一种小驳骨有效部位的制备方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种小驳骨有效部位的制备方法及其应用，有效解决小驳骨抗乳腺癌作用的有效部位的制备，实现小驳骨应用在制备抗癌药物中的问题，将小驳骨药材用乙醇回流提取3次，加蒸馏水混悬，然后依次加入混悬液等体积的石油醚、乙酸乙酯分别各萃取3次，合并乙酸乙酯萃取部位，减压回收溶剂后，加蒸馏水混悬，过大孔吸附树脂AB‑8柱色谱，用乙醇洗脱，回收溶剂后得到稠膏，即为小驳骨的有效部位，本发明专利技术制备工艺简单，易操作，所制备得到的小驳骨有效部位对乳腺癌细胞具有较强的生长抑制作用，且能够显著增加乳腺癌细胞MCF‑7中caspase3 mRNA的表达水平，是小驳骨有效部位制备和应用上的创新。

Method for preparing effective part of small bone and its application

The invention relates to a small gendarussa effective part preparation method and application thereof, effectively solve the effective parts of small gendarussa anti breast cancer effect of the preparation, implementation of small gendarussa application preparation of anticancer drugs in the system, the small gendarussa herbs with ethanol reflux extraction 3 times, adding distilled water suspension and then added with petroleum ether and ethyl acetate suspension volume of each extraction 3 times with ethyl acetate extraction, solvent recovery after decompression, distilled water suspension, macroporous adsorption resin AB 8 column chromatography, ethanol elution, solvent recovery after the paste, is the small barge the effective part of the bone, the preparation process is simple and easy to operate, the prepared small gendarussa effective part has strong inhibitory effect on the growth of breast cancer cells, and the expression can significantly increase the breast cancer cell line MCF 7 Caspase3 mRNA It is the innovation of the preparation and application of the effective part of the small bone.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及中药制药领域，特别是一种小驳骨有效部位的制备方法及其应用。
技术介绍
恶性肿瘤是一种严重威胁人类健康和生命的常见病、多发病。现今，癌症已成为全世界首要的致死病因。乳腺癌通常发生在乳房腺上皮组织的恶性肿瘤，已经成为严重威胁中青年妇女健康和生命的主要疾病之一，发病率较高，多见于40-60岁之间绝经期前后的妇女，全国每年新发乳腺癌的人数约100万以上。目前治疗乳腺癌的药物虽很多，均具有较强的毒副作用，其中以减退消化功能和抑制骨髓造血功能最为明显，往往使乳腺癌患者难以坚持完成整个化疗过程，难以彻底治愈。同时长期用药以后，出现多药耐药现象，这也是制约乳腺癌成功治疗的主要障碍。中草药在抗肿瘤方面的应用历史悠久，从中草药中寻找选择性强、毒副作用低的新型抗乳腺癌药物是药学科研工作者迫切解决的首要问题。小驳骨为爵床科植物小驳骨(Gendarussa vulgaris Nees)的干燥地上部分。广泛分布于我国广西、广东、海南等省。具有祛瘀镇痛、续筋接骨之功效，主要用于跌打损伤、筋伤骨折、风湿骨痛、血瘀经闭及产后腹痛。在我国已有较长的应用历史，在《本草纲目拾遗》、《生草药性备要》、《岭南采药录》、《陆川本草》等医药古籍中均有记载。2010年作为新增药材，收载于《中华人民共和国药典》。近年来关于小驳骨化学成分及生物活性的研究受到国内外学者的广泛关注，化学成分主要包括生物碱、黄酮、香豆素、三萜等类型。生物活性研究表明，具有抗炎止痛、保肝、免疫抑制、抗血管生成、抗人获得性免疫缺陷病毒、驱虫、抗焦虑、抗氧化等作用。但至今尚未见到有关小驳骨药材在抗癌方面的公开报道。专利技术内容针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本专利技术之目的就是提供一种小驳骨有效部位的制备方法及其应用，可有效解决小驳骨抗乳腺癌作用的有效部位的制备，实现小驳骨应用在制备抗癌药物中的问题。解决的技术方案是：一种小驳骨有效部位的制备方法，包括以下步骤：将小驳骨药材每次用5-10倍药材重量的体积浓度90-98%的乙醇回流提取3次，提取温度为90-95℃，每次提取时间为为1-2h，合并滤液，将滤液在45-55℃下减压回收乙醇至无醇味，加蒸馏水混悬至相对密度为1.1-1.2的混悬液，然后依次加入混悬液等体积的石油醚、乙酸乙酯分别各萃取3次，合并乙酸乙酯萃取部位，减压回收溶剂后，加蒸馏水混悬至相对密度为1.1-1.5的混悬液，将上述混悬液，过大孔吸附树脂AB-8柱色谱，依次用4倍量色谱柱体积的体积浓度10%的乙醇和2倍量色谱柱体积的体积浓度95%的乙醇洗脱，收集95%乙醇洗脱部分，回收溶剂后得到稠膏，即为小驳骨的有效部位。小驳骨有效部位作为唯一活性部位在制备抗乳腺癌药物中的应用。本专利技术制备工艺简单，易操作，所制备得到的小驳骨有效部位对乳腺癌细胞具有较强的生长抑制作用，且能够显著增加乳腺癌细胞MCF-7中caspase3 mRNA的表达水平，必要时按照常规方法可将其制备成常规的中药片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂等制剂，是小驳骨有效部位制备和应用上的创新。具体实施方式以下结合实施例对本专利技术的具体实施方式作详细说明。实施例1 一种小驳骨有效部位的制备方法，包括以下步骤：将小驳骨药材2.5Kg每次用8倍药材重量的体积浓度95%的乙醇回流提取3次，提取温度为95℃，3次提取时间分别为2h、1.5h、1h，分别过滤后，合并滤液，将滤液在45℃下减压回收乙醇至无醇味，加蒸馏水混悬至相对密度为1.1的混悬液，然后依次加入混悬液等体积的石油醚、乙酸乙酯分别萃取3次，合并乙酸乙酯萃取部位，减压回收溶剂后，加蒸馏水混悬至相对密度为1.2的混悬液，将上述混悬液，过大孔吸附树脂AB-8柱色谱，依次用4倍量色谱柱体积的体积浓度10%的乙醇和2倍量色谱柱体积的体积浓度95%的乙醇洗脱，收集95%乙醇洗脱部分，回收溶剂后得到稠膏，即为小驳骨有效部位。实施例2一种小驳骨有效部位的制备方法，包括以下步骤：将小驳骨药材3.5Kg每次用7倍药材重量的体积浓度90%的乙醇回流提取3次，提取温度为90℃，3次提取时间分别为2h、1.5h、1h，分别过滤后，合并滤液，将滤液在55℃下减压回收乙醇至无醇味，加蒸馏水混悬至相对密度为1.2的混悬液，然后依次加入混悬液等体积的石油醚、乙酸乙酯分别萃取3次，合并乙酸乙酯萃取部位，减压回收溶剂后，加蒸馏水混悬至相对密度为1.2的混悬液，将上述混悬液，过大孔吸附树脂AB-8柱色谱，依次用4倍量色谱柱体积的体积浓度10%的乙醇和2倍量色谱柱体积的体积浓度95%的乙醇洗脱，收集95%乙醇洗脱部分，回收溶剂后得到稠膏，即为小驳骨有效部位。实施例3一种小驳骨有效部位的制备方法，包括以下步骤：将小驳骨药材1.5Kg每次用6倍药材重量的体积浓度92%的乙醇回流提取3次，提取温度为93℃，3次提取时间分别为2h、1.5h、1h，分别过滤后，合并滤液，将滤液在50℃下减压回收乙醇至无醇味，加蒸馏水混悬至相对密度为1.1的混悬液，然后依次加入混悬液等体积的石油醚、乙酸乙酯分别萃取3次，合并乙酸乙酯萃取部位，减压回收溶剂后，加蒸馏水混悬至相对密度为1.3的混悬液，将上述混悬液，过大孔吸附树脂AB-8柱色谱，依次用4倍量色谱柱体积的体积浓度10%的乙醇和2倍量色谱柱体积的体积浓度95%的乙醇洗脱，收集95%乙醇洗脱部分，回收溶剂后得到稠膏，即为小驳骨有效部位。实施例4一种小驳骨有效部位的制备方法，包括以下步骤： 将小驳骨药材2.0Kg每次用7倍药材重量的体积浓度94%的乙醇回流提取3次，提取温度为94℃，3次提取时间分别为2h、1.5h、1h，分别过滤后，合并滤液，将滤液在50℃下减压回收乙醇至无醇味，加蒸馏水混悬至相对密度为1.2的混悬液，然后依次加入混悬液等体积的石油醚、乙酸乙酯分别萃取3次，合并乙酸乙酯萃取部位，减压回收溶剂后，加蒸馏水混悬至相对密度为1.4的混悬液，将上述混悬液，过大孔吸附树脂AB-8柱色谱，依次用4倍量色谱柱体积的体积浓度10%的乙醇和2倍量色谱柱体积的体积浓度95%的乙醇洗脱，收集95%乙醇洗脱部分，回收溶剂后得到稠膏，即为小驳骨有效部位。实施例5一种小驳骨有效部位的制备方法，包括以下步骤：将小驳骨药材1.8Kg每次用5倍药材重量的体积浓度98%的乙醇回流提取3次，提取温度为90℃，3次提取时间分别为2h、1.5h、1h，分别过滤后，合并滤液，将滤液在48℃下减压回收乙醇至无醇味，加蒸馏水混悬至相对密度为1.1的混悬液，然后依次加入混悬液等体积的石油醚、乙酸乙酯分别萃取3次，合并乙酸乙酯萃取部位，减压回收溶剂后，加蒸馏水混悬至相对密度为1.5的混悬液，将上述混悬液，过大孔吸附树脂AB-8柱色谱，依次用4倍量色谱柱体积的体积浓度10%的乙醇和2倍量色谱柱体积的体积浓度95%的乙醇洗脱，收集95%乙醇洗脱部分，回收溶剂后得到稠膏，即为小驳骨有效部位。上述方法制备的小驳骨有效部位可用常规方法制备成抗乳腺癌的片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂粉等剂型。本专利技术方法稳定可靠，其制备得到的小驳骨有效部位经多次反复试验，对人乳腺癌细胞MCF-7具有较强的生长抑制作用，作为唯一活性部位有效，用于制备抗乳腺癌药物中的应用，并经实验得到证明，有关实验资料如下：1. 实验材料人乳腺癌细胞株M本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种小驳骨有效部位的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将小驳骨药材每次用5‑10倍药材重量的体积浓度90‑98%的乙醇回流提取3次，提取温度为90‑95℃，每次提取时间为为1‑2h，合并滤液，将滤液在45‑55℃下减压回收乙醇至无醇味，加蒸馏水混悬至相对密度为1.1‑1.2的混悬液，然后依次加入混悬液等体积的石油醚、乙酸乙酯分别各萃取3次，合并乙酸乙酯萃取部位，减压回收溶剂后，加蒸馏水混悬至相对密度为1.1‑1.5的混悬液，将上述混悬液，过大孔吸附树脂AB‑8柱色谱，依次用4倍量色谱柱体积的体积浓度10%的乙醇和2倍量色谱柱体积的体积浓度95%的乙醇洗脱，收集95%乙醇洗脱部分，回收溶剂后得到稠膏，即为小驳骨的有效部位。

【技术特征摘要】
1.一种小驳骨有效部位的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将小驳骨药材每次用5-10倍药材重量的体积浓度90-98%的乙醇回流提取3次，提取温度为90-95℃，每次提取时间为为1-2h，合并滤液，将滤液在45-55℃下减压回收乙醇至无醇味，加蒸馏水混悬至相对密度为1.1-1.2的混悬液，然后依次加入混悬液等体积的石油醚、乙酸乙酯分别各萃取3次，合并乙酸乙酯萃取部位，减压回收溶剂后，加蒸馏水混悬至相对密度为1.1-1.5的混悬液，将上述混悬液，过大孔吸附树脂AB-8柱色谱，依次用4倍量色谱柱体积的体积浓度10%的乙醇和2倍量色谱柱体积的体积浓度95%的乙醇洗脱，收集95%乙醇洗脱部分，回收溶剂后得到稠膏，即为小驳骨的有效部位。2.根据权利要求1所述的一种小驳骨有效部位的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将小驳骨药材2.5Kg每次用8倍药材重量的体积浓度95%的乙醇回流提取3次，提取温度为95℃，3次提取时间分别为2h、1.5h、1h，分别过滤后，合并滤液，将滤液在45℃下减压回收乙醇至无醇味，加蒸馏水混悬至相对密度为1.1的混悬液，然后依次加入混悬液等体积的石油醚、乙酸乙酯分别萃取3次，合并乙酸乙酯萃取部位，减压回收溶剂后，加蒸馏水混悬至相对密度为1.2的混悬液，将上述混悬液，过大孔吸附树脂AB-8柱色谱，依次用4倍量色谱柱体积的体积浓度10%的乙醇和2倍量色谱柱体积的体积浓度95%的乙醇洗脱，收集95%乙醇洗脱部分，回收溶剂后得到稠膏，即为小驳骨有效部位。3.根据权利要求1所述的一种小驳骨有效部位的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将小驳骨药材3.5Kg每次用7倍药材重量的体积浓度90%的乙醇回流提取3次，提取温度为90℃，3次提取时间分别为2h、1.5h、1h，分别过滤后，合并滤液，将滤液在55℃下减压回收乙醇至无醇味，加蒸馏水混悬至相对密度为1.2的混悬液，然后依次加入混悬液等体积的石油醚、乙酸乙酯分别萃取3次，合并乙酸乙酯萃取部位，减压回收溶剂后，加蒸馏水混悬至相对密度为1.2的混悬液，将上述混悬液，过大孔吸附树脂AB-8柱色谱，依次用4倍量色谱柱体积的体积浓度10%的乙醇和2倍量色谱柱体积的体积浓度95%的乙醇洗脱，收集95%乙醇洗脱部分，回收溶剂后得到稠膏，即为小驳骨有效部位。4.根据权利要求1所述的一种小驳骨有效部位的制备方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙彦君，裴莉昕，付露，宋军营，冯卫生，郝志友，高美玲，陈辉，弓建红，纪宝玉，沈继朵，
申请(专利权)人：河南中医药大学，
类型：发明
国别省市：河南;41