人子宫内膜癌细胞系及其应用制造技术

本发明专利技术公开了人子宫内膜癌细胞系及其应用，其命名为人子宫内膜癌细胞系ZJB‑ENC1，于2016年06月16日保藏于武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2016118。本发明专利技术人子宫内膜癌细胞系的分型不同于现有常见的人子宫内膜癌细胞系，可长期在体外传代培养，大量扩增；具有较强的增殖活性及裸鼠成瘤能力，可为研究者深入开展子宫内膜癌的病因学、转移机制、耐药机理、新药筛选等提供新的实验模型。

Human endometrial carcinoma cell line and its application

The present invention discloses application of human endometrial cancer cell line, named ZJB ENC1 human endometrial cancer cell line, 06 2016 to 16 August is preserved in the Wuhan University China type culture collection center, the preservation number is CCTCC NO:C2016118. The type of endometrial cancer cell line is different from the existing common human endometrial cancer cell lines, long-term in vitro culture, a large number of amplification; has strong proliferation and tumorigenicity in nude mice, researchers can carry out the endometrial cancer etiology, transfer mechanism, the mechanism of drug resistance, drug screening as a new experimental model.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于细胞系领域，具体涉及人子宫内膜癌细胞系及其应用。
技术介绍
子宫内膜癌是女性生殖道三大恶性肿瘤之一，占妇女肿瘤疾病发病的6％，每年有接近20万的新发病例，近年来发病率在世界范围呈上升趋势，其病因至今不是十分清楚。女性对生命期望值的延长及不断增高的发病率都提示我们揭示其致病机理是亟待解决的问题。人子宫内膜腺癌细胞系的建立，为了解肿瘤的生物学特性、研究其癌变、分子遗传以及转移演变机制等提供了丰富的实验材料，可以为肿瘤机理方面的研究和化疗耐药机制相关研究等做出贡献。由于子宫内膜癌细胞的纯化及体外大量扩增在技术上存在一定的难度，相对于子宫内膜癌表型的多样性及肿瘤异质性，目前已建立的子宫内膜癌细胞系仍然十分有限。而实际作为重要研究工具的相应细胞系非常少见，目前子宫内膜癌常用永生细胞系主要为KLE、HHUA、HEC-1-A、JEC、HEC-1-B、Ishikawa等，这些子宫内膜癌细胞系建立时间也比较早。近年来，新的基因标志物不断涌现，如PTEN等，这些新的标志物在子宫内膜癌预后方面有了进一步的研究。因此，建立新的子宫内膜癌细胞系，以丰富和完备子宫内膜癌细胞系库，为研究肿瘤异质性提供合适的体外模型，以促进子宫内膜癌的基础和临床研究，是非常有必要的。
技术实现思路
针对现有的人子宫内膜癌细胞系的生物多样性低的问题，尤其是近年来新的人子宫内膜癌细胞系少见而无法满足新的研究的需要的问题，本专利技术提供了一种新的人子宫内膜癌细胞系及其应用，该新的人子宫内膜癌细胞系的分型不同于现有常见的人子宫内膜癌细胞系，能够稳定传代、成瘤性好，且能大量扩增和长期在体外传代培养，适用于建立动物模型。本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案是：一种人子宫内膜癌细胞系，命名为人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1，于2016年06月16日保藏在于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：C2016118。本专利技术还提供如上所述的人子宫内膜癌细胞系的子代细胞系。在本专利技术的一些实施例中，如上所述的人子宫内膜癌细胞系或其子代细胞系表达PTEN蛋白。本专利技术还提供如上所述的人子宫内膜癌细胞系或其子代细胞系的用途，用于在哺乳动物中产生子宫内膜癌瘤块。所述的哺乳动物可以是各种哺乳动物，优选裸鼠。所述的裸鼠优选BALB/c裸鼠。本专利技术还提供如上所述的人子宫内膜癌细胞系或其子代细胞系在作为子宫内膜癌发生、子宫内膜癌发展或子宫内膜癌转移的细胞模型中的应用。本专利技术还提供如上所述的人子宫内膜癌细胞系或其子代细胞系在建立子宫内膜癌动物模型中的应用。本专利技术还提供如上所述的人子宫内膜癌细胞系或其子代细胞系在研究子宫内膜癌发生机理、耐药机理或筛选治疗子宫内膜癌癌药物中的应用。一种筛选治疗子宫内膜癌的候选药物的方法，包括以下步骤：测试组中，在含如上所述的人子宫内膜癌细胞系或其子代细胞系的培养体系中添加不同浓度的测试化合物，并观察子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1的数量和/或生长情况；在对照组中，在含如上所述的人子宫内膜癌细胞系或其子代细胞系的培养体系中不添加测试化合物，并观察子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1的数量和/或生长情况；其中，如果测试组中子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1的数量或生长速度小于对照组，就表明该测试化合物是对子宫内膜癌细胞的生长或增殖有抑制作用的治疗子宫内膜癌的候选药物。本专利技术中，从中-低分化的子宫内膜癌患者原发灶分离并建立了一种子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1，持续稳定培养至今，已稳定传代数50代以外。本专利技术通过光学形态观察发现该人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1具有较好的贴壁性，且细胞性状稳定，可稳定多次传代。该人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1的病理学鉴定表明其与标本组织形态相同、核分裂像比较多，为癌组织来源细胞，且为中低分化细胞株，区别于现有子宫内膜癌常用细胞株。该人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1的雌激素受体(estrogen receptor，ER)、孕激素受体(Progesterone receptor，PR)、与张力蛋白同源在10号染色体有缺失的磷酸酶基因(phosphataseandtensinho－mologdeletedfromchromosome10，PTEN)免疫组化分析结果为：ER表达阴性，PR表达阴性，PTEN强阳性表达，明显区别于现有子宫内膜癌常用细胞株。通过对该人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1进行遗传物质STR分析，并在数据库中进行STR序列检索，未发现与该细胞匹配的位点，鉴定其为新的单一细胞株。同时，本专利技术研究还表明该人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1大量扩增，具有较强的增殖活性，具有非常强的裸鼠成瘤能力，其病理学鉴定表明裸鼠体内成瘤与该人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1、临床肿瘤组织标本形成对应关系，而裸鼠体内成瘤的ER、PR、PTEN免疫组化分析结果与该人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1相同。综合可见，本专利技术人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1作为新的单一细胞株，与现有子宫内膜癌细胞株表型差异大，可作为有效的研究细胞模型；同时，其能够稳定传代、成瘤性好，且能大量扩增和长期在体外传代培养，可以成功制备子宫内膜癌动物模型。PTEN在ZJB-ENC1中具有稳定的阳性表达，为子宫内膜癌研究提供新的更接近于临床肿瘤生物学特性的实验材料，也提示该细胞系可以作为相关机制的研究模型。ZJB-ENC1还可为化疗耐药机制相关研究提供了有效的模型。因此，本专利技术人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1可为研究者深入研究子宫内膜癌的发病机理、转移机理、发病和转移的特征生物标志物筛选、耐药机理、新药筛选等提供新的实验模型，是人子宫内膜癌基础研究和临床前期应用的理想细胞系。相比于现有技术，本专利技术的有益效果如下：(1)本专利技术的人子宫内膜癌细胞ZJB-ENC1具有较好的贴壁性，且细胞性状稳定，可稳定多次传代。(2)本专利技术的人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1经STR鉴定为新的单一细胞株。(3)本专利技术的人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1的ER、PR均缺失，表达为阴性，其分型明显不同于现细胞库常用子宫内膜癌细胞株(ER均为阳性)，为人子宫内膜癌研究提供新的与临床肿瘤生物学特性接近的实验材料。(4)本专利技术的人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1为中低分化细胞株，分化等级区别于现有子宫内膜癌常用细胞株(中分化或高分化)，丰富中低分化细胞库。(5)本专利技术的人子宫内膜癌细胞系PTEN呈强阳性表达，不同于常用株Ishikawa的PTEN活性缺失，由于PTEN对于子宫内膜异位症恶变及内膜癌发生扮演着重要角色，且PTEN与P53同为重要的抑癌基因，故而，本专利技术的人子宫内膜癌细胞系可作为有效的靶点研究细胞株。(6)相对于现有技术，本专利技术的人子宫内膜癌细胞系具有非常强的体外成瘤能力，可以成功制备子宫内膜癌动物模型，以用于基础研究及药物筛选。本专利技术中，35天瘤径达29mm；而现有细胞系中，该数值通常为10mm。生物材料的保藏本专利技术的人子宫内膜癌细胞，命名为人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1，于2016年06月16日保藏在于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址为：中国.武汉.武汉大学，邮编：430072))，保藏编号为CCTCC NO：C201本文档来自技高网...

【技术保护点】
人子宫内膜癌细胞系，其特征在于，命名为人子宫内膜癌细胞系ZJB‑ENC1，保藏编号为CCTCC NO：C2016118。

【技术特征摘要】
1.人子宫内膜癌细胞系，其特征在于，命名为人子宫内膜癌细胞系ZJB-ENC1，保藏编号为CCTCC NO：C2016118。2.如权利要求1所述人子宫内膜癌细胞系的子代细胞系。3.如权利要求1所述人子宫内膜癌细胞系或如权利要求2所述子代细胞系，其特征在于，所述的人子宫内膜癌细胞系或子代细胞系表达PTEN蛋白。4.如权利要求1所述人子宫内膜癌细胞系或如权利要求2所述子代细胞系的用途，其特征在于，所述的人子宫内膜癌细胞系或子代细胞系用于在哺乳动物中产生子宫内膜癌瘤块。5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述的哺乳动物是裸鼠。6.如权利要求1所述人子宫内膜癌细胞系或如权利要求2所述子代细胞系在作为子宫内膜癌发生、子宫内膜癌发展或子宫内膜癌转移的细胞模型中的应用。7.如权利要求1所述人子宫内膜癌细胞系或如权利要求2所述子代细胞系在建立子宫内膜癌...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘小珍，郑智国，凌志强，葛明华，孙文勇，徐海苗，孙薇，戴雅兰，韩静，龚万钢，泮晓丹，魏海滨，
申请(专利权)人：浙江省肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：浙江;33