【技术实现步骤摘要】
一、本专利技术涉及药用植物基因工程领域，特别是一种艾叶单萜合酶aatps46及其相关生物材料与应用。
技术介绍
0、二、
技术介绍
1、艾叶为菊科蒿属植物艾artemisia argyi levl.et vant.的干燥叶，通常在夏季花未开、叶茂盛时采摘，晒干。味辛、苦，性温，有小毒，具有理气血、逐寒湿、温经、止血、安胎等功效。艾分布于我国大部分地区，以及朝鲜半岛、日本、蒙古等亚洲东部。在我国，艾主产于河南、湖北、湖南、安徽、山东、河北等省。河南的“汤阴北艾”“南阳艾”、河北“祁艾”和湖北“蕲艾”都以质优而闻名。艾叶挥发油是艾发挥疗效的主要物质基础，具有明显的抗菌、抗病毒、抗炎、开窍、消肿止痛、止咳平喘等作用。
2、桉油精(1,8-cineole)又名1,8-桉叶(油)素，桉树脑等，是艾叶挥发油中含量较高且各产地共有的重要次生代谢产物，为2020版《中国药典》规定的含量测定项。桉油精具有广泛的生物活性，包括抑菌、抗炎、抗氧化以及促渗透作用，在医药、化妆品和香料工业领域皆有应用。近年来国内外对桉油精的抑菌、抗炎、镇痛、抗肿瘤、抗抑郁、神经保护、降血脂、防治糖尿病并发症等作用的研究日益深入，显示其尚有很大的开发潜力。
3、桉油精属于单环单萜化合物，通过胞浆的甲羟戊酸途径(mevalonic acid(mva)pathway)和质体的2-methyl-d-erythritol-4-phosphate(mep)途径生成萜类的通用底物异戊烯焦磷酸(isopentenyl pyrophosphate，ipp
技术实现思路
0、三、
技术实现思路
1、针对上述情况，为解决现有技术之缺陷，本专利技术之目的就是提供一种艾叶单萜合酶aatps46及其相关生物材料与应用，可得到新的参与单萜化合物合成的艾叶单萜合酶，以合成或制备桉油精。
2、本专利技术解决的技术方案是，该艾叶单萜合酶aatps46，来源于艾(artemisia argyilevl.et vant.)，是以下a)或b)或c)的蛋白质：
3、a)氨基酸序列是seq id no.1所示的蛋白质；
4、b)在seq id no.1所示的蛋白质的n端和/或c端连接标签得到的融合蛋白质；
5、c)将seq id no.1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质。
6、其中，seq id no.1由588个氨基酸残基组成。
7、上述蛋白质可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。
8、上述蛋白质中，蛋白标签(protein-tag)是指利用dna体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和/或纯化。所述蛋白标签可为flag标签、his标签、mbp标签、ha标签、myc标签、gst标签和/或sumo标签等。
9、上述蛋白质中，同一性是指氨基酸序列的同一性。可使用国际互联网上的同源性检索站点测定氨基酸序列的同一性，如ncbi主页网站的blast网页。例如，可在高级blast2.1中，通过使用blastp作为程序，将expect值设置为10，将所有filter设置为off，使用blosum62作为matrix，将gap existence cost，per residue gap cost和lambda ratio分别设置为11，1和0.85(缺省值)并进行检索一对氨基酸序列的同一性进行计算，然后即可获得同一性的值(％)。
10、上述蛋白质中，所述90％以上的同一性可为至少91％、92％、95％、96％、98％、99％或100％的同一性。
11、与aatps46的相关生物材料也在本专利技术的保护范围之内。
12、本专利技术提供的与aatps46的相关生物材料为下述a1)至a12)中的任一种：
13、a1)编码aatps46的核酸分子；
14、a2)含有a1)所述核酸分子的表达盒；
15、a3)含有a1)所述核酸分子的重组载体；
16、a4)含有a2)所述表达盒的重组载体；
17、a5)含有a1)所述核酸分子的重组微生物；
18、a6)含有a2)所述表达盒的重组微生物；
19、a7)含有a3)所述重组载体的重组微生物；
20、a8)含有a4)所述重组载体的重组微生物；
21、a9)含有a1)所述核酸分子的转基因植物细胞系；
22、a10)含有a2)所述表达盒的转基因植物细胞系；
23、a11)含有a3)所述重组载体的转基因植物细胞系；
24、a12)含有a4)所述重组载体的转基因植物细胞系。
25、上述生物材料中，a1)所述核酸分子为以下b1)-b3)任一所示dna分子：
26、b1)seq id no.2第1-1767位所示的dna分子；
27、b2)编码序列是seq id no.2所示的dna分子；
28、b3)在严格条件下与b1)或b2)限定的dna分子杂交，且编码aatps46的dna分子。
29、其中，seq id no.2由1767个核苷酸组成，编码seq id no.1所示的蛋白质。
30、所述的严格条件是在2×ssc，0.1％ sds的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次5min，又于0.5×ssc，0.1％ sds的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次15min。
31、其中，所述的核酸分子可以为dna，如cdna、基因组dna或重组dna，所述核酸分子也可以为rna，如mrna或hnrna。
32、上述生物材料中，a2)所述的含有编码aatps46的核酸分子的表达盒(aatps46基因表达盒)，是指能够在宿主细胞中表达aatps46的dna，该dna不但可包括启动aatps46转录的启动子，还可包括终止aatps46转录的终止子。进一步，所述表达盒还可包括增强子序列。
33、上述生物材料中，所述的重组载体可为质粒、黏粒、噬菌体或病毒载体。
34、上本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种艾叶单萜合酶AaTPS46，其特征在于，是以下a）或b）或c）的蛋白质：
2.与权利要求1所述的艾叶单萜合酶AaTPS46相关的生物材料，其特征在于，为下述A1）至A12）中的任一种：
3.根据权利要求2所述的艾叶单萜合酶AaTPS46相关的生物材料，其特征在于，A1）所述的核酸分子为如下1）或2）或3）所示的基因：
4.权利要求1所述的艾叶单萜合酶AaTPS46在制备单萜合酶或单萜化合物中的应用。
5.权利要求2或3所述的艾叶单萜合酶AaTPS46相关的生物材料在制备单萜合酶或单萜化合物中的应用。
6.权利要求1所述的艾叶单萜合酶AaTPS46在催化香叶基焦磷酸形成桉油精中的应用。
7.权利要求2或3所述的艾叶单萜合酶AaTPS46相关的生物材料在催化香叶基焦磷酸形成桉油精中的应用。
8.一种单萜化合物的合成方法，其特征在于，将权利要求1所述的艾叶单萜合酶AaTPS46、底物和酶促缓冲液混匀，反应，得到单萜化合物。
9.根据权利要求8所述的单萜化合物的合成方法，其特征在于，所
10.一种单萜化合物的生物合成方法，其特征在于，将权利要求1所述的艾叶单萜合酶AaTPS46导入酿酒酵母，生物合成单萜化合物。
...【技术特征摘要】
1.一种艾叶单萜合酶aatps46，其特征在于，是以下a）或b）或c）的蛋白质：
2.与权利要求1所述的艾叶单萜合酶aatps46相关的生物材料，其特征在于，为下述a1）至a12）中的任一种：
3.根据权利要求2所述的艾叶单萜合酶aatps46相关的生物材料，其特征在于，a1）所述的核酸分子为如下1）或2）或3）所示的基因：
4.权利要求1所述的艾叶单萜合酶aatps46在制备单萜合酶或单萜化合物中的应用。
5.权利要求2或3所述的艾叶单萜合酶aatps46相关的生物材料在制备单萜合酶或单萜化合物中的应用。
6.权...
【专利技术属性】
技术研发人员：马蕊，陈随清，桂新景，薛淑娟，练从龙，张宝，刘英子，朱晔，
申请(专利权)人：河南中医药大学，
类型：发明
国别省市：
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