养鱼实验，实验结束每个平行取3尾鱼样品测定，每组测定3x3＝9个数据，将每组9个数据数理统计后得到每组鱼的GPX活性大小。各组菲浓度分别为0、250、500、750、1000μg/L，养殖条件是本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用鱼的GPX活性检测水体污染程度的方法，其特征在于，获取需要检测的水域中的鱼，并采用所述鱼的GPX作为敏感生物标记物。

【技术特征摘要】
1.一种利用鱼的GPX活性检测水体污染程度的方法，其特征在于，获取需要检测的水域中的鱼，并采用所述鱼的GPX作为敏感生物标记物。2.根据权利要求1所述的利用鱼的GPX活性检测水体污染程度的方法，其特征在于，所述鱼的GPX活性与水体中菲的浓度呈负相关。3.根据权利要求1所述的利用鱼的GPX活性检测水体污染程度的方法，其特征在于，所述鱼的GPX活性与水体中多氯联苯的浓度呈负相关。4.根据权利要求1-3任一项所述的利用鱼的GPX活性检测水体污染程度的方法，其特征在于，建立鱼的GPX活性与污染物浓度关系的标准曲线，然后将待检测水域中的同种同大小的鱼的GPX活性与所述标准曲线比对，得到待检测水域中水体污染物浓度。5.根据权利要求4所述的利用鱼的GPX活性检测水体污染程度的方法，其特征在于，所述标准曲线为鱼的GPX活性与菲浓度关系的曲线，或者鱼的GPX活性与多氯联苯浓度关系的曲线。6.根据权利要求5所述的利用鱼的GPX活性检测水体污染程度的方法，其特征在于，所述鱼的GPX活性测定包括如下步骤：步骤一、待测样本处理：制备全鱼匀浆，然后离心分层，取上层清液为待测样本；步骤二、待测样本蛋白浓度的测定：分别将等量的双蒸水、蛋白标准品和待测样本加入1、2、3号管中，并分别向各管加入等量的考马斯亮蓝显色剂，分别混匀，静置，预热，用分光光度计并用双蒸水调零后，于1cm光径，在波长595nm处，测定1、2、3号管中物质的光密度，分别记为1号OD值，2号OD值，3号OD值，然后代入如下公式计算得待测样本蛋白浓度:步骤三、酶促反应：使用谷胱甘肽过氧化物酶测定试剂盒进行测定，分别在对照管和测定管中加入0.2mL浓度为1mmol/L的谷胱甘肽，只在测定管中加入0.2mL待测样本，...

【专利技术属性】
技术研发人员：许友卿，丁兆坤，刘阳，刘富娟，李云杰，张仁珍，
申请(专利权)人：广西大学，
类型：发明
国别省市：广西;45