一种除臭用EM菌液制备方法技术

本发明专利技术公开一种除臭用EM菌液制备方法，将常规的EM菌种分为DFA和DFB两个部分，分别在糖蜜培养基中培养48小时；其中：DFA培养温度为37℃，不通气培养；DFB培养温度为30℃，通气培养；培养后DFA和DFB按9:1的体积比混合，随后，30℃密闭发酵，培养24h，即得除臭用EM菌液。本发明专利技术在垃圾处理、畜牧养殖、污水处理等过程中除臭用的EM菌液制备方法，该菌液中活菌总数不低于109cfu/mL。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及微生物制剂领域，尤其是一种用于垃圾除臭的EM菌液制备方法。
技术介绍
EM菌(Effective Microorganisms)是由多种有益微生物（主要是光合细菌、乳酸菌、酵母菌、丝状真菌和放线菌）复合而成的有机组合，可在使用处形成良好的微生态环境，因而可以应用于环保、种植、畜牧、水产、饲料及人体家庭保健等方面，起到抑制病原菌、除异臭、改良土壤、改善水质、增强抗病性、促生长、改善产品品质等功效。目前，环保、种植、畜牧等行业所用的EM菌并没有本质上的差异，只是不同用户所使用的品牌不同，其中的微生物种类及各菌种比例差异不显著。这种同一性使EM菌的针对性使用效果不理想，或者使用量过大，使用成本较高。EM菌的菌种组成复杂，其中的光合细菌等多种微生物对除臭无作用，但在除臭过程中发挥重要作用的酵母、乳酸菌以及产生抗生素的微生物含量过低；而且由于菌种间的拮抗作用，传统的发酵方法生产的产品中菌体浓度通常较低，培养时间长，生产成本较高。市场急需一种专一性高、除臭效果好、用量少、成本低的EM菌产品。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种在垃圾处理、畜牧养殖、污水处理等过程中除臭用的EM菌液制备方法，该菌液中活菌总数不低于109cfu/mL。为了达成上述目的，本专利技术的技术方案如下：一种除臭用EM菌液制备方法，将常规的EM菌种分为DFA和DFB两个部分，分别在糖蜜培养基中培养48小时；其中：DFA培养温度为37℃，不通气培养；DFB培养温度为30℃，通气培养；培养后DFA和DFB按9:1的体积比混合，随后，30℃密闭发酵，培养24h，即得除臭用EM菌液。其中：DFA为不含酵母菌，以细菌和放线菌为主要成分的复合菌种；DFB为以酵母菌和丝状真菌为主要成分的复合菌种。本专利技术所使用的出发菌液为市售EM菌液。所述DFA的制备，包括以下步骤：取常规EM菌液4℃下静置30天后的上层液体按1%接种至无菌的糖蜜培养基（按质量百分比计，糖蜜 8%，蛋白胨 2%，K2HPO4 0.6%，CaCO3 3%，自然pH）中，按90%装液量装入锥形瓶中，密闭发酵，37℃振荡培养7天后显微镜检，取无酵母的样品作DFA组分一；取常规EM菌液按1%接种量接种至高温灭菌的LB培养基（按质量百分比计，胰蛋白胨1%，酵母提取物0.5%，Nacl 1%,培养基pH控制在7.4）中，按90%装液量装入锥形瓶中，密闭发酵，37℃振荡培养7天后传代，重复上述操作，取显微镜检无酵母菌的样品作组分二；利用LB固体培养基（按质量百分比计，胰蛋白胨1%，酵母提取物0.5%，Nacl 1%,琼脂1.0%~1.5%，培养基pH控制在7.4）与PDA培养基（按质量百分比计，马铃薯20%，葡萄糖2%，琼脂1.5%~2.0%，自然pH）分离常规EM中菌种，除酵母菌外，分别培养分离得到的菌株后按相同比例接种至无菌的糖蜜培养基中，按90%装液量装入锥形瓶中，密闭发酵，自然协调菌种比例，37℃振荡培养7天作为组分三；以上所得的三种无酵母发酵液均按3%接种量混合接种至高温灭菌的糖蜜培养基（培养基配方同前）中，按90%装液量装入锥形瓶中，密闭发酵，37℃振荡培养3天即得新鲜DFA，新鲜DFA与无菌保护液（蔗糖 100g/L、脱脂奶粉100g/L）等体积混合后-80℃真空冷冻干燥24h制成菌粉。所述DFB的制备：取常规EM菌液4℃下静置30天后的菌泥，按1%接种量接种至无菌的糖蜜培养基（培养基配方同前）中，按25%装液量装入锥形瓶中，通氧发酵，30℃振荡培养3天即得新鲜DFB，新鲜DFB与无菌保护液（蔗糖 100g/L、脱脂奶粉 100g/L）等体积混合后-80℃真空冷冻干燥24h制成菌粉。新鲜DFA菌液按2%量直接接种至无菌的糖蜜培养基（培养基配方同前）中，冻干菌粉需经种子培养（采用糖蜜培养基，培养基配方同前），90%装液量，1%接种量，37℃密闭振荡培养）24h后按10%量接种至无菌的糖蜜培养基（培养基配方同前）中，发酵罐装液量为70%，密闭发酵，每隔24小时搅拌10分钟（搅拌时打开放气阀放出气体，防止过压），37℃培养48小时；新鲜DFB菌液按2%量直接接种至无菌的糖蜜培养基（培养基配方同前）中，冻干菌粉需经种子培养（采用糖蜜培养基，培养基配方同前），25%装液量，1%接种量，30℃通气振荡培养）24h后按10%量接种至无菌的糖蜜培养基（培养基配方同前）中，30℃通气搅拌/振荡培养48小时；发酵后的DFA和DFB按9:1（V/V）混合后按70%装液量装入发酵罐或无菌密闭容器，30℃密闭发酵，每隔6小时搅拌10分钟（搅拌时打开放气阀放出气体，防止过压）培养24h即得除臭用EM菌液。本专利技术使用时，根据待处理样品差异选择不同的使用方法。待处理样品为固体，如垃圾、粪便或养殖场时，将除臭用EM菌液用20-30℃温水稀释10倍，静置1h后喷洒表面，按照其臭味浓烈程度，原液使用量为待处理样品质量的0.1%-1%。待处理样品为液体，如生活污水、便池、工业废水等时，将除臭用EM菌液用20-30℃温水稀释3倍，静置1h后倾倒至待处理液体中，按照其臭味浓烈程度，原液使用量为待处理样品质量的0.001%-0.1%。本专利技术菌液中酵母类真菌占总微生物比例为市售EM菌液中的10倍以上。本专利技术通过通气培养，将酵母菌和霉菌等在除臭过程中起主要作用的好氧菌从EM菌中分离出来制成DFB，不含酵母菌的EM菌不通气培养制成DFA，DFA和DFB分别培养至高菌体浓度后复配培养制成除臭用EM菌，稀释后喷洒或倾倒至待处理样品中。本专利技术的有益效果是：（1）菌体浓度高；在培养的前48h内无酵母菌和其他菌株间营养的竞争以及代谢产物（乙醇、乙酸和乳酸等）所导致的相互之间的抑制作用，并为生长需求不同的菌种提供了不同的培养条件，使菌体生长旺盛，成品中活菌总数可达109数量级以上。（2）生产周期短，72小时即可完成发酵。（3）提高了对除臭有显著效果的酵母和霉菌的比例，经检测，本产品菌液中酵母类真菌占总微生物比例为市售EM菌液中的10倍以上，增强了EM菌的除臭效果。具体实施方式实施例一：液体菌种制备与发酵。步骤一、DFA的制备：1、取EM菌液500mL，分装至25支无菌试管中，密封于4℃下静置30天后的取上层液体按1%分别接种至无菌的糖蜜培养基中，按90%装液量装入锥形瓶中，每组2个平行样，密闭发酵，37℃振荡培养7天后显微镜检，得到无酵母的样品按相同体积比混合后作为组分一。2、取EM菌液按1%接种量接种至高温灭菌的LB培养基中，按90%装液量装入锥形瓶中，每组10个平行样，密闭发酵，37℃振荡培养7天后传代，重复上述操作至第三次传代得到2个镜检无酵母菌样品混合作为组份二。3、利用LB固体培养基与PDA培养基分离纯化EM中菌种，得到15株细菌、2株放线菌、8株霉菌、1株酵母菌，除酵母菌与霉菌外，分别在LB液体培养基中培养48h后按0.5%（V/V）接种至无菌的糖蜜培养基中，按90%装液量装入锥形瓶中，密闭发酵，自然协调菌种比例，37℃振荡培养7天作为组分三。以上所得的三种无酵母发酵液均按3%接种量混合接种至无菌的糖蜜培养基中，按90%装液量装入锥形瓶中，密闭发酵，37℃，100rpm振荡培养7天得DFA。步骤二、DFB的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种除臭用EM菌液制备方法，其特征在于：将常规的EM菌种分为DFA和DFB两个部分，分别在糖蜜培养基中培养48小时；其中：DFA培养温度为37℃，不通气培养；DFB培养温度为30℃，通气培养；培养后DFA和DFB按9:1的体积比混合，随后，30℃密闭发酵，培养24h，即得除臭用EM菌液。

【技术特征摘要】
1.一种除臭用EM菌液制备方法，其特征在于：将常规的EM菌种分为DFA和DFB两个部分，分别在糖蜜培养基中培养48小时；其中：DFA培养温度为37℃，不通气培养；DFB培养温度为30℃，通气培养；培养后DFA和DFB按9:1的体积比混合，随后，30℃密闭发酵，培养24h，即得除臭用EM菌液。2.如权利要求1所述的一种除臭用EM菌液制备方法，其特征在于：DFA为不含酵母菌，以细菌和放线菌为主要成分的复合菌种；DFB为以酵母菌和丝状真菌为主要成分的复合菌种。3.如权利要求1所述的一种除臭用EM菌液制备方法，其特征在于：常规的EM菌液为市售EM菌液。4.如权利要求1所述的一种除臭用EM菌液制备方法，其特征在于：所述DFA的制备包括以下步骤：取常规EM菌液4℃下静置30天后的上层液体按1%接种至无菌的糖蜜培养基中，按90%装液量装入锥形瓶中，密闭发酵，37℃振荡培养7天后显微镜检，取无酵母的样品作DFA组分一；取常规EM菌液按1%接种量接种至高温灭菌的LB培养基中，按90%装液量装入锥形瓶中，密闭发酵，37℃振荡培养7天后传代，重复上述操作，取显微镜检无酵母菌的样品作组分二；利用LB固体培养基与PDA培养基分离常规EM中菌种，除酵母菌外，分别培养分离得到的菌株后按相同比例接种至无菌的糖蜜培养基中，按90%装液量装入锥形瓶中，密闭发酵，自然协调菌种比例，37℃振荡培养7天作为组分三；以上所得的三种组分无酵母发酵液均按3%接种量混合接种至高温灭菌的糖蜜培养基中，按90%装液量装入锥形瓶中，密闭发酵，37℃振荡培养3天即得新鲜DFA，新鲜DFA与无菌保护液等体积混合后-80℃真空冷冻干燥24h制成菌粉。5.如权利要求4所述的一种除臭用EM菌液制备方法，其特征在于：LB培养基，按质量百分比计，含胰蛋白胨1%，酵母提取物0.5%，Nacl 1%,培养基pH控制在7.4。6.如权利要求4所述的一种除臭用EM菌液制备...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖玉娟，傅奇，庄峙厦，何少贵，林慧霞，郝春莉，黄华斌，
申请(专利权)人：厦门华厦学院，
类型：发明
国别省市：福建;35